自身免疫性疾病检查抗核抗体与可提取的核抗原谱的临床意义

代方英

（山东省诸城市疾控中心，山东 诸城 262200）

抗核抗体（ANA）和可提取的核抗原（ENA）谱检测至今仍然是临床自身免疫性疾病检测中应用最多的项目，其在自身免疫疾病的诊断、检测中具有重要应用价值。我们对2007年12月至2010年5月在诸城市中医院门诊及住院2876例就诊患者临床标本的ANA和ENA谱检测，并对其结果进行分析。

1 标本来源与检验方法

1.1 一般资料

全部病例均为2007年12月至2010年5月在诸城市中医院门诊及住院疑似自身免疫性疾病的患者，共2876例，其中男798例，年龄9～85岁，平均43.4岁。女2078例，年龄9～89岁，平均44.1岁。

检验试剂由欧蒙（德国）医学实验诊断有限公司提供，其生产的ANA谱试剂可检测血清中或血浆中的ANA，ENA，dsDNA。ENA检测nRNP/Sm 、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、Jo-1等6种不同抗原的IgG类抗体。

检验样本全部病例取清晨空腹静脉血3ml，离心分离血清（3000r/min，10min），如果不能及时检测，将血清置-20℃冰柜保存待检。

1.2 检验方法

抗核抗体检测采用间接免疫荧光法，受检血清1∶100、1∶320和1∶1000稀释后分别与固定在载片上的细胞和组织基质进行反应，血清中ANA可与基质片中抗原结合形成抗原-抗体复合物，此时加入FITC标记的抗人IgG后，形成标记抗体-抗原-抗体复合物，在荧光显微镜下可观察到ANA着染荧光及其免疫荧光核型。

可提取的核抗原检测采用斑点法，标本用缓冲液1∶101倍稀释，在第一次温育时，已稀释的患者样本与膜条上的抗原反应。如果样本阳性，特异性的IgG抗体（也包括IgA和IgM）将与相应抗原结合。为检测已结合的抗体，加入酶标抗人IgG（酶结合物）进行第二次温育，然后加入原底物液以产生颜色反应。

抗双链DNA抗体检测采用间接免疫荧光法，待检血清样本用PBS吐温缓冲液1∶10稀释，包被有绿蝇短膜虫的生物薄片和稀释的血清样本温育。如果样本是阳性，特异性IgG、IgA和IgM抗体与鞭毛抗原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。

1.3 统计学分析

全部数据采用SPSS11.0进行统计分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 检验结果分析

在对2876例自身免疫性疾病患者进行ANA检测中，抗核抗体（ANA）阳性943例，阳性率32.78%，其中男性ANA阳性145例，阳性率为18.91%（176/765）；女性ANA阳性798例，阳性率为37.81%（946/2111），两组差异有统计学意义（P＜0.01）。

自身免疫性疾病患者不同年龄组ANA阳性率分析：在943例ANA阳性患者中18～50岁组的阳性率最高36.7%（632/1821），与≤17岁组28.3%（73/258）和≥51岁组29.86%（238/797）比较，阳性率差异有统计学意义（P＜0.01）。

在2876例自身免疫性患者检验标本中 抗核抗体（ANA）滴度≥1∶100，≥1∶320，≥1∶1000三个水平。≥1∶100占36.9%（348/943），≥1∶320占28%（264/943），≥1∶1000占35.1%（331/943）。≥1∶100男性占19.8%（69/348），女性占%80.2（279/348）；≥1∶320男性占13.64%（36/264），女性占86.36%（228/264）；≥1∶1000男性占9.67%（32/331），女性占90.33%（299/331）；男女患病率有显著性差异（P＜0.01）。

对2876例患者进行抗ENA抗体的检测，阳性标本数为356例，阳性率为12.38%（356/2876），只有2例阳性出现在ANA阴性的标本中。在943例ANA阳性的标本中，抗ENA抗体的阳性率为35.1%（331/943）。在356例抗ENA抗体阳性患者中，抗nRNP/Sm阳性68例，抗-Sm阳性16例，抗SS-A阳性136例，抗SS-B阳性41例，抗Scl-70阳性13例，抗Jo-1阳性4例，抗ds-DNA阳性78例。

3 检验结果讨论

间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）具有操作简单、敏感度高、特异性好，且结果易于判断等优点，能适合临床实验室常规抗核抗体（ANA）的检测，更好的诊断自身免疫性疾病患者。更重要的是HEp-2细胞包含大约100～150种自身抗原，适合初筛方法，美国风湿学会（ACR）已在2009年的立场声明中建议将间接免疫荧光法仍然作为抗核抗体（ANA）检测的金标准。

在2876例自身免疫性疾病患者中ANA阳性率为32.78%，其中男性与女性的阳性率比例为1∶2（18.91%/37.81%）。ANA阳性率低于文献报道，这可能与被检测人群有关，患者来自门诊和住院的多个科室，病种多样。滴度和阳性的判断存在主观因素，对于阳性结果的荧光滴度界限，目前仍存在较大的分歧，国内缺乏统一的滴度稀释系统和标准化报告程序 。从年龄统计看，ANA阳性率各年龄组间存在差异，且在18～50岁组阳性率最高。ANA阳性中的荧光模式分布广泛，在单一荧光模式中，以核颗粒型、核均质型和胞质颗粒型为常见。在混合荧光模式中以核颗粒/核均质型为主。核型分析对于相关疾病检测具有提示意义。样本中滴度统计并未呈现阳性率随滴度增高而依次降低的趋势，可能选择患者为疑似自身免疫系统疾病有关。

抗ENA抗体的阳性率为12.38%，并且有2例患者ENA 抗体阳性，而ANA阴性。ANA阳性的标本中，抗ENA抗体阳性率为35.1%。在抗ENA抗体阳性中，出现较多的有抗SSA阳性38.2%、抗ds-DNA阳性21.9%和抗nRNP/Sm阳性19.1%。在ANA阳性标本中有64.9%的抗ENA抗体为阴性，说明抗ENA抗体的阳性率低，检测项目还有待于进一步扩展。

在对自身免疫性疾病患者ANA和ENA谱联合检测中的阳性率，均高于单个自身抗体检测的阳性率，通过检验结果分析可知，对自身免疫性疾病患者的联合检测，具有检验结果互相弥补，提高患者检出率的优点。同时，根据ANA的不同核型和ENA的不同谱型，更加有利于的自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断，提高了自身免疫性疾病诊断率和诊断准确率。在进行自身免疫性疾病的临床诊断时，临床医师应当考虑进行多项指标联合检测，防止对患者漏诊和误诊的发生。