复方灵尼胶囊对免疫抑制小鼠免疫功能影响的实验研究

李玉梅，薛 欣，张永祥，卢贺起

(中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700)

复方灵尼胶囊在治疗艾滋病的临床实验观察中有较好的疗效。为深入探讨其疗效机理，尤其是促进免疫功能的药理作用机制，本实验采用环孢霉素A诱导小鼠产生免疫抑制，观察该药对模型动物CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值的影响[1]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 雄性昆明小鼠72只，清洁级，体重20g±2g，由中国药品生物制品检定所实验动物资源中心提供(许可证号SCXK(京)2009-0017)。

1.1.2 药物 复方灵尼胶囊(批号20090401)，由中国热带农业科学院热带生物技术研究所提供，每克复方灵尼胶囊内装物相当于5.44g生药。成人临床给药剂量为10g生药/人/d。将药物分别配成浓度5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml的水溶液。

阳性对照药:贞芪扶正颗粒(批号071110)，由修正药业集团有限公司生产，将该药配成浓度为56mg/ml的水溶液。造模用药:环孢霉素注射液(批号S0026A)，瑞士大诺华，稀释成浓度为1mg/ml工作液，用量为小鼠每公斤体重15mg。

1.1.3 主要试剂和仪器 试剂:FITC标记的美洲仓鼠抗小鼠CD3单克隆抗体，PE标记的大鼠抗小鼠CD4单克隆抗体，PECY5标记的大鼠抗小鼠CD8单克隆抗体，均购自美国eBioscience公司。仪器:日本Tomy SECKO公司高速低温离心机RS-20IV型，美国贝克曼库尔特公司流式细胞仪EPICS XL型。

1.2 方法

1.2.1 造模与分组 将72只小鼠分为A正常组、B低剂量组、C中剂量组、D高剂量组、E模型组、F阳性药组6组，每组12只。除A组动物外，其他组动物均腹腔注射造模药物，剂量0.3ml/20g，每隔1d注射1次，共注射3次。造模给药1周后，除A组和E组动物外，其他组动物均口服灌胃给药，每次0.5ml，B、C、D组给复方灵尼胶囊水溶液，F组给予贞芪扶正颗粒水溶液，每天1次，共持续14d。

停止给药后次日，各组动物眼眶取血，肝素抗凝，取抗凝血与小鼠单克隆抗体工作液混匀，4℃避光放置30min，用红细胞裂解液溶解红细胞，离心1200r/5min，取沉淀细胞用PBS洗2次后，制成细胞悬液用300目尼龙网过滤，样品上流式细胞仪检测。

1.2.2 流式检测条件和指标 流式细胞仪激光发射波长488nm，在前向散射和侧向散射二维散点图上确定淋巴细胞群，分别收集波长为525nm、575nm、670nm的荧光信号，并分别计算CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞百分率。

1.2.3 数据的统计处理 实验数据应用单因素方差分析，结合q检验进行，实验结果用均数±标准差表示。

2 结果

复方灵尼胶囊对免疫抑制小鼠淋巴细胞亚群的影响

表1显示，模型组小鼠CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞均明显低于正常对照组(P＜0.01)，模型组小鼠CD4+/CD8+比值低于正常对照组，说明模型组小鼠免疫功能受到抑制。复方灵尼胶囊高、中、低剂量组与模型组比较，CD3+、CD4+、CD8+细胞明显升高(P＜0.01)，中剂量组CD4+/CD8+比值亦有所恢复，说明复方灵尼胶囊具有提高和改善免疫功能的作用。

表1 复方灵尼胶囊对免疫抑制小鼠淋巴细胞亚群影响

表1 复方灵尼胶囊对免疫抑制小鼠淋巴细胞亚群影响

注:与正常组比较:*P＜0.05，＊＊P ＜0.01;与模型组比较:#P＜0.05，##P ＜0.01

组 别 例数 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+正 常 组 12 72.87±9.04 51.06±7.78 21.15±3.21 2.45±0.46模 型 组 12 48.47±2.79＊＊ 33.10±2.74＊＊ 14.87±2.52＊＊ 2.14±0.36*阳性药物组 12 74.66±8.68## 47.60±3.92## 26.58±2.15## 1.97±0.39低 剂 量 组 12 75.22±4.01## 48.90±4.39## 25.68±3.72## 1.96±0.40中 剂 量 组 12 73.26±9.56## 49.73±8.98## 23.14±6.38## 2.34±0.63高 剂 量 组 12 73.53±6.50## 47.44±7.97## 25.00±5.09##1.97±0.51

3 讨论

CD4+T淋巴细胞在机体的免疫反应中处于重要地位，它通过分泌细胞因子激活其他细胞亚群参与免疫反应，协调其间的相互作用，并对介导体液免疫和细胞免疫起着重要调节作用。HIV病毒感染和艾滋病所引起的重要的病理损伤:HIV病毒主要攻击CD4+T淋巴细胞，使CD4+T淋巴细胞受损，数量减少，免疫功能进行性下降，最终致使机体免疫功能丧失。CD4+T淋巴细胞的数量和功能变化是筛选抗艾滋病药物的重要指标之一[2]。中医认为，正气存内，邪不可干，扶正可以祛邪，而补虚扶正是提高抗病能力、调节免疫功能的重要手段，这在很多人体的康复实践中得到证实[3]。

在治疗艾滋病的临床实践中，中医药治疗可改善患者临床症状，提高生存质量，推迟艾滋病的发病时间[4]。受试药物是根据中医扶正祛邪理论研制，在临床观察中有较好的疗效。本次实验数据显示，模型组各指标平均值明显低于正常组和阳性药物组，有统计学意义(P＜0.01)，说明小鼠免疫抑制模型的实验方法可靠。各剂量给药组的各指标平均值与模型组比较均见升高且接近正常组水平，并与阳性药物组各指标平均值无明显差异(P＞0.05)，表明实验药物与阳性药物药效一致，即复方灵尼胶囊对免疫抑制模型小鼠的免疫功能有恢复作用。但实验数据也同时显示，各給药组 CD4+/CD8+的比值并未恢复到正常组水平，应就其免疫调节的机制做进一步深入研究。

[1]张永祥，赵东，李玉梅，等.爱可扶正片对免疫抑制小鼠免疫功能恢复作用的实验观察[J].中国中医基础医学杂志，2007，13(3):216.

[2]金伯泉.细胞和分子免疫学[M].西安:世界图书出版公司，1999:259-285.

[3]卢贺起，黄晖，周艳华，等.“时相药法”消除运动性疲劳机理的初步研究[J].中国中医基础医学杂志，2006，12(9):665-667.

[4]闫利源，张毅.艾滋病的中医病因病机及治疗思路研究[J]中医学报，2011，26(152):3-6.