促进真皮替代物血管化进程的因素

周显玉 综述 杨军 审校

Yannas于1980年首次提出真皮替代物的概念[1]。此后，诸多学者对真皮替代物的作用机制、设计原则及形式、应用范围等进行了广泛的研究[2-4]。同自体组织移植相比，真皮替代物在烧伤重建外科领域显示了独特的性能与广阔的前景，但是存在创基血管延迟或难以长入真皮的缺陷。

1 真皮替代物的分类及性质

商业化皮肤替代品可按其成分、应用范围、性质等属性进行分类，其中真皮替代物主要包括Integra、Alloderm、Dermagraft、TransCyte 及 Permacol等[5-6]。

真皮替代物具备良好的细胞贴附性和生物相容性，可以利用其支架作用构建皮肤、脂肪、软骨、骨和角膜等[7-8]。真皮替代物修复皮肤缺损，技术简单，对机体的创伤小，无毒性、抗原性小、易黏附、可降解、炎症反应小、可抵抗创面胶原酶的消化、创面覆盖时便于应用和控制，是良好的支架材料[9-10]。

2 真皮替代物的应用现状

上世纪末,随着细胞培养技术和组织工程技术的发展，各种真皮替代物已广泛应用于烧伤、慢性溃疡、鼻部重建和唇扩大术中[11]。

真皮替代物修复组织缺损常分两步进行，初期以真皮替代物移植创面，待肉芽组织长入并完全取代需2～3周时间[12]；二期在真皮表面移植自体断层皮片，如果初期创面闭合较理想，可提前进行二期的自体皮片移植[12]。对于ADM（Acellular dermal matrix），近年来发现运用一步法（移植脱细胞真皮基质的同时移植自体断层皮片）临床效果与两步法无明显差异，多数学者现倾向于一步法的治疗[13]。

组织创伤及缺损的修复在未来仍将是一个重大的医疗问题，特别是慢性创伤，常常导致组织功能缺失[14-15]。各种皮肤替代品、细胞因子和合成的脱细胞基质的应用越来越受到关注，而真皮替代物移植后血管化的研究也开展地愈加频繁。

3 促进真皮替代物血管化的因素

3.1 单纯真皮替代物移植

单纯真皮替代物修复各种原因引起的皮肤缺损时，创基血管长入真皮替代物并建立血供的时间因真皮材质、缺损部位及大小、缺损程度、受区血管大小等因素而异。一般移植后第3天即有血管化迹象，4周以后真皮替代物多能完全被肉芽组织取代，新生血管基本稳定[16-20]。

真皮替代物真正建立局部血液循环至少需要10～15 d[16]，由于上皮组织需从上皮-真皮交界处的毛细血管持续获取营养，这个时间明显超过了上皮的缺血耐受时间（超过1周即可出现上皮的坏死、脱落）。因此，促进毛细血管的生长及血供的建立是非常重要的。

Yao于1981年首次提出预构皮瓣的概念[21]，Walton等于1987年首次将动物体内稳定血管与生物活性材料在体内构建人工合成的带蒂血管组织，再延迟与自体断层皮片共同修复创面缺损[22-24]。此后，单纯真皮替代物移植的研究日趋减少，以真皮替代物、细胞培养及细胞因子为基础的复合实验研究逐渐兴起。

3.2 成纤维细胞

真皮成纤维细胞在皮肤组织的再生中起关键作用，其在损伤部位早期出现并迅速增生，部分分化为肌成纤维细胞，通过调控Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、弹力蛋白和层黏连蛋白等基质的定位、表皮分化和真皮再生，来加速创伤愈合[25-28]。Kazutaka等在真皮替代物中加入体外培养的成纤维细胞，修复大鼠全厚皮片缺损，10 d后活检显示创面的毛细血管密度增加；成纤维细胞、内皮细胞和血小板源性创伤愈合因子三者同时配合真皮替代物治疗，第2天真皮替代物周围即开始生长毛细血管，第5天即发现真皮层下毛细血管增多，约7～10 d血管开始长入真皮胶原[29]。

随着以细胞为基础的转基因技术的发展,成纤维细胞可使真皮替代物移植后过度表达血管内皮生长因子，促进新血管的生成，进而更好地与受区部位的血管网吻合[30-32]，缩短真皮替代物的血管化时间。

3.3 细胞因子

3.3.1 血管内皮生长因子

血管内皮生长因子（VEGF）是强有力的促血管生成因子，能够刺激血管内皮细胞的有丝分裂和血管的发生，提高单层内皮的通透性。根据mRNA不同的剪切方式，VEGF至少产生 5种不同的蛋白形式，其中 VEGF121、VEGF145、VEGF165是分泌型可溶性蛋白，直接作用于血管内皮细胞，促进其增殖。

生理状态下VEGF的半衰期为30～45min，缺血条件下其生物活性可延长至6～8 h[30]。VEGF能够促进血管的再生、增强血流灌注，慢性缺氧模型实验中可显著提高组织、皮瓣的活力[31-32]。大鼠管状带蒂皮瓣模型研究显示，VEGF对断蒂后皮瓣远端皮肤成活面积具有积极的影响，VEGF能够促进受区营养性血管的生长，加强受区与供区血管的新生与建立，缩短皮瓣转移的时间[33]。大鼠腹直肌肌皮瓣（TRAM）缺血-VEGF局部应用模型研究发现，VEGF能够促进皮瓣血管的再生，提高皮瓣的活力[34-35]。

VEGF表达于正在形成中的血管，其受体只表达于内皮细胞，在缺血缺氧及血管破坏的情况下VEGF表达增加；实验动物模型研究发现，VEGF还可以诱导生理性血管的生成，增加血管的渗透功能。目前，人源性重组VEGF已应用于临床和相关动物实验，其作用机理、应用领域及范畴需进一步地研究论证。

3.3.2 碱性成纤维细胞生长因子

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是目前已知的促血管生成作用最强的细胞因子之一，也是间充质细胞和神经外胚层强有力的分裂原。它能够影响细胞的分化和黏附，促进细胞迁移，诱导胚胎发育过程中的中胚层形成[36-37]，刺激成纤维细胞和毛细血管内皮管腔的形成，增加胶原酶和结缔组织的合成，促进血管内皮细胞迁移到胶原基质中[38]，从而改变真皮替代物的塑形。

由于bFGF在组织内半衰期短（自然半衰期为9 h，8 h后总量仅为原来的20%），利用缓释物质，如明胶微球包裹bFGF与真皮替代物配合治疗，比单纯局部使用bFGF效果更好[39]。

外胶原支架的培养研究中发现，bFGF能够加速毛细血管的形成，促进创面的愈合。小鼠耳微循环模型证实了bFGF在缺氧状态下更能促进毛细血管的生长和新血管的生成，并增加原血管的总长[40]。该结果对于真皮替代物移植有启发性作用，绝大多数创面在植皮前面临着不同程度的血供受损与缺氧，bFGF辅助治疗将有助于真皮替代物快速建立血供，促进创面的短期恢复。

利用bFGF在皮下预构皮瓣，3 d内血管蒂及皮肤周围小血管即有新血管形成，第5天血管蒂与真皮下血管建立联系，移植后1周掀起皮瓣，以bFGF处理，可明显延长成活时间[41-42]。

bFGF联合真皮替代物治疗胶原病、糖尿病等引起的慢性创面，效果显著。在临床上，Masaki等联合应用真皮替代物和bFGF修复长期类固醇治疗后结缔组织顽固性溃疡，创面均完全愈合，随访2年复发率为0[43]。

实验研究显示，bFGF联合其他生长因子如上皮生长因子（EGF）或血小板源生长因子（PDGF）等，治疗效果有叠加作用。由于其半衰期短，如何延长其作用时间，例如进行系统性管理或缓释物质包裹等，是一项技术难点。

3.3.3 转化生长因子

转化生长因子（β-TGF）是目前已知与瘢痕形成关系最密切、最具代表性的细胞因子，其通过与细胞表面相应的受体结合，调节细胞的增殖分化、胚胎发育、伤口愈合和血管的生成。通过实验皮下预置三维模型替代物如聚酯海绵、聚四氟乙烯（PTFE）[44]、聚乙烯醇泡沫板[45]和 Matrigel[46]（一种富含基膜组织的细胞外基质）等，局部辅助应用β-TGF因子，证实β-TGF是一种血管生成的强力诱导因子。Michael[47]在前人的研究基础上，阐述了β-TGF的分类、作用机制、分子生物学效应及对血管生成作用的影响，揭示血管生成是一个复杂的多分子通路调控、多细胞因子参与的过程，其中β-TGF对血管的生成发挥着极其重要的作用。而通过定量检测β-TGF受体来间接反应新生毛细血管的增生状态，已是广为认可的一种有效手段。

3.3.4 基质细胞衍生因子

基质细胞衍生因子-1（SDF-1）持续表达于包括皮肤、骨髓基质细胞、骨髓内皮细胞在内的多种组织当中，通过配体-受体方式与CXCR4作用，在白细胞、造血干细胞的迁移、归巢及内皮细胞的调节活动中发挥重要功能[48]。最近研究表明，在肉芽组织早期阶段，SDF-1在转录和翻译水平同时下调，创面分泌的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1（IL-1）、干扰素-γ（INF-γ）等细胞因子均可降低成纤维细胞中SDF-1的表达。

大鼠实验研究SDF-1对真皮替代物Tegaderm覆盖全厚皮片缺损的作用效果。术后18 d检测结果显示，SDF-1能够促进角质形成细胞的增殖和瘢痕的愈合，减少伤面收缩[49]。裸鼠实验研究内皮祖细胞介导SDF-1对血管形成的作用时发现，SDF-1能够增加缺氧组织的血流灌注和毛细血管密度[50]。利用生物性可降解材料壳聚糖或PGA作为缓释物质包裹SDF-1作用于动物模型创面，SDF-1作为趋化因子能够触发间质干细胞的归巢和迁移，后者既可分化为包括成纤维细胞在内的多种皮肤细胞，还可以通过影响CD34+分子的增殖和迁移，来诱导体内血管的形成，创面缺损修复效果明显[51]。

内皮祖细胞（EPCs）持续表达SDF-1的受体CXCR4，SDF-1主要通过介导EPCs的迁移、聚集，促进损伤部位血管的再生。目前，大部分的实验研究主要集中在SDF-1促进祖细胞、干细胞的迁移、归巢方面，SDF-1因子与真皮替代物联合治疗对各种原因引起的皮肤慢性创伤、皮肤缺损、骨外露等的治疗具有重要意义。

3.4 生物载体介导细胞因子的基因治疗

减活腺病毒或质粒介导VEGF、β-TGF或PDGF等细胞因子的研究显示了生物载体介导细胞因子的基因治疗具有广阔的前景。

表达VEGF或β-TGF的E1/E3减活腺病毒协同真皮替代物修复创面缺损，4周后组织学、微血管造影等观察发现，皮瓣组织局部血流灌注显著提高，血管分布面积明显增大，皮瓣远端皮肤的坏死面积明显降低[52-53]；表达PDGF或VEGF的质粒修复动物模型全厚缺损创面，皮片表面光滑有弹性，抗磨擦性强，毛细血管分布多且均匀，新形成血管的数量增加，真皮层形成速度加快；RT-PCR及蛋白印迹发现无论是在mRNA还是蛋白质水平上，与血管生成相关的因子VEGF、CD31+及平滑肌肌动蛋白（a-SMA）的表达均显著升高[54]。

细胞因子局部应用时，存在组织原位持续作用时间短的缺点，生物载体介导细胞因子的基因治疗方法不仅可以克服细胞因子初始治疗的高剂量用药问题，同时也避免了因半衰期短致使每日重复给药的刺激，是基因工程技术的一大进展，通过局部持续、过量表达相应的细胞因子，加强了局部的血流灌注和血管生成，加速了皮瓣的成活及成熟，是一项值得期待、推广的基因工程技术。

3.5 干细胞治疗

脂肪干细胞（ASCs）和骨髓间质干细胞（MSCs）具有多项分化潜能，不同微环境下能够分化为脂肪、骨、软骨、肌腱等多种细胞，在体外稳定增殖且衰亡率低，具有来源广泛、取材容易、体内储备量大、少量组织即可获得大量干细胞等优点，逐渐成为近年来新的研究热点之一。许多学者已经开始利用干细胞治疗糖尿病、周围动脉炎、结缔组织疾病及肿瘤术后放疗等原因引起的皮肤难治性溃疡，取得了良好的疗效。

丝裂霉素C建立的大鼠难治疗溃疡模型中，用ASCs协同真皮替代物修复创面，1～2周后发现ASCs能够促进肉芽组织、毛细血管和上皮化的形成，加速创伤的愈合[55-57]；链脲霉素构建的小鼠糖尿病模型中，MSCs与真皮替代物共同修复全厚缺损，7 d后创伤面积显著减小，血管内皮细胞标志物CD31+表达明显增加[58-59]；而胶原基质与MSCs联合修复小鼠皮肤缺损微循环模型中，术后第3、5、7天观察发现，应用MSCs治疗的皮肤毛细血管密度显著高于对照组，临床上运用这种方法已成功治愈1例传统方法治疗1年仍未愈合的创面[60]，充分展示了干细胞治疗的广阔前景。

Anne等总结关于MSCs治疗创伤愈合的研究成果，列举每篇成果的动物模型、MSCs应用方法、机制和结局，提示MSCs能够通过促进上皮化、肉芽组织的形成和血管生成，加速创面的愈合[61]。骨髓间质干细胞体外培养的真皮层成纤维细胞不仅与正常的成纤维细胞相近，而且微环境产生的细胞因子还能调控胶原的沉着，真皮层在形态上更接近正常[62]。

干细胞的多向分化潜能及调控机制是再生医学的一个重要课题，而将其合理地应用到整复外科的实践当中去，将具有传统治疗方法无可比拟的优势。

3.6 真皮替代物孔径大小对血管密度的影响

上世纪80年代，Yannas等就对真皮替代物基质孔径大小影响其血管化的问题进行了相关研究；Andrej在2005年利用PEGT/PBT材料作为真皮基质替代物移植到大鼠身上，研究其不同孔径在不同时间段对新血管生成的影响，结果显示，孔径较大的真皮移植后第7天，在移植部位即有新生血管生成，并且在3个不同的时间段血管化程度均大于孔径较小的[63]。

真皮替代物孔径直径过小会阻碍细胞、血管、细胞因子等的渗透，过大则达不到覆盖的目的，失去了细胞、血管支架的作用。一定范围孔径大小的真皮替代物有利于创面基部血管的长入，进而加速血管化的进程。

3.7 促进真皮替代物血管化的其他因素

除以上因素，细胞因子中血小板源生长因子（PDGF）能够刺激停滞于G0/G1期的成纤维细胞、神经胶质细胞、平滑肌细胞等多种细胞进入分裂增殖周期，在组织和细胞的生长分化、免疫反应及创伤愈合等方面发挥重要作用。对移植后的真皮替代物进行高压氧刺激和脉冲光间断照射[53]，也能促进血管的形成。另创面既存知名血管的营养血管在缺氧缺血情况下更易生发出新的血管，加速真皮替代物的血管化进程。真皮替代物在血运丰富的部位如头皮、颜面部等，亦较其他血运相对差的部位更易建立血供。

4 展望

真皮替代物在烧伤重建外科领域发挥了巨大的作用，但其发展运用到现在，尚不能够完全取代正常的皮肤组织。与自体皮片移植相比，真皮替代物的血管化进程仍明显偏慢；而在临床上，由于病人体质、病情状况、医院制度等因素的影响，血管化时间往往还要长于实验研究的结果。组织修复是一种多细胞、多因子、多水平调控的过程，组织器官如果缺乏正常的血供，会产生一系列病理性改变，包括水肿、循环障碍、感染，甚至局部坏死。真皮替代物作为异体物质修复组织缺损更是不得不面对这一难题，弄清组织修复的机理，调控组织修复的过程，同时形成成熟的监控监测技术，是促进真皮替代物在整复外科领域中更好发展的成功保障。

基因微矩阵、蛋白质组学与非病毒性基因嵌合、干细胞移植等技术的有机结合，是未来更好地研发血管化真皮替代物的方向；而如何有效地将组织再生过程中参与炎症反应、组织生成的细胞及细胞因子加以调控管理，促进血管的再生及血运的重建，是当今再生医学和整复外科领域学者们必须要面对的一大挑战。

[1]Burke JF,Yannas IV,Quinby WG,et al.Successful use of a physiologically acceptable artificial skin in the treatment of extensive burn injury[J].Ann Surg,1981,194(4):413-428.

[2]Soejima K,Chen X,Nozaki M,et al.Novel application method of artificial dermis:one-step grafting procedure of artificial dermis and skin,rat experimental study[J].Burns,2006,32(3):312-318.

[3]Dantzer E,Braye FM.Reconstructive surgery using an artificial dermis(Integra):results with 39 grafts[J].Br J Plast Surg,2001,54(8):659-664.

[4]Komorowska-Timek E,Gabriel A,Bennett DC,et al.Artificial dermis as an alternative for coverage of complex scalp defects following excision of malignant tumors[J].Plast Reconstr Surg,2005,115(4):1010-1017.

[5]Metcalfe AD,Ferguson MW.Tissue engineering of replacement skin:the crossroads of biomaterials,wound healing,embryonic development,stem cells and regeneration[J].J R Soc Interface,2007,4(11):413-437.

[6]Rizzi SC,Upton Z,Bott K,et al.Recent advances in dermal wound healing:biomedical device approaches[J].Expert Rev Med Devices,2010,7(1):143-154.

[7]Tanaka Y,Sung KC,Tsutsumi A,et al.Tissue engineering skin flaps:which vascular carrier,arteriovenous shunt loop or arteriovenous bundle,has more potential for angiogenesis and tissue generation[J].Plast Reconstr Surg,2003,112(6):1636-1644.

[8]Inoue H,Murakami T,Ajiki T,et al.Bioimaging assessment and effect of skin wound healing using bone-marrow-derived mesenchymal stromal cells with the artificial dermis in diabetic rats[J].J Biomed Opt,2008,13(6):1-10.

[9]杨军,章一新,王丹茹,等.脱细胞异体真皮与自体刃厚表皮复合移植的应用[J].上海交通大学学报,2008,28(1):84-87.

[10]杜鸣,刘伟,曹谊林,等.脱细胞真皮基质重建表皮的临床应用研究[J].中国临床康复杂志,2003,7(11):1686-1687.

[11]Soejima K,Chen X,Nozaki M,et al.Novel application method of artificial dermis:one-step grafting procedure of artificial dermis and skin,rat experimental study[J].Burns,2006,32(3):312-318.

[12]Hatanaka K,Sato S,Saitoh D,et al.Photoacoustic monitoring of granulation tissue grown in a grafted artificial dermis on rat skin[J].Wound Repair Regen,2010,18(3):284-290.

[13]Rennekampff HO,Pfau M,Schaller HE.Acellular allograftdermal matrix:immediate or delayed epidermal coverage[J]?Burns,2002,28(1):100-101.

[14]Moiemen N,Yarrow J,Hodgson E,et al.Long-term clinical and histological analysis of Integra dermal regeneration template[J].Plast Reconstr Surg,2011,127(3):1149-1154.

[15]Bastidas N,Ashjian PJ,Sharma S.Acellular dermal matrix for temporary coverage of exposed critical neurovascular structures in extremity wounds[J].Ann Plast Surg,2009,62(4):410-413.

[16]Matsumoto Y,Ikeda K,Yamaya Y,et al.The usefulness of the collagen and elastin sponge derived from salmon as an artificial dermis and scaffold for tissue engineering[J].Biomed Res,2011,32(1):29-36.

[17]Wehrhan F,E Nkenke,Melnychenko I,et al.Skin repair using a porcine collagen I/III membrane vascularization and epithelization properties[J].Dermatol Surg,2010,36(6):919-930.

[18]Baynosa RC,Browder LK,Jones SR,et al.Evaluation of artificial dermis neovascularization in an avascular wound[J].J Reconstr Microsurg,2009,25(7):405-410.

[19]Burke JF,Yannas IV,Quinby WC,et al.Successful use of a physiologically acceptable artificial skin in the treatment of extensive burn injury[J].Ann Surg,1981,194(4):413-428.

[20]Auger FA,Berthod F,Moulin V,et al.Tissue-engineered skin substitutes:from in vitro constructs to in vivo applications[J].Biotechnol Appl Biochem,2004,39(Pt 3):263-275.

[21]Yao ST.Vascular implantation into skin flaps:Experimental study and clinical application:A preliminary report[J].Plast Reconstr Surg,1981,68(3):404-410.

[22]Huemer GM,Shafighi M,Meirer R,et al.Adenovirus-mediated transforming growth factor-βameliorates ischemic necrosis of epigastric skin flaps in a rat model[J].J Surg Res,2004,121(1):101-107.

[23]陈曦,谭谦,梁志为,等.血小板源性生长因子基因修饰的人工复合皮移植大鼠创面效果观察[J].中华烧伤杂志,2005,21(1):33-36.

[24]Andrade SP,Fan TP,Lewis GP.Quantitative in vivo studies on angiogenesis in a rat sponge model[J].Br J Exp Pathol,1987,68(6):755-766.

[25]Erdag G,Sheridan RL.Fibroblasts improve performance of cultured composite skin substitutes on athymic mice[J].Burns,2004,30(4):322-328.

[26]Demarchez M,Hartmann DJ,Regnier M,et al.The role of fibroblasts in dermal vascularization and remodeling of reconstructed human skin after transplantation onto the nude mouse[J].Transplantation,1992,54(2):317-326.

[27]El-Ghalbzouri A,Gibbs S,Lamme E,et al.Effect of fibroblasts on epidermal regeneration[J].Br J Dermatol,2002,147(2):230-243.

[28]Murphy GF,Orgill DP,Yannas IV.Partial dermal regeneration is induced by biodegradable collagen glycosaminoglycan grafts[J].Lab Invest,1990,62(3):305-313.

[29]Soejima K,Chen X,Nozaki M,et al.Novel application method of artificial dermis:one-step grafting procedure of artificial dermis and skin,rat experimental study[J].Burns,2006,32(3):312-318.

[30]Shima DT,Deutsch U,D'Amore PA.Hypoxic induction of vascular endothelial growth factor(VEGF)in human epithelial cells is mediated by increases in mRNA stability[J].FEBS Lett,1995,370(3):203-208.

[31]Takeshita S,Rossow ST,Kearney M,et al.Time course of inceased cellular proliferation in collateral arteries after adminisration of vascular endothelium growth factor in a rabbit model of lower limb vascular insufficiency[J].Am J Pathol,1995,147(6):1649-1660.

[32]Keyger Z,Dogan T,Zhang F,et al.Effects of VEGF adminisration following ischemia on survival of the gracilis muscle flap in the rat[J].Ann Plast Surg,1999,43(2):172-178.

[33]Zhang F,Richards L,Angel MF,et al.Accelerating flap maturation by vascular endothelium growth factor in a rat tube flap model[J].Br J Plast Surg,2002,55(1):59-63.

[34]Zhang F,Fischer K,Komorowska-Timek E,et al.Improvement of skin paddle survival by application of vascular endothelial growth factor in a rat TRAM flap model[J].Ann Plast Surg,2001,46(3):314-319.

[35]Seify H,Bilkay U,Jones G.Improvement of TRAM flap viability using human VEGF-induced angiogenesis:A comparative study of delay techniques[J].Plast Reconstr Surg,2003,112(4):1032-1039.

[36]Yanon A,Klagsbrun M.Autocrine regulation of cell growth and transformation by basic fibroblast growth factor[J].Cancer Metastatis Rev,1990,9(3):191-202.

[37]Schweigerer L.Basic fibroblast growth factor as a wound healing hormone[J].Trends Pharmacol Sci,1988,9(12):427-428.

[38]王炜.整形外科学[M].杭州:浙江科技出版社,1999,439-440.

[39]Kawai K,Suzuki S,Tabata Y,et al.Accelerated wound healing through the incorporation of basic fibroblast growth factorimpregnated gelatin microspheres into artificial dermis using a pressureinduced decubitus ulcer model in genetically diabetic mice[J].Br J Plast Surg,2005,58(8):1115-1123.

[40]Frank J,Carroll CM,Aaranson K,et al.Ischemia increases the angiogenic potency of basic fibroblast growth factor(Fgf-2)[J].Microsurgery,1996,17(8):452-456.

[41]Tanaka Y,Sung KC,Fumimoto M,et al.Prefabricated engineered skin flap using an arteriovenous vascular bundle as a vascular carrier in rabbits[J].Plast Reconstr Surg,2006,117(6):1860-1875.

[42]Hickey MJ,Wilson Y,Hurley JV,et al.Mode of vascularization of control and basic fibroblast growth factor-stimulated prefabrecated skin flaps[J].Plast Reconstr Surg,1998,101(5):1296-1304.

[43]Fujioka M.Combination treatment with basic fibroblast growth factor and artificial dermis improves complex wounds in patients with a history of long-term systemic corticosteroid use[J].Dermatol Surg,2009,35(9):1422-1425.

[44]Sprugel KH,Mcpherson JM,Clowes AW,et al.Effects of growth factor in vivo.I.Cell ingrowth into porous subcutnaeous chambers[J].Am J Pathol,1987,129(3):601-613.

[45]Fajardo LF,Kowalski J,Kwan HH,et al.The disc angiogenesis system[J].Lab Invest,1988,58(6):718-724.

[46]Passaniti A,Taylor RM,Pili R,et al.A simple,quantitative method for assessing angiogenesis and anti-angiogenic agents using reconstituted basement membrane,heparin and fibroblast growth factor[J].Lab Invest,1992,67(4):519-528.

[47]Pepper MS.Transforming growth factor-beta:vasculogenesis,angiogenesis and vessel wall integrity[J].Cytokine Growth Factor Rev,1997,8(1):21-43.

[48]王承艳,苗振川,丰美福.基质细胞衍生因子SDF及其受体CXCR4在造血干/祖细胞动员及归巢过程中的作用[J].中国实验血液学杂志,2004,12(1):115-119.

[49]Sarkar A,Tatlidede S,Scherer SS,et al.Combination of stromal cell-derived factor-1 and collagen-glycosaminoglycan scaffold delays contraction and accelerates reepithelialization of dermal wounds in wild-type mice[J].Wound Repair Regen,2011,19(1):71-79.

[50]Yamaguchi J,Kusano KF,Masuo O,et al.Stromal cell-derived factor-1 effects on ex vivo expanded endothelial progenitor cell recruitment for ischemic neovascularization[J].Circulation,2003,107(9):1322-1328.

[51]Goncalves RM,Antunes JC,Barbosa MA.Mesenchymal stem cell recruitment by stromal derived factor-1-delivery systems based on chitosan/poly(γ-glutamic acid)polyelectrolyte complexes[J].Eur Cell Mater,2012,23:249-261.

[52]Gurunluoglu R,Meirer R,Shafighi M,et al.Gene therapy with adenovirus-mediated VEGF enhances Skin flap prefabrication[J].Microsurgery,2005,25(5):433-441.

[53]Meirer R,Huemer GM,Oehlbauer M,et al.Comparison of the effectiveness of gene therapy with vascular endothelial growth factor or shock wave therapy to reduce ischaemic necrosis in an epigastric skin flap model in rats[J].J Plast Reconstr Aes Surg,2007,60(3):266-271.

[54]Guo R,Xu S,Ma L,et al.The healing of full-thickness burns treated by using plasmid DNA encoding VEGF-165 activated collagene-chitosan dermal equivalents[J].Biomaterials,2011,32(4):1019-1031.

[55]Varkey M,Ding J,TredgetEE.Differentialcollageneglycosaminoglycan matrix remodeling by superficial and deep dermal fibroblasts:Potential therapeutic targets for hypertrophic scar[J].Biomaterials,2011,32(30):7581-7591.

[56]Nambu M,Kishimoto S,Nakamura S,et al.Accelerated wound healing in healing-impaired db/db mice by autologous adipose tissue-derived stromal cells combined with atelocollagen matrix[J].Ann Plast Surg,2009,62(3):317-321.

[57]Nambu M,Ishihara M,Nakamura S,et al.Enhanced healing of mitomycin C-treated wounds in rats using inbred adipose tissuederived stromal cells within an atelocollagen matrix[J].Wound Repair Regen,2007,15(4):505-510.

[58]Hocking AM,Gibran NS.Mesenchymal stem cells:Paracrine signaling and differentiation during cutaneous wound repair[J].Exp Cell Res,2010,316(14):2213-2219.

[59]Nakagawa H,Akita S,Fukui M,et al.Human mesenchymal stem cells successfully improve skin-substitute wound healing[J].Br J Dermatol,2005,153(1):29-36.

[60]Ichioka S,Kouraba S,Sekiya N,et al.Bone marrow-impremented collgen matrix for wound?healing:experimental evaluation in amicrocirculatory model of angiogenesis,and clinical experience[J].Br J Plast Surg,2005,58(8):1124-1230.

[61]Ring A,Langer S,Homann HH,et al.Analysis of neovascularization of PEGT/PBT-copolymer dermis substitutes in balb/c-mice[J].Burns,2006,32(1):35-41.

[62]Inoue H,Murakami T,Ajiki T,et al.Bioimaging assessment and effect of skin wound healing using bone-marrow-derived mesenchymal stromal cells with the artificial dermis in diabetic rats[J].J Biomed Opt,2008,13(6):1-10.

[63]Fioretti F,Lebreton-DeCoster C,Gueniche F,et al.Human bone marrow-derived cells:An attractive source to populate dermal substitutes[J].Wound Repair Regen,2008,16(1):87-94.