灯台树皮的鉴别研究

许文忠， 李 安， 田 琼

(1.云南省耿马县人民医院药剂科， 云南 耿马 677500； 2.第四军医大学药学院药理教研室， 陕西 西安 710038)

灯台树(Alstoniascholaris)为夹竹桃科植物，主产云南的西南部，以树皮、叶或嫩枝入药，是当地民间常用的植物药。树皮含吲哚类生物碱：灯台碱(C22H29O4N2)、灯台定碱(C2OH22O3N2)及非氮物质：灯台胶素、灯台蜡素(C30H48O2)、灯台亭素(C32H53O2)等。其性味平、淡，有毒。具有退热作用，对实验动物支气管炎有祛痰、平喘作用，并对动物肠道平滑肌有解痉作用，可消炎、化痰止咳、止痛[1]。由于灯台树含有多种生物药效成分[2～3]，所以在民间历史上就一直用其根、皮、叶来治疗头疼、伤风、肺炎、百日咳、慢性支气管炎，还可以治外伤止血、接骨、消肿等[4]。市售的灯台树皮很难分辨真伪，而灯台树碱的鉴定又难找到标准品，故笔者以灯台树叶对照药材建立简便的鉴定方法，以辨真伪。参考文献报道，灯台树含有较多的吲哚类生物碱，如灯台碱，灯台定碱，阿枯米辛碱，阿枯米辛碱的氧化物等，除此之外还含有α-香树醇乙酸酯、羽扇豆醇乙酸酯。还含有挥发油成分如柠檬醛、香叶醇、柠檬烯、芳樟醇、乙酸芳樟酯(linalylacetate)、α-蒎烯、异松油烯、以及正-二十六烷、羽扇豆醇、β-香树脂、乌苏酸、软脂酸等。本实验着重从吲哚类生物碱出发对本品进行定性研究。

1 材料与方法

1.1 实验材料 水为双蒸水，甲醇为色谱纯，苯、乙醇、丙酮、丁酮、氯仿、异丙醇、乙酸乙酯均为分析纯。所获得的灯台树皮由云南省耿马县采药人提供。经第四军医大学药物学家田琼教授鉴定为夹竹桃科植物灯台树(Alstonia scholaris)的树皮。灯台树叶对照药材购自成都市药检所。

1.2 实验方法

1.2.1 展开剂的选择 取本品粉末0.5 g，加95%的乙醇15 mL，加热回流2 h，放冷，转至超声波清洗机，超声20 min，滤过，滤液蒸干，加95%乙醇5 mL溶解，作为供试品溶液。另取对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以不同的展开剂展开，取出，凉干，喷以10%硫酸乙醇试液，在105 ℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

展开剂一：(乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1)

展开剂二：(乙酸乙酯-乙醇-浓氨水=17∶2∶1)

展开剂三：(苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨水=6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)

展开剂四：(乙酸乙酯-丁酮-甲酸=10∶6∶1)

展开剂五：(苯-甲醇=10∶7.5)

展开剂六：(丙酮-氯仿=5∶4)

展开剂七：(氯仿-甲醇=9∶1)

相互之间对比，分离效果依次按以下顺序增强：(乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1)<(乙酸乙酯-乙醇-浓氨水=17∶2∶1)<(乙酸乙酯-丁酮-甲酸=10∶6∶1)<(丙酮-氯仿=5∶4)<(苯-甲醇=10∶7.5)<(苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨水=6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)<(氯仿-甲醇=9∶1)。

1.2.2 薄层板的选择 分别称取本品粉末和对照药材各0.5 g，处理方法同前，照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各10 μL，点于不同的硅胶板上，以(氯仿-甲醇=9：1)展开。凉干，喷以10%硫酸乙醇，检测。

薄层板一：以硅胶G为吸附剂，以0.5%的羧甲基纤维素纳为粘合剂的硅胶板。展开剂：乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1，365 nm下检测。

薄层板二：以氧化铝为吸附剂，采用干法铺板进行展开。展开剂：乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1，365 nm下检测。

薄层板三：以硅胶GF254为吸附剂，以0.5%的羧甲基纤维素纳为粘合剂的硅胶板。展开剂：乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1，在254 nm下检测。

薄层板四：以硅胶G为吸附剂，以0.5%的羧甲基纤维素纳为粘合剂的硅胶板。展开剂：丙酮-氯仿=5∶4，365 nm下检测。

薄层板五：以硅胶G为吸附剂，以0.5%的羧甲基纤维素纳为粘合剂的硅胶板。展开剂：氯仿-甲醇(9∶1)，在日光灯下观察。

薄层板六：以硅胶G为吸附剂，以0.5%的羧甲基纤维素纳为粘合剂的硅胶板。展开剂：苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨水=6∶3∶1.5∶1.5∶0.5，在日光灯下观察。

1.2.3 样品处理方法的选择 将样品采取不同的处理方法，选用以硅胶G为吸附剂而以羧甲基纤维素纳为粘合剂的硅胶制板，在分离效果最好的展开系统(氯仿-甲醇=9：1)中展开，晾干，喷以10%硫酸乙醇，在105 ℃下加热30 min，至斑点颜色清晰为至。

方法(1)：称取本品粉末0.2 g，置三角瓶中，加入95%乙醇10 mL，于超声波清洗机上超声处理20 min，滤过，蒸干滤液，加氯仿溶解至2 mL，作为供试品溶液。另取对照药材0.2 g，同法制得对照药材溶液，照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取2种溶液各10 μL，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板。在(氯仿-甲醇=9：1)展开剂中展开，取出，凉干，喷以10%硫酸乙醇，在105 ℃下加热30 min，至斑点颜色清晰为至。在日光灯下观察。

方法(2)：称取本品粉末0.2 g，置三角瓶中，加入适量蒸馏水，超声处理30 min，滤过，浓缩滤液至2 mL，作为供试品溶液。另取对照药材0.2 g，同法制得对照药材溶液。其余步骤同方法(1)。

方法(3)：称取本品粉末0.2 g，加入盐酸10 mL，冷浸(部分逐渐溶解)，放置5 h，滤过，加入10 mL氨水碱化，滤过，滤液中加入氯仿10 mL提取2 min，收集氯仿层，浓缩滤液至2 mL，作为对照品溶液。另取对照药材0.2 g，同法制得对照药材溶液，照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取2种溶液各10 μL，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板。在(氯仿-甲醇=9：1)展开剂中展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，在105 ℃下加热30 min，至斑点颜色清晰为至。在日光灯下观察。

方法(4)：取本品粉末0.5 g，加95%的乙醇15 mL，加热回流2 h，放冷，转至超声波清洗机，超声20 min，滤过，滤液蒸干，加95%乙醇5mL溶解，作为供试品溶液。另取对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述2种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以不同的展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇试液，在105 ℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

1.2.4 薄层鉴别试验 取本品粉末0.5 g，加95%的乙醇15 mL，加热回流2 h，放冷，转至超声波清洗机，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，加95%乙醇5 mL溶解，作为供试品溶液。另取灯台树叶对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液[1]。照薄层色谱法《中国药典》附录VIB)试验，吸取上述2种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(9：1)展开剂展开，取出，凉干，喷以10%的硫酸溶液，在105 ℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

3 结果

3.1 展开剂的确定 其中展开剂三和展开剂七的展开效果最好，进一步对比这2种展开系统并结合药材所含化学成分的特性，展开剂三的组成较展开剂七复杂，在配制过程中，如不严格控制其配比，就会影响展开效果，而导致分离不完全。因此，最终选择展开剂七为分离最佳的展开系统。

3.2 薄层板的确定 将本品粉末和对照药材采用相同的处理方法分别制备供试品溶液和对照药材溶液，选用不同的吸附剂，并在不同的展开剂中展开，经检测结果显示，本品以硅胶G为吸附剂分离效果最好。

3.3 样品处理方法的确定 从4种不同样品处理方法的色谱图可以看出，方法(4)的分离效果最好，因此我们最终选择方法四(4)作为本品的样品处理方法。

3.4 薄层鉴别结果 采用展开剂七、以硅胶G及分离方法(4)后，所鉴定的灯台树皮粉展开的薄层色谱图如图1。

1、3为对照药材溶液;2、4为供试品溶液

4 讨论

灯台树是西南少数民族常用药物，其生长于北回归线附近东南亚亚热带地区，对呼吸道疾病有极好的疗效[5～7]，在当地使用广泛，而至今我国药典上未予纳入。注射治疗猪气喘病的疗效高于丁胺卡那霉素[8～9]。

笔者以灯台树叶对照药材作为对照，对灯台树皮进行了鉴别研究。从上述色谱图显色结果可知，对照药材溶液和供试品在同一硅胶G板上相应的位置显相同颜色的斑点，实验证实可以用薄层法进行灯台树皮的鉴别。

[1]Boonchuay W，Couit W E.Minor alkaloids of Alstonia schnolaris root[J].Phytochemistry，1976，5(5)：821.

[2]Kam T S，N yeoh K T，Sim K M，et a1.Alkaloids from Alstonia scholaris[J].Phytochemistry，1997，45(6)：1303～1305.

[3]Ganesh Chandra Jagetia,Manjesh war Shrinath Baliga.Modulation of antine oplastic activity of cyclophos phamide by alstonia scholaris the Ehrlich ascites carcinoma bearing mice[J].Journal of Experimental therapeutics and oncology，2003，3：272～283.

[4]李安，田琼，梁向艳，等.佤药灯台树对大鼠博莱霉素所致肺损伤早期作用的研究[J].科学技术与工程，2007，7(1)：41～72.

[5]杜国顺，尚建华，蔡祥海，等.灯台树根的止咳活性成分[J].云南植物研究，2007，29(3)：366.

[6]XU Yan，FENG Tao，CAI Xiang-Hai，at al.A New C13-Norisoprenoid from Leaves of Alstonia scholaris[J]. Nat Med Jan，2009，7(1)：21～23.

[7]Cai XH，Liu YP，Feng T，et a1.Picrinine-type alkaloids from the leaves of AIstonia scholaris[J].Chin J Nat Med，2008，6(1)：20～22.

[8]周广生，曹斌，赵永旺，等.灯台树注射液穴位注射治疗猪气喘病试验[J].江苏农业科学，2010，(3)：291～292.

[9]周广生.中药灯台树注射液治疗猪气喘病的试验观察[J].中国兽医杂志，2009，45(10)：60.