铃兰抗氧化性研究

李汉熙，杨香，张民锋，施溯筠＊

（1.延边大学长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室，吉林 延吉133002；2.延边大学工学院 计算机科学与技术系，吉林 延吉133002）

铃兰抗氧化性研究

李汉熙1，杨香2，张民锋1，施溯筠1＊

（1.延边大学长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室，吉林 延吉133002；2.延边大学工学院 计算机科学与技术系，吉林 延吉133002）

以DPPH·清除能力作为考察指标，通过正交实验确定铃兰抗氧化物质的最佳提取方案，并测定铃兰提取物清除羟自由基（·OH）和过氧化氢（H2O2）的能力及还原力.结果表明：提取铃兰抗氧化物质的最优方案是用蒸馏水在75℃下提取30 min，其对DPPH·的清除率达96.1%，且对DPPH·的清除能力随浓度的增加而增强；铃兰水提取物对·OH和H2O2表现出较强的清除能力及还原力，这说明铃兰水提物具有较好的抗氧化性.

铃兰；水提液；抗氧化性

铃兰（ConvallariakeiskeiMiq.）为百合科多年生草本植物，别名香水草、芦藜花、铃铛花、草玉铃、君影草、鹿铃草，主要产于我国吉林、黑龙江、河北、山东、河南、山西、陕西等省，尤以东北盛产，是一种珍贵的药用植物［1］.铃兰含有丰富的具有特殊分子结构、功能复杂多样的生物活性物质，可治疗心力衰竭、心房纤颤以及由高血压和肾炎引起的左心衰竭等症［2］.正常浓度的自由基具有调节细胞间的信号传递和细胞生长、抑制病毒和细菌的作用，若机体自由基产生过多或清除过慢时，便会通过攻击生命大分子物质及各种细胞器而造成机体在分子水平、细胞水平及组织水平的各种损伤，进而加速机体的衰老进程并诱发包括肿瘤在内的各种疾病［3］.近年来，自由基的产生和清除一直是生物、医药、环境和农学研究的热点，许多高效、安全、天然的抗氧化剂不断被发现［4］，但有

关铃兰抗氧化的研究未见报道.本实验选择吉林省长白山产铃兰为研究材料，以DPPH·清除率为筛选指标，通过对提取溶剂、提取温度和提取时间等因素进行优化筛选，确定出铃兰提取液的最佳提取方案，并进一步测定了铃兰提取液的羟自由基（·OH）和过氧化氢（H2O2）的清除率及其还原力，以期综合探讨铃兰的抗氧化能力.

1 材料与仪器

铃兰于2010－06－05—2010－06－15采自吉林省汪清县天桥岭.铃兰全草自然阴干，粉碎，过60目筛，备用.1，1－二苯基－2－苦肼基（DPPH）、邻二氮菲等购自Sigma公司.

仪器有：U－1900紫外分光光度计（Hitachi High－Technologies Corporation，Japan）；HH－W恒温水浴箱（金坛市恒丰仪器厂）；FA604A电子天平（上海精天电子仪器有限公司）.

2 测定方法

2.1 铃兰抗氧化物质的提取

通过正交实验［5］考察提取溶剂、提取温度和提取时间等3个试验因素对铃兰抗氧化物质提取的影响（表1）.每个因素设3个水平，以10 mg／mL的铃兰水提液对DPPH·的清除率作为指标，选用L9（33）正交试验表优选铃兰抗氧化物质的提取条件（表2）.

2.2 DPPH·清除率的测定

将0.1 m L的样品和2.9 m L的62.5μmol／L DPPH－甲醇溶液混合，空白管以0.1 m L的甲醇代替样液，对照管为0.1 m L上述样液加2.9 m L甲醇；涡漩，室温静置20 min，于517 nm处分别测定吸光值［6］.样品对DPPH·的清除率（%）＝［1－（A－Ab）／A0］×100%，其中A、Ab和A0分别为样品管、对照管及空白管测定的吸光值.

2.3 ·OH清除率的测定

采用邻二氮菲－Fe氧化法［7］进行测定.

2.4 H2 O2清除率的测定

参照郑超楠等的方法［8］进行测定.

2.5 还原力的测定

参照Oyaizu的方法［9］进行测定.

3 实验结果

3.1 铃兰抗氧化物质的提取

DPPH·的清除率是评价物质抗氧化能力的指标之一.从表2直观分析可知：得A1＞A2＞A3、B1＞B2＞B3、C3＞C2＞C1；在10 mg／m L的浓度和A1B1C3条件下，铃兰提取液的DPPH·清除率最高，达96.1%，即用蒸馏水在75℃提取30 min为铃兰抗氧化物质提取的最佳提取条件.从表2还可看出，各因素对铃兰抗氧化物质提取的影响依次为A＞C＞B，即提取溶剂＞提取温度＞提取时间.

表1 铃兰抗氧化物质的提取因素水平表

表2 铃兰抗氧化物质的提取L9（33）正交试验表

3.2 铃兰水提物对DPPH·的清除作用

以上述方法制备不同浓度的铃兰水提物，测定其对DPPH·的清除能力.与Vc比较显示：铃兰也具有明显地清除DPPH·的能力（图1），并且随着铃兰水提物浓度的增加，其对DPPH·的清除率逐渐上升；其浓度为6 mg／m L时，清除DPPH·的能力与Vc接近，这表明铃兰水提物是一种较好的DPPH·清除剂.

图1 铃兰水提物对DPPH·的清除作用

3.3 铃兰水提物对·OH的清除作用

对上述方法制备的不同浓度的铃兰水提物进行·OH清除能力的测定.图2显示：铃兰水提物具有明显地清除·OH的能力，并且随着铃兰水提物浓度的增加，其对·OH的清除率逐渐上升；其浓度为4 mg／mL时，清除·OH的能力已与Vc接近，这表明铃兰水提物是一种较好的·OH清除剂.

图2 铃兰水提物对·OH的清除作用

3.4 铃兰水提物对H2 O2的清除作用

对上述方法制备的不同浓度的铃兰水提物进行H2O2清除能力的测定.图3显示：铃兰水提物具有较好地清除H2O2的能力，并且随着铃兰水提物浓度的增加，其对H2O2的清除率逐渐上升；其浓度为1 mg／mL时，对H2O2的清除率（79.23%）接近于Vc的水平.

图3 铃兰水提物对H 2 O2的清除作用

3.5 铃兰水提物的还原力

对上述方法制备的不同浓度的铃兰水提物进行还原力的测定.图4显示：铃兰水提物具有较强的还原力，并且随着铃兰水提物浓度的增加，反应液的A700值逐渐上升；其浓度为5 mg／m L时，其还原力的A值已与Vc的A值接近.

图4 铃兰水提物的还原力

4 结论

本研究表明：铃兰水提物对·OH和H2O2表现出较强的清除能力及还原力，说明铃兰水提液具有很好的抗氧化性；铃兰抗氧化物质的最佳提取条件是用蒸馏水在75℃下提取30 min，其对DPPH·的清除率达96.1%，且对DPPH·的清除能力随浓度的增加而增强.

［1］孙启时，王维宁，张泽军.药用植物铃兰的研究［J］.沈阳药科大学学报，1995，12（3）：178－181.

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［9］Oyaizu M.Studies on products of browning reactions：antioxidative activities of products of browning reaction prepared from glucosa mine［J］.Japanese Journal of Nutrition，1986，44：307－315.

Antioxidant activities ofConvallariakeiskeiMiq.

LI Han－xi1，YANG Xiang2，ZHANG Min－feng1，SHI Su－yun1＊
（1.KeyLaboratoryforNaturalResourceofChangbaiMountain＆FunctionalMolecules（YanbianUniversity），MinistryofEducation，Yanji133002，China；2.DepartmentofComputerScienceandTechnology，CollegeofEngineering，YanbianUniversity，Yanji133002，China）

Antioxidant activities of water extract ofConvallariakeiskeiMiq.are determined through the orthogonal experiment of DPPH·scavenging capacity.Moreover，the·OH and H2O2scavenging capacity and reducting power ofConvallariakeiskeiMiq.extract are analyzed.The optimized extract technology for the antioxidant extract ofConvallariakeiskeiMiq.are as follows：theConvallariakeiskeiMiq.with water extraction solvent for 30 min at 75℃.The DPPH·scavenging capacity is 96.1%，and the scavenging ability of DPPH·is enhanced with increasing concentration.ConvallariakeiskeiMiq.water extract sho wstronger·OH and H2O2scavenging ability and reducting power.It is sho wthatConvallariakeiskeiMiq.water extract here stronger antioxidant ability.

ConvallariakeiskeiMiq.；water extract；antioxidant activity

R285.5

A

1004－4353（2012）01－0064－03

2011－09－13

延边大学“211”工程三期建设项目（YB211－0302）

＊通信作者：施溯筠（1972—），女，博士，副教授，研究方向为天然生物资源的开发与活性成分研究.