疮疡灵/明胶海绵复合物的质量控制及主要成分体外释放率的测定

张瑞 张朋 王娜

[摘要] 目的：研究疮疡灵/明胶海绵复合物体外释放率，探讨其质量控制的方法。方法：采用气相色谱法对疮疡灵/明胶海绵复合物主要成分进行体外释放度的测定。结果：溶液24 h内基本稳定，冰片1、2、24 h的累积释放率分别为36.79%、54.54%、96.12%，释放时间达24 h。结论：该制剂方法设计合理，稳定性良好，制备方法可行，所建立的质量标准可用于疮疡灵/明胶海绵复合物的质量控制。

[关键词] 疮疡灵/明胶海绵复合物；体外释放率；气相色谱法

[中图分类号] R944.9[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2011）11（c）-040-03

Quality standard and study on the main ingredients release in vitro of Chuangyangling /Absorbable Gelatin Sponge Compound

ZHANG Rui1, ZHANG Peng2, WANG Na3

1.Department of Stomatology, Zhengzhou Center Hospital, He′nan Province, Zhengzhou 450007, China; 2.School of Stomatology, Zhengzhou University, He′nan Province, Zhengzhou 450052, China; 3.Department of Pharmaceutics, Zhengzhou Center Hospital, He′nan Province, Zhengzhou 450007, China

[Abstract] Objective: To study on the release of Chuangyangling/Absorbable Gelatin Sponge Compound and establish its quality standard. Methods: Gas chromatography was used to examine the release rate in vitro of the main ingredients of Chuangyangling/Absorbable Gelatin Sponge Compound. Results: The solution was stable within 24 h basically. The release rate of Borneol at 1, 2, 24 h was 36.79%, 54.54%, 96.12% respectively. Conclusion: The method of design is reasonable with well stability. The established quality standard is applicable for the quality control of Chuangyangling/Absorbable Gelatin Sponge Compound.

[Key words] Chuangyangling/Absorbable Gelatin Sponge Compound; Release rate in vitro; Gas chromatography

疮疡灵散是河南武警总队医院研制的纯中药外用制剂[批准文号：武制字（2011）F14002]。该药主要由冰片、珍珠、葛根等组成，具有消炎止疼、活血化瘀、去腐生肌、改善循环的作用，口腔科主要用于治疗拔牙术后干槽症的发生及各种原因所致的口腔黏膜溃疡性疾病。近年来，国内外利用生物粘附技术发展起来的黏膜粘附制剂发展迅速，由于口腔的特殊生理环境，现用于局部治疗口腔黏膜疾病的普通制剂如散剂、涂剂、含片、普通膜剂等多数在口腔内停留时间短，难以在病变部位达到持续有效的药物浓度，而黏膜粘附制剂则很好地解决了该问题[1]。笔者利用生物粘附原理研制了疮疡灵/明胶海绵复合物，并对其主要成分冰片进行体外释放度的研究，为该制剂的质量控制提供依据。

1 仪器和试药

1.1 仪器设备与试剂

仪器：岛津GC-14B气相色谱仪，氢火焰离子化检测器，101型电热鼓风干燥箱。

试剂：水杨酸甲酯（中国药品生物制品检定所），聚乙二醇20 000（PEG-20M），冰片对照品（中国药品生物制品检定所，批号：094328902，龙脑、异龙脑合并计算，归一化法测定结果为98.8%）。

1.2 疮疡灵/明胶海绵复合物的制备

取冰片、葛根、珍珠等原药按一定比例混合，经低温超微粉碎机在0℃条件下进行超微粉碎，过120目筛混合均匀，制成干粉剂，60Co照射后4℃冷藏备用。

精密称取400 g粉剂，加蒸馏水溶解定容至1 000 ml，充分混匀，配制成浓度为40%的疮疡灵原药溶液，再加入明胶海绵，使其充分吸水膨胀并溶解，经打泡、冷冻、干燥，分割成10 mm×10 mm×5 mm大小，制成每块约含0.4 g药物的疮疡灵/明胶海绵复合物，环氧乙烷灭菌后保存备用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

以Chromosorb W-AW DMCS（60～80目）为担体，涂布10% PEG-20M固定相的玻璃柱（3 mm×3 m）；柱温：140℃；进样口温度：200℃；检测器：氢火焰离子化检测器；温度：200℃；载气（氮气）流速：45 ml/min，氢气流速：45 ml/min，空气流速：500 ml/min。在该色谱条件下，冰片与内标物水杨酸甲酯可得到基线分离的色谱图。色谱柱理论塔板数按水杨酸甲酯计算，不低于1 900。取冰片的2种成分龙脑和异龙脑的峰面积之和计算含量，对照品色谱图及阴性对照色谱图，见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标溶液的制备取水杨酸甲酯适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每毫升含5 mg的溶液，作为内标溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取冰片对照品，加乙酸乙酯制成每毫升含5 mg的溶液，摇匀即得对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备取本品1块，研碎，加乙酸乙酯适量，置10 ml容量瓶中，超声提取10 min，精密加入内标液1 ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液即得。

2.3 线性范围考察

分别精密量取1、2、3、4、5 ml对照品溶液，置于10 ml量瓶中，分别精密加入内标液1ml，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀。分别吸取1 μl进样，在上述色谱条件下操作。以对照品量/内标量为横坐标，对照品量/内标物量为纵坐标，进行线性回归处理，得回归方程：Y=1.037 3X+0.024 2，r=0.999 8，线性范围为0.5～2.5 mg/ml，线性关系良好。具体数值见表1，标准曲线见图3。

2.4 精密度试验

取对照品溶液2 μl，连续进样5次，测定，记录峰面积，计算RSD，结果显示，5次进样所得的峰面积值分别为157 526、157 085、157 072、159 427、159 759，平均为158 174，RSD=0.83%（n=5），说明本法精密度良好。

2.5 重复性试验

取同一样品依法测定5次，记录峰面积，计算RSD，结果显示，5次进样所得的峰面积值分别为158 276、157 946、156 356、159 461、159 391，平均为158 286，RSD=0.71%（n=5），说明本方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液，室温避光放置，分别于0、3、6、9、12、24 h进行测定，记录峰面积，计算RSD，结果显示，5次进样所得的峰面积值分别为156 576、156 246、156 356、156 461、156 491、149 885，平均为155 336，RSD=1.72%，表明溶液在24 h内基本稳定。

2.7 加样回收率试验

分别取已知含量的供试品溶液共5份，每份2 ml，置10 ml容量瓶中，分别精密加入冰片对照品1 ml，加入内标溶液1 ml，并按上述色谱条件测定，计算得平均回收率为97.31%（n=9），RSD=0.73%，加样回收率结果良好。见表2。

2.8 释放度测定

疮疡灵/海绵明胶复合物主要成分体外释放度的测定，按《中国药典》2010年版二部溶出度测定法第三法装置，将溶出杯密封，温度（37.0±0.5）℃，转速100 r/min，释放介质为去气泡的纯化水500 ml。分别于1、2、4、6、8、10、12、14、16、20、24 h取样5 ml（同时补加5 ml同温介质），样品经0.8 μm的微孔滤膜过滤。精密吸取样品溶液2 ml，精密加入水杨酸甲酯的乙酸乙酯溶液1 ml，涡旋混匀5 min，离心（5 000 r/min）10 min。吸取上清液1 μl进行测定。测定峰面积，代入回归方程，计算样品含量，以样品中实际含量为100％，计算冰片的累积释放百分率，结果见表3。疮疡灵/海绵明胶复合物中冰片的释放曲线，见图3。

3 讨论

疮疡灵散是严格按照中医复方标准和中药制剂要求，经现代制药工艺加工制成的外用药物，对临床各种顽固性疮疡病如压疮、糖尿病性溃疡、下肢溃疡等均有良好的治疗效果[2]。口腔内的疮疡性疾病如干槽症及各种黏膜溃疡为口腔科常见病，且以剧烈疼痛为特点，给患者带来较大痛苦。谭燕等[3]研究证实疮疡灵用于治疗干槽症止痛效果好，且能促进肉芽早期生成，尤其是疮疡灵中的主要成分冰片具有止痛理气、改善循环的作用。

近年来，以西药为原料的中药缓释、控释剂型发展迅速[4]。中药缓释制剂剂型多样，根据使用方式的不同，可分为外用、内用及其他类型。除了对药物的释放速度进行有效控制外，还出现了控制释药部位和控制释药时间的缓释等控释系统[5]。笔者在应用疮疡灵散剂局部治疗口腔疮疡感染性疾病取得一定疗效的基础上，选取明胶海绵作为支架材料，利用其多孔性结构及生物粘附性特点，研制出疮疡灵/明胶海绵粘附缓释制剂。该剂型的特点是可与口腔黏膜发生粘附作用，从而加强了药物与黏膜接触的紧密性和持续性，从而达到药物的缓释效果，临床应用于拔牙术后干槽症的预防与治疗，也取得了理想的治疗效果[6]。

本试验为检测疮疡灵/明胶海绵复合物的药物释放情况，对其主要成分冰片进行了体外释放率测定，并对该中药制剂的质量控制进行了研究。中成药由于成分复杂，分离提取繁琐，所以一直是药品检验的难点。《中国药典》2000年版一部规定，中药质量控制试验的主要内容包括提取条件的选定，检测指标的分离纯化，检测条件的选择，空白对照试验，加样回收率试验，精密度试验及稳定性考察等。本试验中药物精密度及重复性试验结果表明，所采用的方法精密度良好，重复性良好；稳定性试验结果表明，溶液在24 h内基本稳定，从而建立了疮疡灵/明胶海绵复合物的质量监控标准，确保了临床应用的安全性和有效性。

气相色谱法是《中国药典》2010年版所收录的测定中药有效成分含量的常用方法之一，具有高效能、高选择性、高灵敏度、速度快等优点，特别适用组分较复杂的生物样品中药物的分离测定，所分析的物质应具有一定挥发性和热稳定性。冰片为疮疡灵的主要成分，其结晶成分为右旋龙脑，具有挥发性，因此对疮疡灵/明胶海绵复合物主要成分冰片的体外释放度测定选取了气相色谱法。本试验检测结果显示，冰片在最初的1 h内即开始稳定释放，1 h和2 h的累积释放率分别达到了36.79%和54.54%，观察24 h的累积释放率超过了90%，说明该制剂中冰片的释放可以持续24 h以上。

综合上述试验结果，本试验以冰片为指标，采用气相色谱法测定该制剂中冰片的溶出量，操作简便、结果准确，可用于疮疡灵/明胶海绵粘附缓释物的溶出度测定及质量控制。该粘附缓释物实现了较长时间的维持治疗浓度，达到了预期的缓释效果。中药现代化的目的之一是减少中药复方制剂中的非药效因素，提高制剂水平，由传统的膏、丹、丸、散向现代化的剂型发展[7]。如何优化复合物的配比处方，寻求充分反映药物疗效和安全性的指标，是笔者今后研究的方向。

[参考文献]

[1]王琼,黄耀州.中药粘膜给药制剂的研究进展[J].中成药,1999,21(7):381-382.

[2]常凤鸣,朱照阳,蒋月星.疮疡灵的临床应用[J].武警医学,1992,3(4):33-34.

[3]谭燕,常凤鸣,解邦杰,等.疮疡灵与甲硝唑局部治疗干槽症的临床对照研究[J].现代中西医结合杂志,2002,11(16):1536-1537.

[4]李俊松,冯怡,徐德生.中药缓、控释制剂研究现状及思考[J].中成药,2007,29(4):563-567.

[5]张建春,赵黎明,邓明德.现代科技革命对中药制剂发展的影响[J].中国药房,2010,21(47):4417-4419.

[6]张瑞,张朋,赵曼.疮疡灵复合明胶海绵预防拔牙干槽症的临床研究[J].医药论坛杂志,2010,31(10):68-70.

[7]贾英杰,李小江,张丽丽,等.中药复方的拆方研究进展[J].实用中医药杂志,2011,27(8):578-580.

（收稿日期：2011-09-15）