高效液相色谱法测定月饼中3种防腐剂*

金 露 张 妤 虞选柯 郭应建 陆雪娇 关允诗 黄光荣*

（中国计量学院生命科学学院，杭州 310018）

高效液相色谱法测定月饼中3种防腐剂*

金 露**张 妤 虞选柯 郭应建 陆雪娇 关允诗 黄光荣***

（中国计量学院生命科学学院，杭州 310018）

利用高效液相色谱法测定5种月饼样品中的3种常见防腐剂苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的含量。样品经提取、脱蛋白、膜过滤后，用高效液相色谱进行测定。结果表明，3种防腐剂的测定线性相关性均在0.99以上，检测线性范围为10 μg/mL～200 μg/mL。该方法应用于5种月饼中苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的测定结果表明，5种样品均检出山梨酸，3种样品检出有脱氢乙酸，均未检出苯甲酸。

高效液相色谱；月饼；防腐剂

月饼是我国人们在中秋节前后普遍消费的一类大众食品，种类各式各样，其保质期也各不相同。2011年6月20日起，我国实施新的国家标准《食品安全国家标准——食品添加剂使用标准》，与2007版标准相比，有27类食品添加剂被限制使用，其中包括在月饼中不得使用苯甲酸及传统抗氧化剂BHA（丁基羟基茴香醚）、BHT（二丁基甲基甲苯）和TBHQ（特丁基对苯二酚）。因此，月饼的保质期相比以前都将会大大缩短。目前，月饼的保质期一般30 d～60 d，有的只有15 d左右。

为防止月饼及馅料不腐败变质，添加防腐剂是一种有效的方法。防腐剂虽可抑制食品中微生物的繁殖，但添加过量，不仅能破坏VB1，还可能使钙形成不溶物，影响人体对钙的吸收；另外，防腐剂对人胃肠有刺激作用，过量食用还可能引发癌症。苯甲酸在酸性条件下抑菌范围广、价格低廉，在以前的食品防腐中被广泛应用，但是苯甲酸的毒性远远大于山梨酸；山梨酸及其钾盐的毒性相对较小，抗菌力强，是月饼中最常使用的防腐剂之一；脱氢乙酸具有较强的抑制细菌、霉菌及酵母菌的作用，尤其对霉菌的抑制作用很强，是一种广谱、高效的防霉、防腐剂，同时其脂溶性强、热稳定性极高，尤其适用于热加工食品。现行国家标准GB2760-2011《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》规定月饼防腐剂中禁用苯甲酸，山梨酸及其钾盐最大使用量1.0 g/kg（以山梨酸计），脱氢乙酸及其钠盐最大使用量0.50 g/kg（以脱氢乙酸计）。

本次研究采用高效液相色谱法分别对市售5种月饼样品中的防腐剂苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的含量进行了测定。

1 材料与方法

1.1 主要仪器和试剂

仪器：高效液相色谱仪（LC-15C），数控超声波清洗器（KQ2200DE），电子天平（JA2003），台式高速冷冻离心机（CT14RD）。

试剂：甲醇为色谱纯试剂，苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸为色谱级标准品，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件

测定苯甲酸和山梨酸钾色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（250×4.6 mm，5 μm）；柱温40℃；流动相为甲醇-0.02 mol/L乙酸铵（体积比5∶95）；流速1.0 mL/min；进样量：10 μL；检测波长230 nm。

测定脱氢乙酸色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（250×4.6 mm，5 μm）；柱温30℃；流动相为甲醇-0.02 mol/L乙酸铵（体积比10∶90）；流速1.0 mL/min；进样量：10 μL；检测波长293 nm。

均采用色谱峰的保留时间来定性，以外标法峰面积来定量计算含量。

1.3 标准溶液的配制

储备液：准确称取苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸标准品，用超纯水溶解并定容，配成质量浓度为1.000 mg/mL的储备液，4℃冰箱保存。

工作液：准确量取适量的苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的储备液，以超纯水逐级稀释，配制成系列浓度的工作溶液，过孔径0.22 μm滤膜，取10 μL进样分析。

1.4 样品的预处理

用刀把5种月饼样品分别切碎、挤压，呈肉眼看不到大颗粒的均匀黏糊状。

测定苯甲酸、山梨酸的样品前预处理方法：准确称取5.0 g均匀黏糊状样品于25 mL容量瓶中，加入10 mL超纯水，再先后加入0.5 mL 0.5 mol/L氢氧化钠溶液、4 mL质量分数10%亚铁氰化钾溶液和4 mL质量分数20%乙酸溶液，震荡混匀后用稀醋酸调pH至7.0～8.0，用超纯水定容。混匀静置30 min，待沉淀蛋白后，用滤纸过滤，滤液再经孔径0.22 μm微孔滤膜过滤，收集滤过液于样品瓶中保存，供高效液相色谱测定。每个样品做3次重复，以平均值计算含量。

测定脱氢乙酸的样品预处理方法：准确称取5.0 g均匀黏糊状样品于25 mL容量瓶中，加入约10 mL超纯水，然后加入5 mL质量分数12%硫酸锌溶液，用氢氧化钠溶液调pH至7～8，超声提取10 min，再以超纯水定容至刻度；将提取液过滤后取适量滤液转移到分液漏斗中，加入10 mL正己烷，振摇1 min，静置分层，弃去正己烷层，再加入10 mL正己烷重复进行萃取；取下层水相离心（4 000 r/min，10 min）；取上清液过孔径 0.22 μm滤膜，收集滤过液于样品瓶中保存，供高效液相色谱测定。

2 结果与分析

图1 苯甲酸HPLC测定标准曲线

2.1 标准曲线

分别在苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的高效液相色谱测定条件下测定，以峰面积为纵坐标，标准液浓度为横坐标，线性拟和得到苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸3种防腐剂高效液相法测定的标准曲线，如图1、图2和图3所示。结果表明，苯甲酸在 10 μg/mL～200 μg/mL、山梨酸在 20 μg/mL～200 μg/mL、脱氢乙酸在 1 μg/mL～200 μg/mL浓度范围内呈线性关系，线性相关系数平方值（R2）分别为0.999 9、0.997 4和0.994 0，可以应用于样品中3种防腐剂的检测。

图2 山梨酸HPLC测定标准曲线

图3 脱氢乙酸HPLC测定标准曲线

2.2 样品测定

在标准色谱条件下，我们对市场购买的5种月饼样品进行了苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸3种防腐剂的含量测定，结果如表1所示。在5种月饼样品中均检出山梨酸，含量在111.9 mg/kg～180.2 mg/kg之间，符合GB2760-2011的要求（≤1.0 g/kg）；三种月饼样品中检出脱氢乙酸，含量在16.8 mg/kg～137.8 mg/kg之间，2种月饼样品中未检出，也符合新标准规定（≤0.5 g/kg）；5种月饼中均未检出苯甲酸。

表1 市售月饼样品中苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的含量测定

3 结 论

高效液相色谱法可以很好地检测月饼样品的苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸3种食品防腐剂。在5种月饼样品中，均检出山梨酸，含量符合新的国家标准；部分样品中检出脱氢乙酸，其含量也符合新的国家标准规定；5种样品中均未检出苯甲酸。市售5种月饼中主要依靠山梨酸来防腐，部分月饼同时使用山梨酸和脱氢乙酸来防腐。

［1］中华人民共和国卫生部.GB 2760-2011食品安全国家标准——食品添加剂使用标准［S］.北京：中国标准出版社，2011.

［2］程盛华，丁丽，林玲，等.高效液相色谱法同时测定月饼中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠［J］.食品科学，2008，29（6）：376-378.

［3］义志忠，彭寨玉.高效液相色谱法测定月饼中山梨酸［J］.中国卫生检验杂志，2004，14（2）：214.

［4］张辉珍，马爱国，梁惠.高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸的方法研究［J］.卫生研究，2007，36（6）：748-750.

［5］中华人民共和国卫生部.GB/T 5009.29-2003.食品中山梨酸、苯甲酸的测定［S］.北京：中国标准出版社，2003.

［6］黄欣，周玉，吴小平，等.高效液相色谱法测定月饼中5种食品添加剂［J］，中国卫生检验杂志，2009，19（2）：335-336.

Determination of three antimicrobial reagents in mooncakes by high performance liquid chromatography

JIN Lu**ZHNAG Yu YU Xuan-keGUO Ying-jian LU Xue-jiao GUAN Yun-shiHUANG Guang-rong***
（College of life sciences，China jiliang university，Hangzhou 310018，China）

Three common kinds of antimicrobial reagents in mooncakes,benzoic acid,sorbic acid and dehydroacetic acid,were determined with high performance liquid chromatography (HPLC).After extracting,removal of proteins and membrane filtration,samples were tested with HPLC.The experimental results showed that the determination of linear correlation of these three antimicrobial reagents were above 0.99 with the linear detection range at 10 μg/mL ～200 μg/mL.After testing the contents of benzoic acid,sorbic acid and dehydroacetic acid in five kinds of mooncakes by this method,the results demonstrated that all of these samples contained sorbic acid,three of samples contained dehydroacetic acid,and no samples contained benzoic acid.

high performance liquid chromatography；mooncake；antimicrobial reagent

TS207.3

A

1673-6004（2012）01-0049-03

* 资助项目：省实验教学示范中心（浙高教[2010]151）和校教改实验专项（HEXSY2011083）资助

** 金露，男，1991年出生，中国计量学院食品质量与安全专业本科在读

*** 黄光荣，通讯作者，Email：grhuang@126.com

2011-12-07