HPLC法测定清瘟解毒片中葛根素的含量*

董宪凤

(天津市大港区药品检验所，天津 300270)

HPLC法测定清瘟解毒片中葛根素的含量*

董宪凤

(天津市大港区药品检验所，天津 300270)

目的:建立HPLC法测定测定清瘟解毒片中葛根素的含量。方法:采用Diamonsil C18分析柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇－水(25∶75)为流动相，流速0.8 ml/min，检测波长为250 nm，柱温30℃。结果:本方法线性范围为0.038 6 ～0.772 μg(r=1.000)，平均回收率在97.87% ，RSD 为0.42%(n=9)。结论:本方法灵敏准确，重现性好，适用于清瘟解毒片中葛根素的含量测定。

高压液相色谱法，清瘟解毒片，葛根素

清瘟解毒片由大青叶、玄参、连翘、天花粉、桔梗、淡竹叶、葛根、炒牛蒡子和黄芩等16味中药材组成，具有清瘟解毒作用，用于外感时疫、憎寒壮热、头痛无汗、口渴咽干、痄腮和大头瘟。为了更加有效的控制产品的质量，利用HPLC法对处方葛根中葛根素进行含量测定，方法操作简便易行，具有分离好、灵敏度高、稳定性强等优点。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪 LC－2010AHT，岛津高效液相色谱仪工作站 LC－Solution，Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，葛根素对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110752－200912);清瘟解毒片(天津中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂，批号1102285、1011278、1103291);甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 方法和结果

2.1 色谱条件［1，2］色谱柱为 Diamonsil C18柱，流动相:甲醇 － 水(25∶75)，流速为 0.8 ml/min，柱温30 ℃，检测波长为250 nm，进样量10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精取葛根素对照品7.72 mg至200 ml棕色量瓶中，加30%乙醇溶液溶解稀释至刻度，做为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，混匀，精取约0.2 g，精密加入30%乙醇50 ml，称定重量，超声处理20 min，放冷，称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液备用。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例(葛根除外)根据制法制成的阴性样品，按“2.2.2”项下方法提取，作为阴性对照溶液。

2.3 线性关系考查 精取对照品溶液1、2、4、10、15和20 μl，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积 Y 为纵坐标，进样量 X为横坐标求得回归方程为 Y=2.460 1 ×105X －3.186 9 ×102(r=1.000)，结果葛根素在0.038 6～0.772 μg范围内呈良好线性关系。

2.4 专属性试验 分别取对照品、供试品和阴性对照溶液10 μl，依“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图1，结果在葛根素出峰位置未见其他色谱峰，表明其他药材成分对测定无干扰。

图1 对照品(A)供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图

2.5 精密度试验 精密吸取一定浓度的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样5 次，进样量10 μl，测定葛根素峰面积，RSD为0.55%。

2.6 重现性试验 取同批号的样品0.2 g，按供试品配制方法制备5份，测定葛根素的含量，RSD为1.02%(n=5)。

2.7 稳定性试验 精密吸取同一浓度的供试品溶液于不同时间按“2.1”项下色谱条件测定，结果表明在24 h内稳定。

2.8 回收率试验 精密称取9份已测得葛根素含量的样品，分别加入葛根素对照品按样品测定方法进行测定，结果平均回收率为97.87%，RSD为0.42%，见表1。

表1 加样回收试验

2.9 样品测定 取3批样品，按“2.2.2”项下方法制得供试品溶液，按所给色谱条件分别测定峰面积，用外标法计算含量，结果见表2。

表2 清瘟解毒片中葛根素的含量(n=3)

3 讨论

3.1 流动相的选择 将甲醇－水(10∶80)、甲醇－水(25∶75)、10% 乙腈 －1% 醋酸(54∶46)、甲醇－0.5%冰醋酸(25∶75)四种流动相进行比较，结果表明选用甲醇－水(25∶75)流动相分离效果好。

3.2 样品溶液提取方法的选择 本实验对提取溶剂、提取方式和提取时间进行了比较，选择30%甲醇溶液及30%乙醇溶液溶解样品，结果表明30%乙醇溶液作为溶剂提取完全。采用30%乙醇溶液对样品进行加热回流提取与超声提取均为20 min，超声处理所得结果比加热回流提取所得结果稍高，故采用超声提取方法处理供试品。在选择提取时间时，分别用30%乙醇溶液超声20、30和60 min，结果超声20 min测得的葛根素峰面积与其他时间测得的峰面积没有显著差异，所以提取时间定为20 min。该法具有提取完全、操作简单快速、准确度和精密度均较好等优点，是一种简便有效的检测葛根素含量的方法。应用此法测得3批样品结果表明，该方法可用于该制剂的质量控制。

1 中国药典.一部.2010:1041

2 李雪晴，文爱东.HPLC测定康尔肤胶囊中葛根素的含量.中国实验方剂学杂志.2011.17(8):137

HPLC determination of puerarin content of in Qingwenjiedu teblets

Dong Xianfeng
(The Insititute for Drug Control of Dagang，Tianjin 300270)

Objective:An HPLC method was developed for the determination of Puerarin in Qingwen Jiedu tablets.Methods:The chromatographic separation was carried out on Diamonsil C18column(250 mm ×4.6 mm ，5 μm)for the analysis of the mobilephase was methanol－ water(25∶75)，flow rate at 0.8 ml/min，Detection wavelength was set at 250 nm and column temperature was 30 ℃ .Result:the linear range was 0.038 6 ～ 0.772 μg(r=1.000)，the average recovery rate was 97.87%，RSD was 0.42%(n=9).Conclusion:The method was sensitive，accurate and reproducible.It is suitable for the studying on the content of puerarin of in Qingwenjiedu Teblets.

HPLC，Qingwenjiedu teblets，puerarin

R927.2

A

1006-5687(2012)04-0013-03

2012-03-30