LunX mRNA在非小细胞肺癌患者的检测意义

郝 颖（综述），付秀华（审校）

（内蒙古医学院第一附属医院呼吸内科，呼和浩特 010059）

肺癌是威胁人类生命的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率乃居恶性肿瘤之首，其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）病例占全部肺癌病例的80%。近些年，针对肺癌综合治疗的研究已取得较大成绩，但肺癌总的5年生存率仍只有13%，即使Ⅰ、Ⅱ期 NSCLC患者，术后5年生存率也只有 40% ～ 70%［1，2］，其主要限制因素为肺癌的复发和远处转移，故及早发现NSCLC患者是否有微转移存在对疾病的诊断分期、治疗方案的选择及预后评价有积极意义。

1 LunX mRNA与肺癌微转移

肺特异性X蛋白（lungspecific X protein，LunX）mRNA是日本学者Iwao等运用差异显示技术通过对人体13种不同组织中分离出来的RNA，该基因定位于20p11.1～ q12，全长 1015 bp，包括一个编码 26 个氨基酸的768个核苷酸的开放式读码框。由它所合成的人LunX的相对分子质量为26.7×103。研究表明，LunX基因仅在肺组织中特异表达，而在肺外组织不表达［3］。LunX的生理功能暂不明确。微转移是指恶性肿瘤在发展过程中，播散并存活于血循环、淋巴道、骨髓及各组织器官中，尚未形成转移结节，无临床表现，CT、B超、骨扫描等常规检测方法和临床病理检查都难以检测发现的一种微量转移。微转移是肿瘤多阶段、多步骤中的过程之一，最终转移病灶的形成受到脱落癌细胞的自身生物学特性、机体免疫状况、局部血供形成等各方面的影响［4］。选择恰当的靶基因是决定检测结果是否可靠的重要因素，有研究认为，LunX mRNA对肺癌外周血及区域淋巴结微转移具有较高的敏感性和特异性［5，6］，且目前研究发现的其他肺癌特异性基因较少，因此组织特异性mRNA常被用于检测肺癌的微转移［7］。

2 LunX mRNA检测技术及取材部位

反转录-聚合酶链反应可在106～107个正常细胞中检出1～10个肿瘤细胞，检测微转移的灵敏度比传统的免疫细胞化学方法高出10～100倍，是目前用于诊断NSCLC微转移的最常用技术。荧光实时反转录-聚合酶链反应实现了基因表达定量检测，其中，绝对定量准确，但操作过程繁琐;相对定量操作相对简单，但定量不够准确［8］，这成为限制LunX mRNA检测在临床广泛应用的瓶颈，有待一种定量更精准、操作更简易、价格更经济的检测技术的问世。肺癌的微转移研究的常规取材部位包括区域淋巴结、外周血、骨髓及胸膜腔微转移，多数报道是对NSCLC的外周血及淋巴结微转移的研究，国内对骨髓、胸腔积液的实验研究尚不多。Cheng等［9］在NSCLC患者外周血及胸腔积液中均检测到LunX mRNA的表达，且是良恶性胸腔积液唯一显著不同的检测指标。

3 LunX mRNA与NSCLC的病理分型

LunX mRNA在不同病理类型NSCLC患者的阳性表达各家报道不一。庄翔等［10］通过对60例Ⅰ～Ⅲ期手术肺癌患者、20例肺部良性病变手术患者及10例健康人外周血LunX mRNA检测后认为，不同病理类型肺癌患者外周血的LunX基因阳性表达无统计学差异，可以避免由于肺癌病理类型较多而导致检测结果的假阴性，获得较好的敏感性。冯斌等［11］的实验得出同样结果，外周血LunX mRNA表达情况在不同病理类型之间差异无明显统计学意义，说明在中晚期NSCLC患者中不论是腺癌或鳞癌，外周血微转移发生的机会可能相似。姚舒洋等［12］的实验结果，LunX mRNA的淋巴结转移与肺癌病理组织类型无关。但也有研究认为NSCLC患者LunX mRNA的表达与病理类型有相关性。刘宏伟等［13］通过对54例NSCLC患者、50例肺良性病变和25例健康者外周血的研究发现，腺癌患者外周血LunX mRNA的阳性率高于非腺癌患者，由此可以预测腺癌更容易发生远处转移;低分化患者外周血微转移的阳性率高于中分化和高分化患者，说明外周血LunX mRNA的阳性率与患者的细胞分化程度有关，分化程度越低，癌细胞的恶性程度越高，外周血LunX mRNA的阳性检出率越高。黄同海等［14］的实验结果也显示，LunX mRNA在肺腺癌中表达的阳性率高于鳞癌中的阳性表达。

4 LunX mRNA与NSCLC的分期

多数学者认为，LunX mRNA表达与TNM分期密切相关。姚舒洋等［12］认为，LunX mRNA表达随着TNM分期的升高而增多，提示LunX mRNA与肺癌的微转移密切相关。刘宏伟等［13］在研究后发现，Ⅲ期和Ⅳ期患者LunX mRNA的检出率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期患者，TNM分期越高，LunX mRNA的阳性率越高。冯斌等［11］作了更加细致的分析:实验病例中，Ⅳ期患者阳性率显著高于Ⅲ期，提示肺癌患者分期越晚，肿瘤负荷越大，转移越广泛，外周血癌细胞检测阳性率越高，为肿瘤的进一步转移提供条件。庄翔等［10］的研究结果表明，Ⅰ期和Ⅱ期肺癌患者的LunX mRNA表达差异无统计学意义，Ⅲ期患者与Ⅰ期、Ⅱ期患者的LunX mRNA表达差异有统计学意义，提示LunX mRNA用于检测早期肺癌微转移以区别Ⅰ期与Ⅱ期的敏感性不够，但对中晚期肺癌患者的微转移诊断有帮助。朱广迎等［15］也有同样的报道，但Mitas等［5］对24例Ⅰ～Ⅳ期肺癌患者的研究后认为，LunX mRNA的表达与肺癌分期的关系并不密切。

5 LunX mRNA与NSCLC患者的治疗

通过检测NSCLC患者LunX mRNA的表达以明确是否有微转移的存在，从而可对治疗方案的制订提供重要依据。余小琴等［16］对NSCLC治疗前和常规化疗或手术治疗后的病例分别进行LunX mRNA检测，发现治疗前病例阳性率约为0.87%，治疗后病例阳性率为0.47%，两者阳性率有明显差别，说明LunX mRNA有可能成为考核临床治疗效果，尤其是化疗效果的重要参考指标。如上所述，刘宏伟等［13］认为，低分化患者外周血LunX mRNA的阳性率高于中分化和高分化患者，建议临床上要对病理检查为细胞分化程度低的NSCLC患者进行全身性化疗，防止微转移的发生。冯斌等［11］对不同客观疗效的亚组分析发现，化疗疗效与外周血LunX mRNA表达显著相关，部分缓解组和稳定组患者阳性率均较化疗前显著降低，分别为23.81%、26.09%，而进展组患者阳性率无明显降低，与化疗前相似，提示化疗可使有效或稳定患者的外周血癌细胞数量显著下降，而对病情进展患者的作用不大;化疗过程中多次监测外周血中循环癌细胞的LunX mRNA表达情况:化疗1周期后外周血LunX mRNA阳性表达率即显著下降，继续化疗2周期后阳性率未发现继续降低，提示在全身化疗的初始阶段，外周血循环癌细胞的变化情况已经可以预示化疗的客观疗效。Sher等［17］也认为，循环癌细胞的检测为快速判定治疗效果和改善预后提供了一种新的方法，特别是外周血LunX mRNA表达转阴的患者从后续化疗中获益更大，而化疗后外周血循环癌细胞检测仍阳性的患者提示疗效较差，可能从原方案的后续化疗中获益机会不大，肿瘤细胞可能存在继发或原发耐药，需要重新制订治疗计划以充分获益。

临床证实，依据以往的NSCLC TNM分期制订的治疗方案已经不能满足治疗需要运用分子生物学的方法发现早期肺癌微转移，有助于更准确地进行TNM分期，对指导肺癌多学科综合治疗、监测治疗疗效有重要的指导意义。［18］

6 LunX mRNA与NSCLC患者预后评价

庄翔等［10］提出，由于LunX基因在2001年才被发现，LunX的生物学行为尚不明确，目前缺乏长期随访的研究来证实其临床价值。在短期的随访中，朱广迎等［15］通过6～16个月随访LunX基因表达阳性组复发和转移率为52%，阴性组复发和转移率为18%（其缺乏统计学意义，可能与病例数较少有关），提示LunX mRNA阳性表达与转移有较为密切的关系。牛瑞等［19］对74例NSCLC患者进行3年的随访观察发现，年龄、营养指数、3年内的复发或转移率与手术切除区域淋巴结LunX mRNA检出率之间有统计学意义上的相关性，可能为患者年龄的增高、机体营养状况差而导致免疫状况减低，肿瘤细胞容易形成远处转移。患者的生存时间与LunX mRNA的表达亦有相关性，对评估预后及个体化治疗策略具有重要临床意义，但存在淋巴结微转移并非最终一定形成显性转移，还与癌细胞自身生物学特性、机体免疫状况、局部微环境等多因素有关，提示微转移的发生为多基因、多因素、多步骤综合作用的结果。

7 结语

NSCLC的发生发展是一个多因素参与的复杂过程，LunX与NSCLC存在有密切关系，其机制尚不清楚，LunX有望成为早期诊断NSCLC的理想分子标志物。目前，免疫组化技术已经应用于临床，多是对癌组织、淋巴结等实体组织的检测，患者必须经过有创操作才能获取标本，甚至手术。反转录-聚合酶链反应技术对标本取材部位的要求较低，可以选择外周血、骨髓、淋巴结、癌组织等多种组织为标本，但因该技术假阴性或假阳性的发生率较高，限制了其在临床诊断性检验的推广。故能够发明一种取材方便、操作简易、检测快捷准确、廉价的新型技术将成为肿瘤研究的新方向。然而，探究LunX与NSCLC预后的关系具有着重大意义。当前与NSCLC相关的分子标志物的研究各家报道不一，LunX能否成为NSCLC的一个独立的预后指标还值得继续研究，有待更多循证医学证据支持。

［1］张鹏，刘毅梅，陈洁，等.检测LunX mRNA表达诊断非小细胞肺癌微转移的可行性及其临床意义［J］.中国肺癌杂志，2006，9（6）:506-508.

［2］王小丽，陈椿.非小细胞肺癌微转移的检测及临床意义［J］.医学综述，2008，14（1）:124-126.

［3］Iwao K，Watanabe T，Fujivara Y，et al·Isolation of a novel human lung-specific gene，LUNX，a potential molecular marker for detection of micrometastasis in non-small-cell lung cancer［J］.Int J Cancer，2001，91（4）:433-437.

［4］张静，陈小东.肺癌微转移检测及其临床意义［J］.复旦学报（医学版），1999，16（5）:377-379.

［5］Mitas M，Hoover L，Silvestri G，et al.LunX is a superior molecular marker for detection of non-small cell lung cancer in peripheral blood［J］.J Mol Diagn，2003，5（4）:237-242.

［6］冯斌，孙亚红，宋丽华.逆转录聚合酶链反应检测肺癌外周血微转移基因的研究进展［J］.国际肿瘤学杂志，2007，34（2）:119-122.

［7］朱广迎，刘德林，王绪，等.LunX mRNA RT-PCR检测肺癌的微转移［J］.中国肿瘤临床，2003，30（2）:124-127.

［8］Schüler F，Dölken G.Detection and monitoring of minimal residual disease by quantitative real-time PCR［J］.Clin Chim Acta，2006，363（1/2）:147-156.

［9］Cheng M，Chen Y，Yu X，et al.Diagnostic utility of LunX mRNA in peripheral blood and pleural fliud in patients with primary nonsmall cell lung cancer［J］.BMC Cancer，2008，31（8）:156.

［10］庄翔，刘伦旭，朱文，等.肺癌患者外周血中LunX mRNA的检测［J］.中国胸心血管外科临床杂志，2007，14（3）:184-187.

［11］冯斌，吕丽燕，刘希斌，等.非小细胞肺癌化疗前后外周血LunX mRNA检测的临床意义［J］.肿瘤防治研究，2009，38（8）:669-672.

［12］姚舒洋，王潍博，崔言刚，等.LunX、CK19和 CEA基因在非小细胞肺癌淋巴结微转移中的比较研究［J］.中华临床医师杂志（电子版），2007，1（1）:10-13.

［13］刘宏伟，谢风，刘刚，等.RT-PCR法检测非小细胞肺癌患者外周血LunX mRNA的表达及临床意义［J］.中国实验诊断学，2008，12（8）:107-109.

［14］黄同海，王正，李富荣，等.巢式 PCR检测肺癌患者外周血CK19 mRNA和LunX mRNA的临床意义［J］.广东医学，2007，28（2）:236-238.

［15］朱广迎，张德林，陈杰.肺癌患者三种微转移标记物临床意义的比较研究［J］.中华放射肿瘤学杂志，2003，12（3）:178-182.

［16］余小琴，程民，张艳斌，等.LunX和CK19基因定量表达在肺癌诊断及疗效观察中的应用研究［J］.中国肿瘤防治杂志，2008，15（4）:255-258.

［17］Sher YP，Shih JY，Yang PC，et al.Prognosis of non-small cell lung cancer patiants by detecting circulating cancer cells in the peripheral blood with multiple marker genes［J］.Clin Cancer Res，2005，11（1）:173-179.

［18］田伶伶.TP方案与NP方案治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效分析［J］.中国现代医生，2008，46（11）:150.

［19］牛瑞，刘波，邵明举，等.非小细胞肺癌区域淋巴结中肺组织特异性基因的表达与预后的关系［J］.山东大学学报（医学版），2007，45（9）:882-885.