大鼠不同时期乳腺组织中雌激素孕激素及催乳素的变化规律

江青东，程会昌

（郑州牧业工程高等专科学校动物医学系，河南 郑州450011）

研究表明，雌激素在孕酮协同作用下，可增加乳腺细胞的孕酮受体数目，来促进乳腺小叶腺泡的发育［1－5］。孕酮主要作用是促进乳腺小叶及腺泡的发育，在雌激素刺激乳腺导管发育的基础上，能使乳腺得到充分发育。催乳素主要作用是促进乳腺发育、启动和维持泌乳［6－7］。在雌激素、孕激素及其他激素的共同作用下，促使乳腺发育；使乳腺小叶终末导管发展成为小腺泡，进而为哺乳作准备。同时随着妊娠的进行，催乳素与其受体的结合率增加，且可对其受体数量进行调控，来促进乳腺的发育及启动和维持泌乳。关于这3种激素相应受体的研究报道较少，零星的研究主要集中在乳腺癌。本文在对不同时期大鼠乳腺组织中雌激素、孕激素和催乳素水平的变化进行较系统试验，丰富动物乳腺发育调控理论，为用神经内分泌调控手段改善动物泌乳提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物及样品采集 SD大鼠，购自河南省实验动物中心，体重250g。在12h光照和12h黑暗的条件下喂养，环境温度20℃～25℃，自由采食和饮水。大鼠料购自河南省实验动物中心。根据阴道涂片决定发情周期的不同阶段，于发情前期处女鼠与雄性大鼠进行同笼饲养（1∶2），雌雄合笼后次日上午在阴道涂片中发现精子者定为妊娠第1天（d1），妊娠鼠单个饲养，分别于6d，12d，18d处死大鼠；分娩的当天看作泌乳0d，分别于6d，12d，18 d处死大鼠；另外处死处女鼠；每组6只。处死大鼠后取乳腺组织入液氮速冻，后置－80℃冰箱保存待测。

1.2 试剂和仪器 BSA蛋白、考马斯亮蓝G－250、乙醇、雌激素、孕激素及催乳素放免药盒（购自北京北方生物技术研究所）；匀浆器、离心机、752紫外分光光度计，SN－695型智能放免γ测量仪，液氮罐，－80℃冰箱等。

1.3 组织匀浆液的制备 取适宜大小的组织块，立即称重后于生理盐水（1～2mL）中于匀浆器中制成匀浆，4℃，12 000r/min离心20min，取上清液置－20℃待测。

1.4 匀浆液中蛋白质含量的测定 采用考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度，考马斯亮蓝在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律 ，因此可以通过测定染料在595nm处光吸收的增加量得到与其结合的蛋白质量。

标准曲线制作：取11支试管，按照表1依次加入试剂，摇匀，5min后测定各管OD595nm，并蛋白质浓度为横坐标，以OD595nm值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。

未知样品蛋白质浓度的测定：测定方法同上，取合适的未知样品体积于2支干净试管中，按上法测定OD595nm值，使其测定值在标准曲线的直线范围内，根据所测定的OD595nm值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度（mg/mL）。

表1 标准曲线制作

1.5 放免分析 雌激素、孕激素及催乳素放免试剂盒（由北京北方生物技术研究所提供）包括：标准品（S0－S6：0～4 000μIU/mL）、兔抗－Prl抗体、125IPrl、驴抗兔免疫分离剂组成。样本采用双管重复测定，依照试剂盒说明书进行。用γ－计数器测定沉淀cpm数，通过标准曲线换算匀浆液中雌激素、孕激素及催乳素的含量。

1.6 数据统计分析 根据匀浆液中蛋白质浓度及放射免疫所测E2、P及Prl含量的结果，将样本中E2、P及Prl的含量换算成pg/mg蛋白单位。所有数据均用X＋SD表示，并采用SPSS 13.0统计软件进行数据整理和统计，多组间比较用方差分析F检验，组间两两比较用SNK检验。

2 结果

乳腺组织中E2、P及Prl含量：不同时期大鼠乳腺组织中E2、P及Prl的含量见表2。

表2 不同时期大鼠乳腺组织中E2、P及Prl含量 （n＝6）

乳腺组织中：E2水平在处女期较高，分娩后，乳腺中E2水平又急剧升高，但整个泌乳期也呈逐渐下降趋势，且维持在基本接近处女期水平。结果显示，E2从处女期到整个妊娠期，其呈现下降趋势。而在分娩后E2水平急剧升高，后又有所下降，但维持在较高水平；P水平以处女期最高；随着妊娠开始，P水平逐渐下降，直至泌乳期18d降到最低。结果显示，在乳腺发育的不同时期，P在乳腺组织中的整体水平一直呈现下降趋势；Prl水平以处女期最高；随着妊娠的进行逐渐降低。结果显示，整个乳腺发育过程中Prl整体上几乎一直呈现下降趋势。

3 讨论

成年动物的乳腺一生中要经历发情周期中的增生和凋亡周期［8］。青春期雌激素可促进乳腺导管发育，孕酮促进乳腺腺泡的发育［9］。同时成年动物乳腺在动情期中的周期性生长也需Prl起作用，以保证乳腺对雌激素和孕酮的反应性［10］。从试验结果中可以看出，雌激素在促进乳腺发育及维持泌乳方面具有重要作用。青春期雌激素直接刺激导管发育，孕激素刺激上皮细胞DNA合成和腺泡发育［11－12］。本试验结果也发现，随着乳腺发育的不同时期，其E2的水平也发生了相应的变化。且变化模式与理论报道一致。P在雌激素刺激乳腺导管发育的基础上，它能使乳腺得到较为充分的发育。试验表明，切除垂体的去势大鼠，其乳腺完全缺乏对孕酮的反应。本试验结果发现，在乳腺发育的不同时期，P的水平也发生了相应的变化，尤其在妊娠期P水平明显高于其余各时期，也充分体现了P在与其他激素相互作用下促进乳腺发育和维持妊娠方面发挥了重要作用。且其变化模式与理论报道基本上一致。Prl在乳腺发育、启动泌乳和维持泌乳中都起着重要的作用，它协同卵巢类固醇激素（E2和P4）促进乳腺小叶腺泡的生长和上皮细胞的增殖，妊娠末期，Prl通过发动乳蛋白基因的表达来控制乳腺发育。本试验结果表明，Prl水平在处女期和泌乳期变化基本一致，而在妊娠期变化不完全吻合此结论与理论报道呈负相关。

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