人乳头瘤病毒与胰腺癌关系的初步探讨

刘冬梅 陈少夫

人乳头瘤病毒与胰腺癌关系的初步探讨

刘冬梅 陈少夫

早在20世纪90年代初期就已证实，人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染与宫颈癌有关[1]，现又证实HPV还与肛管癌、阴茎癌、口腔咽喉癌、膀胱癌、肺癌、食管癌、结直肠癌等多种肿瘤相关[2-5]，但与胰腺癌的关系尚未见报道。因此，本文研究HPV感染与胰腺癌的关系。

一、材料与方法

1．组织标本：收集2007年1月至2009年12月中国医科大学附属盛京医院肝胆胰切除的经病理证实的39例胰腺癌石蜡包埋标本。患者术前无明确的HPV相关疾病感染史，其中男22例，女17例，年龄39～73岁，平均57岁。以已证实存在HPV感染的临床宫颈拭子组织作为阳性对照。

2．MY/GP巢式PCR扩增HPV DNA：取石蜡组织切片，脱蜡至水后，室温下放置10 min，应用基因组DNA提取试剂盒(潮州凯普生物化学有限公司)提取组织DNA，按说明书操作。参考文献[6-7]设计针对HPV相对保守的L1 区的外引物MY09/11，序列5′-CGTCCMARRGGAWACTGATC-3′，5′-GCMCAGGGWCTATAAYAATGG-3′，扩增片段450 bp；内引物GP5+/GP6+，序列5′-TTTGTTACTGTGGTAGATACYAC-3′，5′-GAAAAATAAACTGTAAATCATATTC-3′，扩增片段140 bp。序列中的M=A/C, R=A/G, W=A/T, Y=C/T。以原癌基因c-kit第17号外显子为内参照，序列5′-TACAAGTTAAAATGAATTTAAATGGT-3′，5′-AAGTTGAAACTAAAAATCCTTTGC-3′，扩增片段228 bp。引物均由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。应用内参照引物行PCR扩增。PCR条件：95℃ 9 min，95℃ 20 s，55℃ 30 s，72℃ 30 s，40个循环，最后72℃ 5 min。参考文献[8-9]行巢式PCR扩增HPV DNA。第一次应用MY09/11引物扩增，PCR条件：96℃ 5 min，96℃ 45 s，50℃ 45 s，72℃ 60 s，30个循环，最后72℃ 10 min。再以扩增的DNA片段为模板，GP5+/GP6+为引物，行第二次扩增，PCR条件：94℃ 5 min，94℃ 30 s，40℃ 45 sec，72℃ 45 s，40个循环，最后72℃ 10 min。每批次PCR反应均包括阳性对照和阴性对照(蒸馏水)，扩增产物均行1.5%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像分析系统(Tanon GIS-2020)观察结果并摄片。

二、结果

1．人原癌基因的检测：39例胰腺癌组织均扩增出c-kit基因片段(图1)，证实全部组织标本DNA提取成功。

1：阳性对照，2～6：胰腺癌组织

2．HPV基因的检测：39例胰腺癌组织均未检测到HPV DNA(图2)。

1：阳性对照，2：阴性对照，3～5：胰腺癌组织

讨论随着分子生物学的进展，人们越来越发现人体组织细胞的程序性死亡或凋亡的时间、速度和数量均受到基因的严密控制[10]，而肿瘤病毒的DNA、蛋白质可能与某些调控细胞凋亡的基因DNA片段结合，干扰这些基因信息的传递、转录、复制，使其在错误的时间和(或)环节上调控细胞的生命周期，使细胞不能按正常程序死亡，而向恶性化方向发展，导致癌的发生[11]。

研究表明[12]，全世界5.5%的现患癌症患者与HPV感染有关。HPV不仅感染某些器官的鳞状上皮，亦可感染腺上皮[13-15]。在恶性肿瘤中，HPV常以单拷贝或多拷贝整合于宿主细胞基因组中，引起细胞特定基因功能的丧失或下调，成为HPV导致恶性肿瘤的主要机制[16]。

本实验检测39例胰腺癌组织的HPV DNA，结果均为阴性。本文同时应用的以MY09/11为外引物和GP5+/GP6+为内引物的巢式PCR扩增，可检测多种HPV型别及其他未鉴定的新型别[13]，操作简单、敏感性高、特异性强,结果可靠。故本结果提示人乳头瘤病毒感染可能与胰腺癌的发生发展并无关系。

但病毒DNA在整合过程中常丧失L1区而保留E6和E7区，本文应用主要针对L1区设计的PCR 引物，可能检测不到HPV DNA，也可能病毒含量低于PCR检测的最低值。可见，对病毒整合位点的研究可能更有助于明确HPV与胰腺癌发生之间的关系。

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2010-06-01)

(本文编辑：吕芳萍)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2011.01.023

110022 沈阳，中国医科大学附属盛京医院第二消化内科

陈少夫，Email:csf196211@yahoo.com.cn