GPA对CCl4肝损伤模型小鼠肝脾组织作用的研究

张霞 程富胜

摘要：为了研究大蒜多糖（ＧＰＡ）对机体组织的药理作用，以小白鼠为研究对象，试验分５组：正常对照组、模型对照组及3个治疗组，除正常对照组外，其他4组采用ＣＣｌ４灌胃的方法建立小鼠化学性肝损伤模型，3个治疗组分别用１００、２００、４００ ｍｇ／ｋｇ不同浓度大蒜多糖对小鼠进行治疗，给药７ ｄ后，摘取小鼠肝脏、脾脏，进行组织学观察，并与ＣＣｌ４模型组及正常对照组进行比较。结果在ＣＣｌ４模型组中，小鼠肝脏发生广泛的颗粒变性和水泡变性，中央静脉重度淤血等病变。经大蒜多糖治疗后，小鼠肝脏水泡变性消失，颗粒变性减少，中央静脉淤血消失；脾脏发生广泛的淋巴细胞增生。结果表明大蒜多糖对ＣＣｌ４致小鼠化学性肝损伤具有保护作用，并能改善机体的免疫功能。

关键词：大蒜多糖；ＣＣｌ４；小鼠；肝损伤

中图分类号：ＴＳ２０１．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）16－3355-03

The Effect of GPA on the Liver and Spleen of CCl4 Induced Liver Injury Mouse

ＺＨＡＮＧ Ｘｉａ１，ＣＨＥＮＧ Ｆｕ－ｓｈｅｎｇ２

（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｇａｎｓｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００７０，Ｃｈｉｎａ；

２． Ｌａｎｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ and Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ， the Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ / Key Laboratory of New Animal Drug Project of Gansu Province， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００５０，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： ５ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗere ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｒｌｉｃ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＧＰＡ） ｏｎ ｔｈｅ ｏｒｇaｎｉｓｍｓ． Ｅｘｃｅｐｔ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ， ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｔｈｒｅｅ ｔｒｅａｔing ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＣＣｌ４） ｂｙ ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｔｏ ｃｏｎｄstruct ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｍｉｃｅ ｍｏｄｅｌ． Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｔｒｅａｔing ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＧＰＡ ａｔ ｔｈｒｅｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ of 100、200、400 mg/kg． Ａｆｔｅｒ ｓｅｖｅｎ ｄａｙｓ， ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ， ｓｐｌｅｅｎ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｏｕｔ ｆｏｒ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ the model group and the ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｏｂｅｒｓｅｒｖｅｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ ｇｒａｎｕｌａｒ ａｎｄ ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｓｅｖｅｒｅ ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ ｉｎ ｃｅｎｔｒａｌ ｖｅｎｏｕｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｉｎ the ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ． Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ GPA， ｔｈｅ ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄ， ｇｒａｎｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ， ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ ｉｎ ｃｅｎｔｒａｌ ｖｅｎｏｕｓ ｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｉｎ ｓｐｌｅｅｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ GPA ｈａｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｏｆ ＣＣｌ４ ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｍｉｃｅ， ａｎｄｃｏｕｌｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｉｍａｌ＇ｓ ｂｏｄｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｇａｒｌｉｃ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＧＰＡ）； ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＣＣｌ４）； mouse； ｉｎｊｕｒｅｄ－ｌｉｖｅｒ

多糖是廣泛存在于动植物及微生物体内的天然大分子物质，近十年已陆续发现多种动植物多糖和真菌多糖，对化学性、实验性等肝损伤有保护与治疗作用，能减弱肝病理损伤［１］。现代医学、营养学、预防医学的研究表明大蒜有保护肝脏、降血脂、预防动脉硬化、防治冠心病、防治脑血栓、消炎杀菌、抗肿瘤、提高机体免疫力和延缓衰老等作用［２，３］。大蒜多糖是从大蒜中提取的有效成分。近年来的研究表明，大蒜多糖（GPA）与化学性肝炎的损害和机体免疫应答有关。有学者给小鼠口服GPA未测出ＬＤ５０，表明GPA安全无毒［４］。

利用ＣＣｌ４可以诱发小鼠化学性肝损伤模型［５］，四氯化碳作为经典的亲肝毒物，主要经呼吸道和消化道进入体内，人和动物均可导致肝损伤。目前国内外关于ＣＣｌ４对肝细胞损伤的机理包括：脂质过氧化学说，共价结合学说和细胞内钙代谢紊乱学说［６］。目前国内外多采用ＣＣｌ４这一经典化学物建立肝损伤模型［７，８］。本研究采用ＣＣｌ４肝损伤模型，从形态学上探讨GPA对小鼠ＣＣｌ４肝损伤的保护作用。

１材料与方法

１．１材料

试验动物：昆明系小鼠，雄性，健康，１８～２０ ｇ（购于兰州生物制品研究所）；试验药品：１% ＣＣｌ４橄榄油溶液、ＨＥ常规染色试剂；试验仪器：生物显微照相系统，切片机以及其他常规仪器。

１．２方法

４０只小鼠随机分为５组，每组８只，即正常对照组、ＣＣｌ４模型组、多糖低剂量组、多糖中剂量组和多糖高剂量组。称重，除正常对照组生理盐水灌胃外，其他各组按０．１ ｍＬ／１０ ｇ体重的剂量灌胃１%ＣＣｌ４的橄榄油溶液。５ ｈ后3个多糖治疗组按１００、２００、４００ ｍｇ／ｋｇ体重进行GPA灌胃，正常对照组与模型组用生理盐水灌胃，持续灌服７ ｄ。处死前１０ ｈ除正常组外，其他各组再次灌服１%ＣＣｌ４橄榄油溶液。颈椎脱臼处死，摘取肝脏、脾脏，甲醛固定，制作常规石蜡切片，用ＨＥ染色，光镜观察，显微照相。

２结果

２．１ＧＰＡ对ＣＣｌ４模型小鼠肝组织形态学的影响

镜下观察可见，正常对照组小鼠肝小叶结构完整，肝细胞索排列整齐，无肝细胞变形、坏死等现象（见图１）。ＣＣｌ４模型组小鼠的肝小叶轮廓不清，肝细胞索排列紊乱，中央静脉重度淤血，肝细胞广泛发生颗粒变性和水泡变性（见图２）。多糖低剂量组小鼠的肝小叶仍不清晰，肝细胞索排列较乱，中央静脉轻度瘀血，肝细胞有轻度的颗粒变性和水泡变性（见图３）。多糖中剂量组小鼠的肝小叶基本清晰，肝细胞索排列相对整齐，少数中央静脉轻度瘀血，肝细胞的颗粒变性，水泡变性减轻（见图４）。多糖高剂量组小鼠的肝小叶清晰，肝细胞索排列整齐，部分肝细胞中央静脉周围只有轻度颗粒变性（见图５）。

２．２ＧＰＡ对ＣＣｌ４模型小鼠脾脏形态学影响

正常对照组小鼠脾脏的脾小体以及周围的红髓、脾小梁非常清晰（见图６）。ＣＣｌ４模型组小鼠的脾脏，脾小体、红髓等基本正常，无明显损伤性变化（见图７）。多糖低剂量组小鼠的脾脏，脾小体轻度肿大，淋巴细胞增多（见图８）。多糖中剂量组小鼠的脾脏，脾小体增大，生发中心扩大，零散性淋巴细胞增多，红髓弥漫性增生（见图９）。多糖高剂量组小鼠脾脏的淋巴组织增生，脾小体明显增大，淋巴细胞增生（见图１０）。

３讨论

四氯化碳肝损伤为目前国际常用的肝炎模型之一，其中毒机制主要是四氯化碳进入机体后产生自由基引起膜脂质过氧化，使膜结构和功能的完整性破坏，从而引起细胞中毒死亡［９］。已有研究指出［１０］，四氯化碳在肝脏经细胞色素Ｐ４５０激活为自由基

·ＣＣｌ３攻击肝细胞膜上的磷脂分子，继而与膜脂质和蛋白质大分子共价结合，使蛋白质代谢障碍，引起膜结构和功能完整性的破坏。另外，·ＣＣｌ３可抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的活性，使Ｃａ２＋内流增加。两种途径最终导致肝细胞浆中可溶性溶酶渗出入血，引起肝细胞形态的改变。

本试验中ＣＣｌ４模型组小鼠的肝小叶轮廓不清，肝细胞索排列紊乱，中央静脉重度淤血，肝细胞水肿，呈现不同程度的颗粒变性和水泡变性，进一步证实了ＣＣｌ４的毒性作用；经大蒜多糖治疗后，小鼠肝脏病变明显减轻，随着浓度增大肝损伤减轻：肝细胞索排列逐渐清晰，中央静脉瘀血消失，基本无水泡变性，只有轻度颗粒变性。表明大蒜多糖对ＣＣｌ４所致的化学性肝损伤有一定的治疗作用，在本试验的3个浓度中，高浓度效果最好。

脾脏作为机体的免疫器官，反映机体抵抗病变继而产生免疫效应的程度。本试验中ＣＣｌ４模型组小鼠的脾脏也基本正常，无明显损伤性变化；经大蒜多糖治疗的小鼠，脾小体肿大，淋巴细胞增生，生发中心扩大，且随大蒜多糖浓度的增大作用效果也逐渐增强。表明大蒜多糖明显增强了脾脏的免疫作用。表明大蒜多糖对ＣＣｌ４所致的化学性肝损伤小鼠有免疫应答作用。

参考文献：

［１］ 王文玲，黄雪松，曾莉莎．大蒜多糖的研究综述［Ｊ］．广州食品工业科技，２００４，２０（４）：１４４－１４６．

［２］ 陈能煜，伍睿．大蒜研究进展［Ｊ］．天然产物研究与开发，２０００，（２）：６７－７４．

［３］ 张敏．对化学性肝损伤有辅助性保护作用的保健食品研究进展［Ｊ］．四川食品与发酵，２００５，４１（１２）：４１－４４.

［４］ 郑敏，潘世斌，姜友定，等． 大蒜多糖对肝损伤小鼠血清和肝组织ＡＬＴ、ＡＳＴ的影响及其急性毒性实验［Ｊ］． 咸宁学院学报（医学版），２００３，１７（２）：８５－８７．

［５］ 腾树保，王胜春，胡咏武，等． 五灵胶囊对小鼠免疫性肝损伤的作用［Ｊ］． 第四軍医大学学报，２０００，２１（７）：１６１－１６３．

［６］ ＰＬＡＡ Ｇ Ｌ． Ｃｈｏｒｉｎａｔｅｄ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ： ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔ ５０ ｙｅａｒｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ，２０００， ４０４２－４０６５．

［７］ ＷＡＳＳＥＲ Ｓ， ＴＡＮ Ｃ Ｅ． Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ［Ｊ］． Ａｎｎ Ａｃａｄ Ｍｅｄ Ｓｉｎ－ｇａｐｏｒｅ，１９９９，２８（１）：１０９－１１１．

［８］ ＳＯＮＩ Ｍ Ｇ， ＭＥＨＥＮＤＡＬＥ Ｈ Ｍ． Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｐａｉｒ ｉｎ ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｍｏｎｇ ｈｐａｔｏｔｏｘｉｃ ｏｒｇａｎｉｃｓ［Ｊ］． Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ， １９９８，１０６（Ｓｕｐｐｌ）：６３０７－６３１７．

［９］ ＳＡＮＭＵＧＡＰＮＹＡ Ｅ，ＶＥＮＫＡＴＡＲＡＭＡＮ Ｓ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｈｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ ｐｏｔａｔｏｒｕｍ ｌｉｎｎ ［Ｊ］． Ｓｅｅｄｓ ｏｎ ＣＣｌ４－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｕｔｅ ｈｅｐａｔｉｃ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒａｔｓ．Ｊ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ ，２００６，１０５：１５４－１６０．

［１０］ 沛毅． 当归对实验性肝损伤小鼠的抗自由基损伤作用［Ｊ］ ．中西医结合肝病杂志，１９９６，６（４）：２１－２２．