家蚕核型多角体病毒基因与抗病育种

孙波 周洪英 吴宏丽

摘要：家蚕（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ Ｌ．）对家蚕核型多角体病毒（Ｂ． ｍｏｒｉ Ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＢｍＮＰＶ） 抗性为不完全显性，在常染色体上由主效基因控制，在性染色体上有微效基因的协同作用。抗ＢｍＮＰＶ相关基因的研究，为生产上进行防治提供了理论基础。ＲＮＡ干涉（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，ＲＮＡｉ）技术被广泛应用于基因功能研究，为ＢｍＮＰＶ抗性品种培育提供了新的方法。随着分子标记技术的不断完善和应用，在家蚕抗性品种辅助选育方面也取得了一定的成果，并且有获得家蚕抗性新品种的报道。

关键词：家蚕；家蚕核型多角体病毒；抗性；基因；育种

中图分类号：Ｓ８８４．５＋１；Ｑ７８；Ｓ８８２．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）16－3249-04

Gene of Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus and Disease Resistance Breeding

ＳＵＮ Ｂｏ，ＺＨＯＵ Ｈｏｎｇ－ｙｉｎｇ，ＷＵ Ｈｏｎｇ－ｌｉ

（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｃｒｏｐｓ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｗｕｈａｎ ４３００６４， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： The resistance of Bombyx mori to B. mori Nuclear polyhedrosis virus（BmNPV） was incomplete dominance，and ｗａｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ｍａｊｏｒ ｇｅｎｅ ｏｎ ａｕｔｏｓｏｍｅ ａｎｄ ｍｉｎｏｒ ｇｅｎｅ ｉｎ ｓｅｘ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ． Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｏｆ ＢｍＮＰＶ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ ｉｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ａ ｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ＢｍＮＰＶ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｖａｒｉｅｔｙ． Ａｓ ｔｈｅ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ， ｓｏｍｅ ａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ. ｍｏｒｉ Ｌ． ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｎｄ ｓｏｍｅ ｎｅｗ ＢｍＮＰＶ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｒｅｐｏｒｔｅｄ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ Ｌ．； ＢｍＮＰＶ； ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ； ｇｅｎｅ； ｂｒｅｅｄｉｎｇ

家蚕核型多角体病毒（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ Ｌ． Ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＢｍＮＰＶ）是昆虫病毒史上首先发现的病毒，属于杆状病毒科，包涵体亚科；它引起的家蚕核型多角体病毒病是养蚕业三大病毒病中危害最为严重的一种。该病在世界养蚕国家常呈暴发态势，传染性极强，难以控制，危害最为严重，常造成巨大的经济损失。蚕业界多年来一直在寻找抗病基因，以阐明抗性机理、培育抗性品种，目前在很多领域已取得了一定的进展。

１传统抗ＢｍＮＰＶ品种选育

家蚕遗传学试验表明，家蚕对ＢｍＮＰＶ的抗性，无论是经创伤感染或经口感染，不同的品种存在着较大的差异［１］。家蚕对ＢｍＮＰＶ抗性为不完全显性，在常染色体上由主效基因控制，在性染色体上有微效基因的协同作用存在［２］，但抗性主基因至今无法鉴定。

传统的抗ＢｍＮＰＶ品种选育，多通过添毒试验，获得具有该病毒抗性基因的品系，然后通过基因转育的方法获得抗性品种；或者通过转基因的方法获得抗性品种。在选育抗ＢｍＮＰＶ家蚕品种时，首先找到抗性很强的品种做亲本材料，再将抗性导入经济性状优良的家蚕品种中，同时必须实行多代连续经口接种ＢｍＮＰＶ以进行个体和蛾区（系统）选择；配制杂交组合时，中国系统品种、日本系统品种两方都应有强抗性的亲本，并且即使抗性品种（系统）大体稳定或育成，也还必须不断地进行ＢｍＮＰＶ接种以强化抗性的选择。作为生产用的抗性杂交组合，其母种一代有必要再进行ＢｍＮＰＶ接种的抗性选择，以保持其抗性。

朱勇等［３］以１０个家蚕原种和２个家蚕杂交品种为材料，采用机率分析法研究了不同家蚕品种对ＢｍＮＰＶ的抗性差异。结果表明，不同家蚕品种对ＢｍＮＰＶ的抗性差异达到了极显著水平。抗性主要受微效多基因控制，并具有偏父性遗传现象，而且日本系统品种的抗性比中国系统品种强；这与１９６３年易文仲的研究报道一致，钱荷英等的报道也证实了这一点［４］，并且杂交Ｆ１代对ＢｍＮＰＶ的抗性存在较强的杂种优势。刘震等［５］对６个家蚕品种中肠消化酶活性与家蚕对ＢｍＮＰＶ病毒抗性进行了比较与分析，结果表明，中肠消化酶活性越强的抗性越强，呈显著的正相关关系，可以把家蚕对ＢｍＮＰＶ抗性与中肠消化酶活性的关系应用到家蚕抗性品种的选育中，把测定家蚕中肠消化酶活性作为选育和鉴定抗ＢｍＮＰＶ病毒家蚕品种的一种辅助方法。

２抗ＢｍＮＰＶ相关基因研究進展

１９９９年美日科学家合作完成了ＢｍＮＰＶ（Ｔ３株）的全基因组测序，共鉴定了１３６个开放阅读框（ＯＲＦ），其中包括了许多ＢｍＮＰＶ繁殖的关键基因，如ＤＮＡ解旋酶（ＤＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ）、ＤＮＡ复制酶（ＤＮＡ ｐｏｌ）、衣壳蛋白（Pｏｌｙｈｅｄｒｉｎ）等［６］。ＤＮＡ解旋酶在病毒侵染家蚕的极早期表达，而病毒的早期表达基因更容易受到宿主因子的影响［７］。ＢｍＮＰＶ的ＤＮＡｈｅｌ基因与舞毒蛾核型多角体病毒（Ｌｙｍａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ Ｌ． Ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＬｄＮＰＶ）的ｈｒｆ－１基因和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（Ａｃｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ Ｍ． Ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）的ｐ１４７基因为同源基因，是病毒的宿主域因子。各种病毒重组试验证明，只要拥有了对应的宿主域因子，就可以在对应的宿主中繁殖，反之则不能繁殖［８，９］。杨金宏等［１０］根据ＧｅｎＢａｎｋ公布的ＢｍＮＰＶ（１３株）序列，设计引物对其ＤＮＡ解旋酶基因的核心结构域进行了ＰＣＲ扩增，结果成功克隆了该基因，并利用双酶切亚克隆构建了酵母双杂交诱饵载体ＰＧＢＫＴ７。试验证明重组诱饵载体不能自激活，可以作为诱饵进行蛋白结合试验，该研究为抗ＢｍＮＰＶ的家蚕品种鉴定提供了依据。

ＢｍＮＰＶ的基因库为Ｌ３３１８０，这对于家蚕核型多角体病毒的研究有很大的帮助。其中Ｐ１０基因启动子控制ＢｔｅｒｙＩＡ（ｂ）截短基因，在ＡｃＮＰＶ多角体基因上游ＥＣＯＲ Ｖ位点克隆构建有包膜（ＯＣＵ＋）的重组病毒Ｉ，可以将ＡｃＮＰＶ宿主域扩展至家蚕等。Ｐ１０基因是一个极晚期高表达的非必需结构基因，用它取代ＯＣＵ基因（多角体蛋白基因）构建转移载体，将使重组病毒的包涵体外壳完整保留，适于作为基因工程病毒杀灭剂，具有较好的应用前景。Ｐ１０基因与多角体形态发生及多角体膜的形成有关，可以为生产上进行家蚕核型多角体病毒病的防治提供理论基础。

３利用ＲＮＡｉ技术抗ＢｍＮＰＶ研究进展

１９９５年，Ｓｕｉ等［１１］在研究线虫ｐａｒｌ基因功能时，首次发现双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）能抑制特定基因的功能。１９９８年，Ｆｉｒｅ等［１２］将ｄｓＲＮＡ抑制特定基因表达的现象，正式命名为ＲＮＡ干涉（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，ＲＮＡｉ），随后在许多生物中都相继发现存在ＲＮＡｉ现象。ＲＮＡｉ技术被广泛应用于基因功能研究，成为近年来发展应用最迅速的分子生物学技术，为家蚕核型多角体病毒抗性品种的培育提供了新的方法。

２００４年，Ｉｓｏｂｅ等［１３］第一次报道了利用ＲＮＡｉ技术增强了转基因细胞及家蚕对ＢｍＮＰＶ的抗性。在以ＢｍＮＰＶ重要的晚期表达因子ｌｅｆ－１为靶基因的ＲＮＡｉ试验中，成功建立了表达ｌｅｆ－１双链ＲＮＡ的转基因ＢｍＮ细胞系，在转基因细胞及家蚕中均抑制了ＢｍＮＰＶ的增殖，但是并没有降低感染病毒家蚕的死亡率。徐颖等［１４］将体外转录的与ＤＮＡ解旋酶基因和ＤＮＡ聚合酶相对应的ｄｓＲＮＡ转染到了家蚕培养细胞的ＢｍＮ中，成功抑制了ＢｍＮＰＶ的复制。夏定国等［１５］以ＢｍＮＰＶ复制必需的极早期基因ｉｅ－１和细胞释放型病毒ＣＲＶ入侵关键基因ｇｐ６４为靶序列，分别人工设计并体外转录出ｄｓＲＮＡ Ｉ１（４３８ ｂｐ）和ｄｓＲＮＡ Ｇ1（３３７ ｂｐ），用家蚕培养细胞ＢｍＮ研究目标ｄｓＲＮＡ对ＢｍＮＰＶ复制、增殖的抑制效果。结果表明，ｄｓＲＮＡ Ｉ１能有效地抑制ＢｍＮＰＶ在ＢｍＮ细胞中的增殖，最大抑制效果使培养液中的病毒滴度（ＴＣＩＤ）比对照降低了104.30倍；ｄｓＲＮＡ Ｇ１能显著地抑制新形成的病毒粒子的细胞侵染能力，最高可使培养液中的病毒滴度降低１０３．１７倍，这为进一步通过转基因技术进行家蚕病毒病防治研究建立了技术基础。ｇｐ６４是细胞出芽型病毒的囊膜蛋白，对ＢｍＮＰＶ的细胞间传播起关键作用。如果抑制了ｇｐ６４的表达，理论上就可以抑制ＢｍＮＰＶ的繁殖。夏定国等［１６］在体外合成ｄｓＲＮＡ试验中，通过病毒滴度试验、实时定量ＲＴ－ＰＣＲ法研究了ｇｐ６４基因的不同区域、不同长度与ＲＮＡｉ效果的关系，结果表明，供试的６个ｄｓＲＮＡ的最大抑制效果相当（滴度ＴＣＩＤ５０的最大抑制差值为４．００左右），经ＲＮＡｉ不同时间点的ｇｐ６４ ｍＲＮＡ表达水平均明显出现了下调（Ｐ＜０．０１），其中４８ ｈ的ｇｐ６４ ｍＲＮＡ的表达量约为对照的１／３００。位于ｇｐ６４ ＯＲＦ的１３９０～１４９９位点（Ｇ３－３）是ＲＮＡｉ的较佳靶位点，为进一步构建与基因序列互补的ＲＮＡｉ质粒载体提供了依据。

黄科等［１７］将ＢｍＮＰＶ的ＤＮＡ聚合酶基因、蛋白激酶（ＰＫ１）基因以及ｂｒｏ－ｄ和ｏｒｆ１６２９基因的部分编码片段，分别以其反向重复的形式与家蚕Ａｃｔｉｎ３启动子连接，构建了基于ｐｉｇｇｙＢａｃ转座子载体的转基因表达载体，通过显微注射于家蚕卵中，获得了３６～１０７个Ｇ１蛾区，得到了２０～２３头转基因阳性家蚕。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及ＲＴ－ＰＣＲ分析表明，ＢｍＮＰＶ的４个反向重复片段都已经导入了家蚕基因组中，并且可以进行转录。攻毒试验结果表明，ＢｍＮＰＶ的ＤＮＡ聚合酶基因和ＰＫ１基因反向重复片段对病毒的增殖有抑制作用，从而使家蚕对ＢｍＮＰＶ具有一定的抗性。而ＢｍＮＰＶ的ｂｒｏ－ｄ和ｏｒｆ１６２９基因反向重复片段对病毒的增殖没有抑制作用。在培养细胞中，导入ＢｍＮＰＶ的ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、ＤＮＡ ｈｅｌｉｃａｓｅ以及ＩＥｌ、ｇｐ６４、ｌｅｆ－１等基因的ｄｓＲＮＡ，都使ＢｍＮＰＶ的复制得到显著的抑制。利用转基因家蚕持续稳定表达与ＢｍＮＰＶ的复制必需基因同源的ｄｓＲＮＡ，有可能增强家蚕对ＢｍＮＰＶ的抗性，进而选育出高抗性的品种。

ＲＮＡｉ技术是近几年兴起的一项更有效、更特异、更彻底的转录后基因沉默技术，利用ＲＮＡｉ技术，破坏并抑制与病毒的宿主细胞识别蛋白、基因组复制因子、病毒结构蛋白等相关基因ｍＲＮＡ的翻译，是目前真核生物病毒病分子技术治疗的一个最新策略。

４从蛋白质组水平上研究家蚕对ＢｍＮＰＶ的抗性

目前，家蚕抗ＢｍＮＰＶ的研究主要是在致病机理、传染途径、ＤＮＡ分子标记和转录水平等方面，家蚕蛋白质组水平研究还在刚起步阶段。蔡克亚等［１８］利用遗传学原理，通过杂交和回交的方法，建立了家蠶抗ＢｍＮＰＶ、感ＢｍＮＰＶ以及近等基因系模型，利用２－Ｄ电泳和ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ／ＴＯＦ ＭＳ质谱技术，从蛋白质组水平上研究家蚕对ＢｍＮＰＶ的抗性。结果获得了家蚕高抗ＮＢ、高感３０６、近等基因系ＢＣ８五龄起家蚕血淋巴液蛋白质差异表达谱，分别获得了１８０、１９０、１８７个蛋白点，其中８０％的蛋白点集中在等电点５～９范围之内。从３块凝胶上共获得明显差异蛋白点ｌ２个，由质谱鉴定出５种蛋白，其中氨基酰化酶（Ａｍｉｎｏａｃｙｌａｓｅ）仅出现在抗性品系ＮＢ、近等基因系图谱中，感性品系没有出现，初步推测是家蚕抗ＢｍＮＰＶ特有蛋白，为首次报道。针对特定病毒基因的转基因ＲＮＡｉ技术，可使家蚕获得对该病毒的抗性，因而有望成为今后家蚕抗病育种的新手段。

５分子标记辅助育种研究进展

遗传标记是基因组研究的重要内容，是构建物种遗传图谱的基础。根据家蚕对ＢｍＮＰＶ抗性遗传规律的特殊性，陈克平等［２］提出了常染色体上ＮＮ主基因和性染色体上Ｚ＋Ｚ＋修饰基因的控制假设，并得到试验的验证。利用近等基因系寻找抗性分子标记，其交配方式不同，可分别构建ＮＮ、Ｚ＋Ｚ＋、ＮＮＺ－Ｚ＋ ３种近等基因系，同时提出了Ｆ２群体寻找分子标记的交配方式。目前，已有多项分子标记技术用于家蚕基因组的研究，并构建了几种家蚕分子标记遗传图谱。刘晓勇等［１９］在含有抗核型多角体病毒病主效基因的家蚕品系ＮＢ和高感品系３０６及其近等基因系ＢＣ９中，采用５００个ＲＡＰＤ随机引物，分别在各个品系的ＤＮＡ混合物中进行扩增以筛选分子标记，获得了与家蚕抗ＢｍＮＰＶ病有关的３个分子标记，它们分别是ＯＰＦ－０７２０２３、ＯＰＪ－１３１３００、ＯＰＭ－１６１２００。其中ＯＰＦ－０７２０２３标记通过各回交代检测，证明获得的标记真实、可靠；又对该分子标记的片段进行克隆、测序；通过该片段的生物信息学分析，意外地在家蚕Ｚ染色体上发现了一个逆转位子的编码序列，值得进一步深入研究。

近年来，随着分子标记技术的不断完善，已经迅速地被应用于动植物新品种的选育过程中；在家蚕抗性品种辅助选育方面也取得了一定的成果，并且有获得抗性家蚕新品种的报道。姚勤等［２０］对家蚕抗核型多角体病毒病以不同的杂交方式，构建了３种近等基因系，用ＲＡＰＤ技术筛选出了抗病主基因连锁分子标记ＯＰＡ－１８７００和感病连锁分子标记ＯＰＹ－１１４００；同时在群体中验证了抗性分子标记的有效性［２１］，并利用我国家蚕种质资源中发现的高抗ＢｍＮＰＶ的品系ＮＢ和高感品系３０６，组配了近等基因系。采用ＲＡＰＤ技术获得分子标记，将标记转换成ＳＣＡＲ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｒｅｇｉｏｎ）标记，利用ＳＣＡＲ标记开展了家蚕抗性新品种的辅助育种选择，获得了家蚕抗ＢｍＮＰＶ新品种。曹锦如等［２２］利用分子标记技术向家蚕实用品种中导入核型多角体病毒病抗性基因，结果发现已报道的分子标记在不同品种间表现出差异，与抗性性状并非完全相关。添毒结合标记检测，筛选出抗性品种多化Ｎ和敏感性的实用品种春华，将其作为育种素材，又从特定品种多化Ｎ中获得了特异性连锁片段。通过组配近等基因系，结合添毒试验，在杂交组合ＢＣ３的Ｆ２代抗性个体中明显检测到了该标记，初步表明该分子标记具有一定的可靠性。

６展望

家蚕核型多角体病毒病危害严重，半个多世纪以来，人们对该病害的病原类型、侵染途径、预防方法、家蚕品种抗性、遗传规律，育种方法等诸多方面进行了研究。目前在生产上，以防为主、综合防治、培育对病原有较强抗性的家蚕新品种一直都是人们的努力方向。但是，由于家蚕对ＢｍＮＰＶ的抗性为不完全显性，既受常染色体上的主效基因控制，又受性染色体上的微效基因协同作用，加之环境因素的影响，使传统的杂交育种方法难以育出实用性强的家蚕品种。

近年来，现代生物技术飞速发展，为家蚕抗病育种提供了理论基础和新的技术途径，并且已经有利用分子标记技术培育出家蚕抗ＢｍＮＰＶ新品种的报道。但是，由于受家蚕的抗性遗传规律和品种选育的要求限制，在短时间内还难以得到稳定、优良的抗性品种。随着生物技术的发展，相信在家蚕抗性品种培育方面会有更大的进步。

参考文献：

［１］ 陈春平，林昌麒． 家蚕对核型多角体病的抗性及遗传规律的研究［Ｊ］． 蚕业科学，１９９６，２２（３）：１６０－１６４．

［２］ 陈克平，鲁成，向仲怀，等． 家蚕抗核型多角体病分子标记筛选的遗传基础［Ｊ］． 西南农业大学学报，２００１，２３（３）：１９６－１９９．

［３］ 朱勇，鲁成，陈萍，等． 家蚕对核型多角体病毒（ＮＰＶ）抗性的遗传学研究［Ｊ］． 西南农业大学学报，１９９８，２０（２）：１００－１０３．

［４］ 钱荷英，徐安英，林昌麒，等． 家蚕对核型多角体病毒病抗性及遗传规律的研究［Ｊ］． 河北农业大学学报，２００６，２９（４）：７７－７９．

［５］ 刘震，鲍先巡，尤征英，等． 家蚕对ＢｍＮＰＶ抗病性与中肠消化酶活性的关系［Ｊ］． 安徽农业大学学报，２００９，３６（３）：４８９－４９２．

［６］ ＧＯＭＩ Ｓ， ＭＡＪＩＭＡ Ｋ， ＭＡＥＤＡ Ｓ． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ Ｌ． ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９９，８０：１３２３－１３３７．

［７］ ＫＡＺＵＨＩＲＯ ＯＫＡＮＯＢ，ＴＯＲＵ ＳＨＩＭＡＤＡＣ，ＫＡＺＵＥＩ ＭＩＴＡＤ，ｅｔ ａｌ． Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ－ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｔａｇ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｉｎ ＢｍＮＰＶ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ＢｍＮ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００１，２８２（２）：３４８－３５６．

［８］ ＨＩＲＯＫＩ ＩＳＨＩＫＡＷＡ， ＴＡＫＡＳＨＩ ＯＧＡＳＡＷＡＲＡ， ＭＯＴＯＫＯ ＩＫＥＤＡ， ｅｔ ａｌ． Ａ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ Ｌ． ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏ ｖｉｒｕｓ ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ ｈｒｆ－１ ｇｅｎｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ ｉｎ ｎｏｎｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅ Ｌｙｍａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ ＩＰＬＢ－Ｌｄ６５２Ｙ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｓｅｃｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｓｅｒｉｃｏｌｏｇｙ，２００６，７５（１）：３１－３８．

［９］ ＣＨＥＮ Ｃ Ｊ，ＱＵＥＮＴＩＮ Ｍ Ｅ，ＢＲＥＮＮＡＮ Ｌ Ａ，ｅｔ ａｌ． Ｌｙｍａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｎ ｖｉｒｕｓ ｈｒｆ－１ ｅｘｐａｎｄｓ ｔｈｅ ｌａｒｖａｌ ｈｏｓｔ ｒａｎｇｅ ｏｆ ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｎｕｃｌｅｏ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｎ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９８，７２（３）：２５２６－２５３１．

［１０］ 杨金宏，王代钢，卢从德，等． ＢｍＮＰＶ ＤＮＡ解旋酶基因酵母双杂交诱饵载体的构建［Ｊ］． 山东农业大学学报（自然科学版），２０１０，４１（２）：１６１－１６３．

［１１］ ＳＵＩ Ｇ Ｃ，ＳＯＯＨＯＯ Ｃ，ＡＦＦＡＲ Ｅ Ｂ，ｅｔ ａｌ． Ａ ＤＮＡ ｖｅｃｔｏｒ－ｂａｓｅｄ ＲＮＡｉ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｔｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｅａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００２，９９（８）：５５１５－５５２０．

［１２］ ＦＩＲＥ Ａ， ＸＵ Ｓ Ｑ， ＭＯＮＴＧＯＭＥＲＹ Ｍ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｂｙ ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ ｉｎ Cａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｔ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ，１９９８，３９１：８０６－８１１．

［１３］ ＩＳＯＢＥ Ｒ， ＫＯＪＩＭＡ Ｋ， ＭＡＴＳＵＹＡＭＡ Ｔ， ｅｔ ａｌ． Ｕｓｅ ｏｆ ＲＮＡｉ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｔｏ ｃｏｎｆｅｒ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ＢｍＮＰＶ ｏｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｓｉｌｋｗｏｒｍｓ［Ｊ］． Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００４，１４９（１０）： １９３１－１９４０．

［１４］ 徐颖，朱成钢，金勇丰，等． ｄｓＲＮＡ对家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）复制的抑制作用［Ｊ］． 科学通报，２００４，４９（１１）：１０７３－ｌ０７８．

［１５］ 夏定国，张国政，王文兵，等． ｄｓＲＮＡ对家蚕核型多角体病毒复制增殖的抑制效果［Ｊ］． 蚕业科学，２００６，３２（２）：２０６－２１０．

［１６］ 夏定国，张国政，王文兵，等． ｇｐ６４基因相应ｄｓＲＮＡ对家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）增殖的抑制［Ｊ］． 中国农业科学，２００７， ４０（１２）：２８８２－２８８７．

［１７］ 黄科，李春峰，甘进锋， 等． 利用转基因ＲＮＡ干涉提高家蚕对ＢｍＮＰＶ的抗性初探［Ｊ］． 蚕业科学，２００９，３５（２）：３０８－３１３．

［１８］ 蔡克亚，陈克平，刘晓勇，等． 家蚕抗ＢｍＮＰＶ品系与感性品系血淋巴液蛋白质组的差异分析［Ｊ］． 生物工程学报，２００８，２４（２）：２８５－２９０．

［１９］ 刘晓勇，姚勤，陈克平． 利用ＲＡＰＤ技术筛选家蚕抗核型多角体病分子标记［Ｊ］． 江苏大学学报（自然科学版），２００４，２５（１）：１７－２０．

［２０］ 姚勤，劉晓勇，陈克平，等． 家蚕抗核型多角体病分子标记筛选［Ｊ］． 生命科学研究，２００２，６（４）：３２２－３２５．

［２１］ 姚勤，刘晓勇，唐旭东，等． 家蚕抗核型多角体病毒病分子标记辅助育种［Ｊ］． 分子植物育种，２００５，３（４）：５３７－５４２．

［２２］ 曹锦如，周文林，翁宏飚，等． 家蚕抗核型多角体病毒病分子标记辅助新品种选育研究［Ｊ］． 蚕桑通报，２００８，３９（３）：１９－２２．