液相色谱/串联质谱法检测猪肉中三种化学物质的残留试验

王秀颖 许永国 周大庆 王维霞 谢丽霞 （山东诸城绿安检测有限公司 262200）



液相色谱/串联质谱法检测猪肉中三种化学物质的残留试验

王秀颖 许永国 周大庆 王维霞 谢丽霞 （山东诸城绿安检测有限公司 262200）

本试验建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺残留的方法。样品中的药物残留采用0.2mol/L pH5.2的乙酸铵缓冲液提取，加入β－葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶进行酶解，提取液经混合型阳离子交换柱进行净化，液相色谱－串联质谱测定，内标法定量。克伦特罗0.05µg/kg；莱可多巴胺、沙丁胺醇0.2µg/kg。回收率均大于88%。

猪肉 克伦特罗 沙丁胺醇 莱克多巴胺 残留

河南省部分地区“瘦肉精”事件曝光后，引起国家各级部门高度重视，也使广大人民群众对食品安全的问题极为关注。“瘦肉精”是β-肾上腺素兴奋剂，是一种人体平喘药物。将它添加在饲料里可以提高饲料的利用率、加快动物生长速度、使猪的瘦肉率提高近10%，因此有“瘦肉精”之称，而造成人体中毒的主要是β-肾上腺素兴奋剂中的克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。本试验建立了高效液相色谱-串联质谱同时检测猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺残留的方法。本方法能快速、高灵敏、同步检测沙丁胺醇，莱克多巴胺与克伦特罗残留含量。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂 Aglient 1200/6430高效液相色谱串联三重四极杆质谱仪；菲罗门Luna-C18色谱柱(150× 2.00mm，3.0μm)；北京时代北利GTR16-2高速冷冻离心机；上海泉岛HFC-12氮吹仪；WatersMCX固相萃取柱；SUPELCO SPE固相萃取装置；梅特勒pH酸度计；MILLI-Q超纯水仪；SIGMAβ－葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶；乙腈、甲醇、正已烷、乙酸乙酯均为色谱纯。

1.2 仪器条件 液相色谱条件：流动相：乙腈—0.1%甲酸水，梯度洗脱；流速：0.3ml/min；柱温：40℃；进样量：10µl；质谱条件：电喷雾离子源；雾化气压力：45psi；干燥气温度：350℃；干燥气流速：11L/min；正离子扫描；多重反应监测(MRM)。

1.3 标准溶液的配制 分别称取适量克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准品甲醇溶解甲醇制成标准储备液(100µg/ml)；分别称取适量D9-克仑特罗、D3-沙丁胺醇、D3-莱克多巴胺用甲醇制成标准内标储备液(100µg/ml)；

1.4 样品的提取与净化 称取约10.0g试样，放入100ml离心管中，添加混合同位素内标物，加入乙酸铵缓冲液(0.2mol/L)20ml，均质1min，然后加入β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶50µl，充分振荡混匀，在恒温振荡水浴中37℃酶解16h。以10000r/min离心10min，收集上清液于另一50ml离心管中，加入10ml正己烷，充分混匀，然后以10000r/min离心10min，弃去正己烷层，用滤纸过滤下层溶液于另一50ml离心管中。依次用5ml甲醇、5ml水对MCX柱进行预处理，然后将提取液加载在MCX柱上，再依次用5ml水、5ml50%甲醇和5ml正己烷洗柱，弃去淋洗液；真空抽干5min，用6ml洗脱液(50%乙酸乙酯：45%甲醇：5%氨水)进行洗脱，收集洗脱液。洗脱液在45℃下氮气流吹干，加入1ml乙腈：0.1%甲酸水(1+9)溶液溶解残渣，过0.22µm滤膜，进行HPLC-MS/MS测定分析。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化 为使组分获得好的分离效果，及在分析样品时减少杂质的干扰，本试验进行了梯度优化选择。对比试验结果确定为流动相：A：乙腈、B：0.1%甲酸水。

表1 试验选择的梯度 (min, %)

分离效果如图1。

图1 全扫描总离子流色谱

2.2 质谱条件的优化 为得到响应高且稳定的信号，避免干扰和提高目标物的灵敏度，进行了质谱条优化。所选择的离子对与标准基本一致，发现莱克多巴胺定性离子对302.2/284.3样品基质干扰严重，试验对比定性离子对302.2/107.1效果较好。

表2 对比定性离子对效果

2.3 提取与净化的优化 参照行业标准及文献报道，对3种浓度的乙酸铵缓冲液提取液(0.02、0.2、2mol/L)和2种固相萃取柱(MCX及SCX)做了对比实验，结果表明回收率随提取液浓度升高而升高，但高浓度提取液较难通过固相萃取柱。选用0.2mol/LpH5.2的乙酸铵缓冲液提取，WatersMCX固相萃取柱萃取。净化效果好回收率高。

2.4 线性范围与检测限 0.2、0.5、1、2、5、10ng/ml的标准工作曲线线性关系良好，莱克多巴胺回归方程为y=1.7063×-0.0526，相关指数R2=0.9999；克仑特罗回归方程为y=1.8461×-0.0202，相关指数R2=0.9999；沙丁胺醇定回归方程为y=1.6901×-0.0572，相关指数R2= 0.9999；本试验的方法定量检出限均为：克伦特罗0.05µg /kg；莱克多巴胺、沙丁胺醇0.2µg/kg。

2.5 准确度和精密度 以猪肉做添加回收试验，样品中添加浓度为0.2µg/kg、0.5µg/kg、1µg/kg.每个浓度做了6次平行试验。

表3 猪肉中不同残留物的回收率 (%)

结论：本方法灵敏度高，重现性好，方法简单，可快速检测猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺的残留量。

[1]进出口动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法,液相色谱－质谱质谱法. SN/T 1924-2007

[2] 翟淑平, 周德刚, 孙志文等. 液相色谱/串联质谱法测定猪肉中莱克多巴胺残留[J] 中国兽药杂志, 2007, 41(12): 24-26.

[3] 吉彩霓, 岳振峰, 欧阳妍. 固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定猪肉中克伦特罗、沙丁胺醇的残留[J]. 中华预防医学杂志, 2006, 40(2): 123-125.

[4] 强致懿, 申屠芬琴, 沈建忠. 猪组织中莱克多巴胺的高效液相色谱法测定和残留消除规律的研究[C]. 中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第九次学术讨论会论文与摘要集, 2006 .

（2011–05–10）

S859.84

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1007-1733(2011) 08-0009-02