虎眼万年青多糖含量的研究

杨晓腾，李井涛，吴立军

(1.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110016；2.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

*吴立军，E-mailwulijun_111@hotmail.com

虎眼万年青多糖含量的研究

杨晓腾1,2，李井涛2，吴立军1*

(1.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110016；2.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

目的研究虎眼万年青多糖含量测定方法。方法采用比色法，用紫外分光光度计测定虎眼万年青多糖的含量。结果虎眼万年青多糖的线性范围是0.408 3～0.816 6mg，重复性含量为8.5 %,RSD=0.7 %(n=6)；平均回收率为97.4 %，RSD=1.1 %(n=6)；精密度RSD=0.1 %(n=6)；在45 min内样品吸光度较稳定，在24 h样品稳定。结论通过对虎眼万年青多糖含量的研究，确定了虎眼万年青多糖含量的测定方法。

虎眼万年青；多糖；紫外分光光度计

虎眼万年青OrnithogalumcaudatumAit为多年生草木植物，是吉林省道地药材。吉林省白山市的虎眼万年青由朝鲜传入，当地老百姓习称珍珠草，民间用其鲜汁液涂抹患处以治疗疗疮，内服可治疗无名肿毒、肝炎、肝硬化、肝癌等[1-2]，未见历代本草收载。本品全草入药，味甘、性微寒、归肝、脾经。清热解毒、消坚散结。用于治疗痈疸、疔疮、瘰疬、痄腮、无名肿毒、黄疸[1-2]。复方万年青胶囊中虎眼万年青作为君药，列于处方中；而抗肿瘤药物虎眼万年青注射液的开发项目也正在进行中。虎眼万年青中多糖类化合物主要是依赖于对免疫功能具有较强的调节作用，从而表现出一定的抗衰老、抗病毒和抗肿瘤作用[3-4]。多糖作为虎眼万年青中功效成分，对免疫功能有着较强的调节作用。因此，建立有效方法对虎眼万年青中多糖的含量进行测定是必要的。实验参考文献[5-8]采用比色法测定多糖。

1 仪器与试药

岛津UV-2550紫外分光光度计。试剂均为分析纯；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110833-200503)。2，3，5-二硝基水杨酸试液(甲液：称取6.9g结晶酚于15.2mL10%氢氧化钠的溶液中，用水稀释至69mL，并在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。乙液：称取255g酒石酸钾钠加至300mL氢氧化钠溶液中，再加880mL1%3,5-二硝基水杨酸溶液，混匀，既得。甲液与乙液混合，贮于棕色瓶中，7d后使用)。虎眼万年青样品共3批，产地均为长白县，经吉林省食品药品检验所孙玉滨主任药师鉴定。

2 方法

2.1对照品溶液的制备

精密称取于105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品适量，加水制成1mg·mL-1的溶液，即得。

2.2标准曲线的制备

分别精密量取对照品溶液0.4，0.5，0.6，0.7，0.8mL置25mL量瓶中，加水稀释至2.0mL，分别精密加入3，5-二硝基水杨酸试液1.5mL，混匀，在沸水浴中加热5min，立即冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀。另精密量取水2.0mL置25mL量瓶中，同法操作，作为对照品空白溶液。照紫外-可见分光光度法，在520nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=0.9140X×0.0468，r=0.9990，线性范围为0.4083～0.8166mg。

2.3供试品溶液的制备

取本品粉末(过三号筛)约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50mL，称定重量，浸泡过夜，回流提取3h，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液2mL置25mL量瓶中，共取2份，1份加3mol·L-1盐酸溶液10mL，置沸水浴中加热30min，取出，冷却，加酚酞指示液1滴，用饱和氢氧化钠溶液调至近红色，再滴加氢氧化钠溶液(1→20)使呈红色，加水稀释至25mL，摇匀。另1份不加3mol·L-1盐酸溶液，同法操作，作为样品空白溶液[6]。

2.4测定方法

精密量取供试品溶液及样品空白溶液各2mL置25mL量瓶中，精密加入3，5-二硝基水杨酸试液1.5mL，混匀，在沸水浴中加热5min，立即冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀。以样品空白溶液作为空白溶液，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg),计算，既得。

2.5精密度试验

取样品3.0002g精密称定，依法测定，重复6次，计算RSD=0.1%，结果表明仪器精密度较好。

2.6稳定性试验

2.6.1比色后样品稳定性 取精密度项下比色后溶液，分别在0，15，30，45，60，75min测定6次，结果表明比色后样品在45min吸光度较稳定。

2.6.2样品稳定性 取精密度项下供试品溶液，分别在0，5，10，15，20，24h进行比色，测定6次，计算RSD=0.1%，结果表明样品在24h内稳定。

2.7重复性试验

取供试品6份，依法测定，计算平均含量为8.5%，RSD=0.7%，结果表明重复性良好。

2.8加样回收率试验

取本品粉末(过三号筛)约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50mL，称定重量，浸泡过夜，回流提取3h，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液2mL置25mL量瓶中，共取2份，1份加3mol·L-1盐酸溶液10mL，加D-无水葡萄糖5mg，精密称定，置沸水浴中加热30min，取出，冷却，加酚酞指示液1滴，用饱和氢氧化钠溶液调至近红色，再滴加氢氧化钠溶液(1→20)使呈红色，加水稀释至25mL，摇匀。另1份不加3mol·L-1盐酸溶液，不加对照品，同法操作，作为样品空白溶液。结果见表1。

表1 万年青多糖加样回收率试验

2.9样品含量测定

依法测定3批样品，结果见表2。

表2 3批虎眼万年青中多糖含量测定

3 讨论

3.1取样量的考察

取本品粉末(过三号筛)1，3，5g，依法测定，结果表明取样量为3g时，样品的测定值和校正值与标准曲线匹配良好。

3.2提取条件的考察

取样品5份，取样量为3g，各加50mL的水，分别超声处理1h，浸泡过夜超声处理1h，浸泡过夜回流1h，浸泡过夜回流3h，浸泡过夜回流4h，依法测定。结果表明浸泡过夜是必要的，回流提取要优于超声提取，回流最佳时间为3h。

[1] 中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴[M].第5册.北京：科学出版社，1987：464.

[2] 宋文耆.虎眼万年青形态组织特征鉴定[J].中药材，1995,18(5)：240-241.

[3] 石磊，李娟，刘志强，等.虎眼万年青多糖增强非特异性免疫和体液免疫的作用[J].吉林大学学报(医学版)，2002,28(3)：232-234.

[4] 刘大有，王开宇，张惠，等.虎眼万年青化学成分的研究(Ⅰ)[J].中草药，1998,29(7)：443.

[5] 黄瑞松.中草药多糖含量测定方法概述[J].中国药师,2005,8(1)：68.

[6] 王丽娜，陈水钫，张方，等.3,5-二硝基水杨酸法测定多糖含量的研究进展[J].吉林医药学院学报,2009,30(4)：232-234.

[7] 刘宏源,杨金燕,黄松,等.3，5-二硝基水杨酸法测定铁皮石斛中多糖的含量[J].亚太传统医药,2010,6(8)：14-16.

[8] 宋俊英.茶薪菇总糖、还原糖和多糖的测定[J].中草药,2006,37(9)：1421-1422.

PolysaccharideAssayStudyofOrnithogalumcaudatumAit

YANG Xiao-teng1,2，LI Jing-tao2，WU Li-jun1

(1.ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China;2.JilinInstituteforFood&DrugControl,Changchun130033,China)

Objective: Study the methods to determine the Polysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit.MethodsBy colorimetry, using UV spectrophotometric to determine the polysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit.ResultsPolysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit linear range is0.4083～0.8166mg; repeatability8.5%,RSD was0.7% (n=6); recovery was97.4%, RSD% was1.1% (n=6); precision RSD% was0.1% (n=6); in45minutes, the sample absorbance was stable, in24hours, the sample was stable.ConclusionThrough the study of polysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit, we established the method for determination of polysaccharide assay ofOrnithogalumcaudatumAit.

OrnithogalumcaudatumAit; Polysaccharide; UV spectrophotometric

2010-11-09)