黄芪中黄芪多糖含量的测定△

赵强强，韩丽*，潘媛，王淼，杨明,2*

(1.成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室,四川 成都 611137；2.江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004)

国家科技重大新药创制专项(2009ZX09103-307)

*韩丽，E-mailhanliyx@163.com；*杨明，E-mailyangming16@126.com

黄芪中黄芪多糖含量的测定△

赵强强1，韩丽1*，潘媛1，王淼1，杨明1,2*

(1.成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室,四川 成都611137；2.江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌330004)

目的建立黄芪中黄芪多糖的含量测定方法。方法采用比色法测定黄芪多糖的含量。结果测定波长为489nm，葡萄糖在2.0～14.0μg·mL-1线性关系良好，平均加样回收率为99.84%,RSD=3.71%(n=6)。结论该方法简便、准确、重复性好，可用于黄芪中黄芪多糖的含量测定。

黄芪多糖APS；苯酚-硫酸法；含量测定

黄芪为常用中药，是豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，具有补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌的功能[1]。黄芪中含有皂苷、黄酮、多糖、氨基酸及微量元素等多种成分[2]，其中黄芪多糖(Astragalus polysaccharides，APS)是黄芪主要活性成分之一。现代研究表明，APS具有促进免疫调节[3]、抗肿瘤[4]、抗病毒、抗辐射、抗衰老等多种生物活性。本实验采用比色法对黄芪中多糖进行含量测定。

1 材料与方法

1.1仪器

UV-1700紫外分光光度计(SHIMADZUCORPORATION)，FA1104电子分析天平(HANGPING)。

1.2试药

河北黄芪(四川利民中药饮片有限责任公司)，经成都中医药大学鉴定教研室裴瑾副教授鉴定为膜荚黄芪；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110833-200503,供含量测定用)；苯酚、浓硫酸等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1对照品溶液制备

精密称取105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖100mg，加水溶解并定溶于100mL量瓶中，摇匀即得。

2.2供试品溶液制备

精密称取黄芪粗粉5.0g，加碱水50mL回流提取2次，每次1h，放冷加溶剂补足重量，过滤，精密吸取滤液0.2mL，蒸馏水定容至100mL量瓶中，摇匀即得。

2.3测定方法

精密吸取对照品、供试品溶液各2mL于具塞试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0mL，摇匀，迅速加入5.0mL浓硫酸，振摇2min，置沸水浴中加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，随行以蒸馏水为空白对照，在489nm处测定吸光度。

2.4线性范围考察[5-6]

精密吸取葡萄糖对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 mL置于25 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。精密吸取上述各溶液2 mL于具塞试管中，按照2.3测定方法分别加入5 %苯酚溶液1.0 mL,在489 nm处测定吸光度。以吸光度对浓度进行线性回归，得回归方程A=69.679C+0.025 3,r=0.996 2。结果表明，葡萄糖在2.0～14.0 μg·mL-1线性关系良好。

2.5精密度试验

精密吸取葡萄糖对照品溶液6份，依法显色后测定吸光度，计算RSD=1.62%，说明仪器精密度良好。

2.6显色后稳定性试验

取黄芪多糖样品溶液2mL，依法显色后放置，分别在0,15,30,45,60min测定吸光度，计算RSD=2.26%，表明样品溶液显色后1h内稳定。

2.7重复性试验

对同一批黄芪多糖样品进行6次独立测定吸光度，结果RSD=3.58%。

2.8加样回收率试验

取6份已知含量的黄芪粗粉2.5g，精密称定，精密加入适量葡萄糖对照品，按正文拟定的方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液2mL于具塞试管中，按2.3测定方法分别加入5 %苯酚溶液1.0mL,在489nm处测定吸光度，计算结果见表1。

表1 黄芪多糖加样回收率试验

2.9样品测定

取3批黄芪样品粗粉5.0g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，精密吸取样品溶液2mL于具塞试管中，按2.3方法分别加入5 %苯酚溶液1.0mL，在489nm处测定吸光度，计算结果见表2。

表2 黄芪中黄芪多糖含量测定 /mg·g-1

3 讨论

3.1提取溶剂的选择

参照文献[7]可知碱水提取多糖收率比水提取要高。这主要是由于碱溶液对植物细胞起到破壁作用[8]，但由于本实验将黄芪样品全部粉碎用粗粉进行实验，碱水提取黄芪多糖含量215.89mg·g-1，水提取黄芪多糖含量197.54mg·g-1，故差别不是很明显。

3.2测定波长的选择

分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各2mL于具塞试管中，加5%苯酚试液1mL，混匀，迅速加入5mL浓硫酸，振摇2min，置沸水浴加热15min，取出置冷水中冷却，随行以蒸馏水为空白，于UV-1700上从400～600nm进行扫描，发现对照品和样品溶液在489nm均有最大吸收，故波长确定为489nm。

3.3溶剂用量考察

精密称取5.0g黄芪粗粉3份，分别加入碱水40,50,60mL回流提取1h，放冷加溶剂补足重量，过滤，精密吸取滤液0.2mL，蒸馏水定容至100mL量瓶中，精密吸取上述溶液各2mL于具塞试管中。按2.3测定方法分别加入5 %苯酚溶液1.0mL,在489nm处测定吸光度，结果表明黄芪药材采用50mL溶剂提取黄芪多糖含量较高。

3.4提取时间考察

精密称取5.0g黄芪粗粉3份，加入碱水50mL，分别回流提取60，90，120min，放冷加溶剂补足重量，过滤，精密吸取滤液0.2mL，蒸馏水定容至100mL量瓶中，精密吸取上述溶液各2mL于具塞试管中。按2.3测定方法分别加入5 %苯酚溶液1.0mL，在489nm处测定吸光度，结果表明黄芪药材采用60min提取黄芪多糖含量较高。

3.5提取次数考察

精密称取5.0g黄芪粗粉3份，加入碱水50mL回流提取，分别提取1、2、3次，每次1h，放冷加溶剂补足重量，过滤，精密吸取滤液0.2mL，蒸馏水定容至100mL量瓶中，精密吸取上述溶液2mL于具塞试管中。按2.3测定方法分别加入5 %苯酚溶液1.0mL,在489nm处测定吸光度，结果表明提取2次黄芪多糖含量较高。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010：283-284.

[2] 肖培根,杨世林,赵永华,等.黄芪[M].北京：中国中医药出版社,2001：123-124.

[3] 翁玲,刘彦,刘学英,等.黄芪多糖粉针剂对小鼠免疫功能的影响[J].免疫学杂志, 2003,19(3)：243-244.

[4] 李宏全,段县平,马海利,等.黄芪多糖提高鸡抗氧化作用对免疫功能的影响[J].山西农业大学学报,2002,22(1)：78-81.

[5] 张宇,赵玉梅,佟丽华,等.黄芪地下和地上部分有效成分比较[J].中草药,1997,28(11)：651-653.

[6] 朱立文,郁瑞昌.黄芪多糖含量测定方法的探讨与比较[J].中成药研究,1987,(6)：11-12.

[7] 李红民,黄仁泉,王亚洲.提高黄芪多糖提取收率的工艺研究[J].西北大学学报(自然科学版), 2000,30(6)：509-510.

[8] 向东,赖凤英,梁平.碱法提取南瓜多糖的研究[J].食品工业科技,2004,25(11)：120-122.

DeterminationofAstragalusPolysaccharidesinAstragalus

ZHAO Qiang-qiang1, HAN Li1, PAN Yuan1, WANG Miao1, YANG Ming1,2

(1.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,MinistryofEducationKeyLaboratoryofStandardizationofChineseHerbalMedicines,Chengdu611137,China; 2.KeyLabforModernPreparationofTCM,MinistryofEducationofChina;JiangxiCollegeofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,China)

Objective: To establish a method for determining astragalus polysaccharides in Astragalus.MethodsDetermined the content of astragalus polysaccharides with colorimetry.ResultsThe wavelength of determination is 489 nm, The linear relationship of glucose was the range of 2.0～14.0 μg·mL-1.The average recovery was 99.84 % and RSD was 3.71 % (n=6).ConclusionThe method is convenient, accurate，good reproducibility and suitable for the quality control of astragalus polysaccharides in Astragalus.

Astragalus polysaccharidesAPS; Phenol-sulfuricacid method; Determination

2011-03-31)