HPLC法测定不同产地芍药中丹皮酚的含量

湘潭职业技术学院 李俊雅 李 君

河南羚锐制药股份有限公司 袁德先

HPLC法测定不同产地芍药中丹皮酚的含量

湘潭职业技术学院 李俊雅 李 君

河南羚锐制药股份有限公司 袁德先

芍药药材来源于毛茛科植物芍药（Paeonia lacilfora Pall）的干燥根，收载于《中国药典》2010年版1部。中医临床用于治疗头痛眩晕，肋痛、腹痛，四肢挛痛，血虚萎黄，月经不调，自汗、盗汗。现代研究证明丹皮酚是芍药药材主要活性成分之一。本文，笔者以丹皮酚含量变化为依据，用高效液相法测定不同产地芍药中丹皮酚的含量。

一、仪器与样品

仪器为岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-20A型紫外检测器，CTO-10A S vp型柱温箱，CBM-102型工作站。样品为丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号0708-9704），芍药样品于2010年11月—2011年1月分别采于湖北十堰、安徽亳州、四川雅安、河南南阳、湖南怀化等地。甲醇、异丙醇、乙腈为色谱纯，所用其他试剂均为分析纯。

二、方法与结果

1.色谱条件与系统适用性试验。色谱柱SHMADZU shim-pack-vp-ODS 150mm×4.6mm（column size）serial NO 8042464，柱温：室温。流动相：甲醇-水（60∶40）。流速：1.0m l·min-1。检测波长：274nm，理论塔板数按丹皮酚峰计算应不低于5 000。在此条件下，丹皮酚与相邻成分达到基线分离，与其他相邻色谱峰分离度大于1.5，符合分离要求。（图1，图2）

2.溶液的制备。

（1）对照品溶液制备。取丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1.0mL含0.02mg（实配为0.032mg/mL）的溶液，即得丹皮酚对照品溶液。

（2）样品溶液制备。取芍药药材研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇，密塞，超声处理（功率250W，频率33kHz）45min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.线性关系考察。分别精密吸取对照品溶液（0.032 0mg/ mL）5.0uL，7.0uL，10.0uL，12.0uL，15.0uL依次进入色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标（Y），含量为横坐标（X）得回归方程为：Y=7×106X+8384.5，r=0.9999，表明丹皮酚在0.16～0.48μg范围内具有良好的线性关系。

4.精密度实验。精密吸取同一丹皮酚对照溶液（0.032 0mg/ mL）10μL，按上述色谱条件下，连续进样6次，以峰面积计算RSD值，得对照品溶液的RSD为0.55%，表明精密度良好。

5.稳定性实验。取样品制成供试品溶液，精密量取10μL，分别在0，1，2，4，8，12h进样，记录色谱峰面积，计算RSD值，测得样品的RSD值为0.97%，表明样品的稳定性良好。

6.重复性实验。同一批样品精密称取5份，分别按样品测定方法测定，进行HPLC分析，计算RSD值，测得供试品RSD值为1.24%，表明样品的重现性良好。

7.加样回收率实验。精密称取芍药干燥根粗粉5份，加入一定量的丹皮酚对照品，制备样品液，进行HPLC分析，计算加样回收率，测得供试品RSD值为1.35%，表明样品的加样回收率良好。

8.样品测定。以HPLC法分别测定采收于湖北十堰、安徽亳州、四川雅安、河南南阳、湖南怀化等地芍药中丹皮酚的含量。结果见表1。

表 1 不同产地丹皮酚含量测定结果

三、讨论

1.经紫外线扫描，丹皮酚在274nm波长处有最大吸收，在此波长处，丹皮酚吸收灵敏，基线平稳，且阴性对照无干扰，故本实验选定274nm为测定波长。

2.本实验曾选用乙腈-水-冰醋酸（33∶65∶2）、甲醇-醋酸-水（60∶2∶38）、甲醇-水（80∶20）等作流动相，发现分离效果差，丹皮酚峰变宽。经实验探索，反复调整甲醇-水的比例后，发现采用甲醇一水（70∶30）为流动相，丹皮酚出峰时间约为4.5min，与相邻成分达到基线分离，出峰时间、峰形、柱效均较为满意，且阴性对照无干扰。