HPLC测定氧氟沙星栓的含量

王熙平 唐新(通讯作者) 钟文

(1、广西桂玉医药有限责任公司 广西玉林 537000; 2、广西康华药业有限责任公司 南宁 530003)

氧氟沙星栓(Ofloxacin Suppositories)为喹诺酮类抗菌药,对细菌性阴道病具有良好的疗效,临床上用于细菌性阴道炎[1～3]。氧氟沙星栓的含量测定在新药转正标准[4]中采用的是紫外分光光度法,但专属性差,不能排除杂质的干扰,本文改用高效液相色谱法进行测定,可提高专属性和结果的准确性。

图1 对照品(A)、样品(B)、阴性对照品(C)色谱图Fig.1 HPLCchromatograms of reference substance(A),sample(B)and negative sample without Ofloxacin nitrate(C)

1 仪器与试药

威玛龙LC-9000D一体化高效液相色谱仪,南宁市威玛龙色谱科技有限公司,配有LC-9000D色谱工作站。Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,5μm,4.6 mm×250mm。

氧氟沙星对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号：130454-200403),乙腈、三乙胺为色谱纯,水为高纯水,其它试剂均为分析纯。氧氟沙星栓及缺氧氟沙星的阴性对照样品为广西康华药业有限责任公司自制样品。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

以十八烷基硅烷化键和硅胶为填料;以0.5mol/L枸橼酸溶液(三乙胺调节pH值至4.0)-乙腈(85∶15)为流动相;检测波长295nm;流速为1.0mL/min;柱温为室温。

2.2 测定方法

精密称取氧氟沙星对照品适量,用0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释成约含氧氟沙星100 g/mL的溶液,作为对照品溶液;另取本品10粒,切细混匀,精密称取适量,加入少量0.1mol/L盐酸溶液温热搅拌使溶解,再加0.1mol/L盐酸溶液稀释成约含氧氟沙星100 g/mL的溶液,滤过,续滤液作为供试品溶液。取2种溶液各10μL,用外标法以主峰面积定量。

2.3 色谱效果

以0.1mol/L盐酸溶液为溶剂,制备对照品溶液、样品溶液及不含主药的空白样品溶液,在上述色谱条件下,取10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,辅料在此处无吸收峰出现,不干扰主药的含量测定。色谱图见图1。

2.4 线性关系

精密称取氧氟沙星对照品50.04mg,置100mL量瓶中,再加0.1mol/L盐酸溶液稀释置刻度,摇匀,备用。分别精密吸取以上对照品溶液1、3、5、10、15、20mL,分别置25mL容量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,进样测定。以对照品含量为纵坐标,峰面积积分值为横坐标绘制标准曲线,则回归方程为：Y＝+1.56E-8*X-1-3.10E-03,r＝0.999861,表明氧氟沙星在20.02～400.32μg/mL范围内呈良好的线性关系。

表1 含量测定结果(相对标示量%,n=2)

2.5 精密度实验

取对照品溶液重复进样5次,每次10μL,测得氧氟沙星的峰面积的RSD为0.54%。

2.6 重复性实验

对同一批供试品(批号060414),按正文拟订的方法平行测定6份,结果氧氟沙星的平均值为98.94%(RSD=0.45%,n=6),结果表明,本法的重复性较好。

2.7 稳定性实验

取同一供试品溶液(批号060414)在室温下立即测定,放置4、8、12、16、20、24h重新测定,结果峰面积测得值分别为7139963、7189910、7066691、7119773、7149118、6890728、6987503,平均值为7077669.43,RSD为1.38%,峰面积基本一致,表明样品溶液在24h内稳定。

2.8 回收率实验

取空白基质约0.08g(80mg),共9份,精密称定,置100mL量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液适量,另分别精密称取氧氟沙星对照品8、8、8、10、10、10、12、12、12mg,分别加入以上量瓶中,水浴中温热并时时振摇使基质及氧氟沙星溶解,放冷,加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,制成3个不同浓度的供试品溶液((约相当于供试品溶液浓度的80%、100%、120%)各3份;分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μL注入液相色谱仪,记录峰面积。按外标法计算回收率分别为99.80%、99.51%、100.035、99.33%、99.565、99.18%、99.03%、99.135、98.40%,平均回收率为99.33%,RSD为0.45%。

2.9 样品测定

精密称取氧氟沙星对照品适量,用0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释成约含氧氟沙星100 g/mL的溶液,作为对照品溶液;另取本品10粒,切细混匀,精密称取适量,加入少量0.1mol/L盐酸溶液温热搅拌使溶解,再加0.1mol/L盐酸溶液稀释成约含氧氟沙星100 g/mL的溶液,滤过,续滤液作为供试品溶液。取2种溶液各10μL,用外标法以主峰面积定量。另按文献[4]法测定含量现行方法所测含量偏高,而高效液相色谱法测定结果则较为准确,2种测定方法的偏差均在合格范围内,可作为本品的含测方法,见表1。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

氧氟沙星能溶于酸性溶液,故采用0.1mol/L盐酸溶解,但需充分振摇。

3.2 波长的选择

在200～400nm波长范围进行扫描,结果显示,氧氟沙星对照品溶液和供试品溶液均在295nm波长处有最大吸收,故本法选295nm为紫外检测波长。

3.3 小结

本文建立的高效液相色谱法与原标准比较,结果较为准确,且简便、快速、专属性强、可靠。

[1] 张瑜,王玉启.氧氟沙星栓剂的研制及临床应用[J].中国基层医药,2001,8(4)：360.

[2] 马建新.氧氟沙星栓剂的制备及临床应用[J].中国现代应用药学杂志,2003,20(4)：333～335.

[3] 杜金芳,张静.氧氟沙星栓剂治疗淋球菌性阴道炎120例[J].滨州医学院学报,2002,25(5)：406.

[4] 国家食品药品监督管理局.新药转正标准WS1-(X-027)-2002Z[S].28～167.