微血管计数和侵入在肾细胞癌中的表达及意义

张慕淳，张赟，王金辉，王永刚，高吉，马天武，温建平，孔祥波

（吉林大学中日联谊医院泌尿外科，长春 130033）

肾细胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是一种泌尿外科常见的恶性肿瘤，占成人恶性肿瘤的3%，男女比例为2∶1。RCC以肾小管为中心旋转生长，且组织内新生血管丰富，血管间多形成动静脉瘘［1］。尽管肿瘤的大小、分级、核的非典型性等因素都与患者预后相关，但是目前RCC的生物学行为还难以预测。本研究旨在研究RCC中微血管的发生和侵入与肿瘤分期及发生复发转移的关系，并评价肿瘤的恶性程度及患者预后情况，为术后的靶向治疗或其他辅助治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 组织标本

临床资料RCC组织标本88例。临床病理分期T111例，T252例，T3a18例，T3b7例；术后发生转移17例；患者年龄38～82岁。标本切片厚4 μm，用二甲苯和乙醇去掉石蜡，水化并在柠檬酸缓冲液中孵化使抗原恢复活性，在微波中干燥，备免疫组化染色用。

1.2 主要试剂

鼠抗人CD34单克隆抗体和兔抗人CD34单克隆抗体、Ⅷ因子相关抗原（丹麦DAKO公司生产）。

1.3 方法

染色过程使用DAKO公司生产的检测试剂盒。为了对血管的发生进行定量分析，首先在低倍镜下（×100）观察，分别标记肿瘤微血管数量最丰富的区域，然后随机选择3个区域，在高倍镜下（×400）计数微血管数量，并计算血管的平均数。为了观察微血管的入侵，在高倍镜下检查肿瘤的周边，对明确入侵的血管计数。当一组肿瘤细胞被由Ⅷ因子相关抗原或CD34明确染色的内皮细胞包围时，认为存在血管入侵［2～4］，以评估微血管的发生与侵入与临床病理分期之间的关系。入组病例均随访4年，分为无复发转移组和复发转移组。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0统计软件，采用χ2检验比较各组间发生复发转移的比率，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

4年随访期间有17例患者发生肿瘤复发或者转移（复发转移组），71例患者无症状存活（无复发转移组）。根据病理分期，T1患者11例，其中无症状生存10例（90.9%），1例发生转移；T2患者52例，其中无症状生存45例（86.5%），7例发生转移；T3a患者18例，其中无症状生存12例（66.7%），6例发生转移；T3b患者7例，其中无症状生存4例（57.0%），3例发生转移。T1期与T2期患者比较，发生转移的比例的差异无统计学意义，而T3a及T3b期患者分别与T2期患者比较，发生转移的比例的差异有统计学意义（P<0.05），证实RCC分期和分级越高，发生转移的比例也越高，分期与RCC患者的预后密切相关。肿瘤的分期和分级与预后之间的关系见表1。

表1 肿瘤分期与分级与预后之间的关系T a b.1 T h e r e l a t i o n b e t w e e n n e o p l a s m s t a g i n g，g r a d i n g a n d p r o g n o s i s I t e m P a t i e n t s［n（%）］ W i t h o u t M e t a s t a s i s［n（%）］ M e t a s t a s i s［n（%）］S t a g i n g T 1 1 1（1 2.5） 1 0（9 0.9） 1（9.1）T 2 5 2（5 9.1） 4 5（8 6.5） 7（1 3.5）T 3a 1 8（2 0.4） 1 2（6 6.7） 6（3 3.3）1）T 3b 7（8.0） 4（5 7.0） 3（4 3.9）1）G r a d i n g G 1 1 8（2 0.4） 1 8（1 0 0.0） 0（0）G 2 4 9（5 5.7） 4 0（8 1.6） 9（1 8.4）G 3 1 7（1 9.3） 1 2（7 0.5） 5（2 9.5）G 4 4（4.6） 1（2 5.0） 3（7 5.0）1）P<0.0 5 v s T 2.

用Ⅷ因子相关抗原染色时，43例标本发生了微血管侵入，其中30例属于无复发转移者的标本（占无复发转移组的42.3%），13例属于发生肿瘤复发转移的标本（占复发转移组的76.5%），2组比较差异有统计学意义（P<0.01）。对RCC组织中微血管进行计数，在无复发转移组和复发转移组患者中平均微血管数量分别52.3和96.6，2组比较差异有统计学意义（P<0.01）。用CD34标记染色时，在71例无复发转移的患者样本中13例（18.3%）发生微血管侵入，而17例（47.1%）有复发转移的患者样本中8例存在微血管侵入，2组比较差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

RCC是一种无法预测其生物学行为的肿瘤。新生微血管是肿瘤生长、侵袭和转移的基础。有研究认为［5～7］实体肿瘤细胞的生长期可分为无血管的侵袭前期和血管化的侵袭生长期。肿瘤血源性转移的动力来自于肿瘤细胞侵入微血管。由于新血管生成在肿瘤浸润、转移中的关键作用，所以客观、准确地反映微血管新生程度尤为重要。在人类肿瘤组织中，血管发生的重要性近年来已陆续有文章报道。许多研究表明，用免疫染色的微血管计数可以评估肿瘤转移及肿瘤再发生的危险性和预后生存率［6～9］。但RCC的研究结果却不一致。Yoshino［10］发现，肿瘤微血管计数是早期RCC中唯一有显著意义的预后因子。而Maclenman［11］的研究却未证实微血管计数与RCC患者临床和病理分期分级有任何相关性，认为微血管计数对于RCC临床预后没有预测价值。因此，本研究中我们采用2种免疫组化染色方法评估微血管发生和侵入对预后的影响。我们发现，在微血管形成的基础上，对于是否有转移的发生CD34染色无判别意义；但用CD34标记的微血管形成的计数要高于Ⅷ因子标记的，有研究［2］证实CD34的特异性比Ⅷ因子低，更适合染色非内皮细胞。用CD34染色时微血管计数要高于实际血管数，掩盖了2组患者之间的区别。当用Ⅷ因子染色RCC组织时，发生复发转移与无复发转移者的标本中血管计数则有显著的统计学差异。

本实验证实，用2种染色方法对RCC标本进行微血管侵入研究，在无症状生存者标本及有复发转移发生者的标本中均有显著的统计学差异，我们认为血管侵入能很好的预示RCC术后发生复发或转移的高风险，对预后判断有较高价值。对RCC患者手术切除标本进行微血管侵入和微血管计数的研究，可提示具有肿瘤转移高风险的患者需要进一步随访观察或进行靶向治疗、辅助治疗以抑制RCC复发或转移。

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