长春地区准献血人员人巨细胞病毒检测

关 峰,王 宏

(长春市中心血站,吉林 长春 130033）

人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV）是普遍存在于自然界的DNA病毒,初次感染可通过体液接触、输血和器官移植传播。它是一个重要的条件致病因子,在免疫功能正常的健康人群中常引起轻微或无症状感染,而对于免疫功能低下或缺陷的患者,原发感染或病毒潜伏感染后,可引起严重的甚至是致死性的疾病。在器官移植、骨髓移植、免疫缺陷患者以及免疫抑制剂治疗的患者中,HCMV感染是高发病率与致死率的重要原因〔[1-2]。胎儿感染可引起新生儿黄疸、胆道畸形等。近年来的研究表明,人类巨细胞病毒与胃肠道疾病、动脉粥样硬化有一定的关系[3-4]。HCMV感染途径除密切接触、母婴传播和器官移植等外,输血也是HCMV感染很重要的途径。为了解长春地区准献血人群人类巨细胞病毒(HCMV）的感染现状,为临床安全输血提供实验依据采用实时荧光定量PCR检测技术对3 989名经体格检查、血液检验合格的18-45周岁的健康公民(准献血者）的血液样本进行HCMV-DNA测定,现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 对象

2008年1月-2009年12月期间,在长春市中心血站进行体检的准献血人员3989例,其中男2420例,女1569例;年龄为18-45周岁。

1.2 方法

1.2.1 仪器 美国ABI StepOne荧光定量PCR仪。

1.2.2 试剂 DNA提取试剂为美国Invitrogen DNA Isolation试剂盒;PCR扩增试剂为中山大学达安基因股份有限公司生产的HMCV-DNA荧光定量检测试剂盒。

1.2.3 DNA提取 留取受试者静脉全血5 ml,使用DNA提取试剂盒按照说明书流程操作,从全血中提取基因组DNA。

1.2.4 HMCV-DNA定量检测 采用实时荧光定量PCR检测技术,严格按试剂说明书操作。PCR扩增:37℃5 min,94℃1 min,然后95 ℃5 s、60 ℃30 s,40个循环,60℃采集荧光信号。结果判定,以样本DNA含量≥1×102拷贝/μ l为阳性结果。

1.3 统计学处理采用卡方检验。

2 结果

2.1 准献血者血HCMV-DNA检出率在3989例准献血者血液样本中检测出HCMV-DNA阳性135例,阳性率为3.38%。

2.2 献血者血HCMV-DNA阳性者年龄分布 长春地区135例HCMV-DNA阳性者各年龄段分布见表1。经卡方检验各年龄段HCMV-DNA阳性率存在明显差异,χ2=33.37,υ=(4-1）*(2-1）=3,大于χ20.005,3=12.84,P＜0.005。

表1 长春地区准献血者HCMV-DNA阳性年龄分布

2.3 准献血者血HCMV-DNA阳性者性别分布长春地区135例HCMV-DNA阳性者性别分布见表2。经卡方检验HCMV-DNA阳性率无性别差异,χ2=0.488 8,υ=1,小于 χ20.05,1=3.84,所以P＞0.05。

表2 长春地区准献血者HCMV-DNA阳性性别分布

2.4 准献血员血HCMV-DNA阳性者职业分布农民HCMV-DNA阳性率较高,在HCMV-DNA阳性者中构成最大,经卡方检验存在明显差异,(χ2=27.15,P＜0.05）。见表3。

表2 不同职业准献血员血HCMV-DNA阳性率及HCMV-DNA阳性职业构成

3 讨论

输血是特定疾病治疗的重要环节,在特定情况下,对抢救患者生命起着不可替代的重要作用。自1900年奥地利维也纳大学的Landsteiner发现了人类红细胞抗原,输血已经成为临床治疗的重要组成部分,但是100多年来也出现过因输血传染疾病的事情。因此血液制品的安全性非常重要。

巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV）在自然界普遍存在,人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV）在人群中感染非常普遍。在孕妇原发或复发HCMV感染可引起围产期感染或新生儿宫内感染,导致胎儿畸形、智力低下和发育迟缓等,严重者可引起全身感染综合征。我国是HCMV感染的高发地区,有报道孕妇血清抗HCMV-IgG阳性率高达94.6%[5],重症HCMV感染病死率高达 30%。HCMV初次感染可通过体液接触、输血和器官移植、母婴垂直传播。HCMV感染后在正常人一般无临床表现,绝大多数为隐性感染,但免疫系统缺陷患者,如:器官移植者、癌症患者、新生儿尤其是早产儿、低出生体重儿等均是高危人群。HCMV一旦侵入人体,将以潜伏感染的状态长期或终身存在于体内,对于一些免疫功能不正常的特殊人群,通过输血传播的CMV(transfusion transmission of CMV,TTCMV）可激活潜伏状态的HCMV形成复发性感染,导致严重的临床结局,甚至死亡。

HCMV感染的发生与地区、环境、居住条件、经济状况、性别、年龄等有关[6]。我国人群感染率＞80%[7]。在我国,HCMV不作为常规检测项目,随着癌症和器官移植患者的增多,基于我国HCMV流行状况,对输血传播HCMV引起感染应给予高度重视,特别是针对高危人群。本文对3989例准献血员进行HCMV-DNA检测阳性率为3.38%;各年龄段存在显著差异,18-23岁年龄段明显高于其它年龄段;无性别差异;农民感染率较高。准献血员中存在HCMV感染,应严格掌握输血适应症,对于高危人群输血时,应对血液进行HCMV-DNA检测,避免发生TTCMV。

实验室主要检测HCMV特异性IgM和IgG抗体,且可区分近期和既往感染。但静脉用丙种球蛋白和非筛选的血液成分的应用,使被检测者被动获得IgG,干扰了检测结果。因而HCMV的自身蛋白(抗原）和DNA是更特异、更敏感的早期诊断指标。目前HCMV感染的标准仍是病毒培养。血液中的白细胞特别是单核细胞是HCMV的载体,白细胞去除越早越好,最大限度地去除血液或血液成分中的白细胞,可大大降低输血引起的HCMV传播。

[1]Gaytant MA,Steegers EA,Semmolrot BA,et al.Cogenital cytomegalovirus infection:review of the epidemiology and outcome[J].Obstet Gynecol surv,2002,57:245.

[2]Boeckh MW,Leisenring SR,Riddell RA,et al.Late cytomegalovirus disease and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant recipients:im portance of viral load and T cell im munity[J].Blood,2003,101:407.

[3]胡雪影,黎锐平,王明丽.人巨细胞病毒感染与胃肠道疾病的相关性研究进展[J].国际消化病杂志,2007,1(27）:47.

[4]张美英,高玉林,何俊瑛.人巨细胞病毒感染与动脉粥样硬化[J].国外医学脑血管疾病分册,2005,11(13）:870.

[5]金 奇,主编.医学分子病毒学[M].北京:科学出版社,2001:781.[6]沈晓明,王卫平,主编.儿科学[M].北京:人民卫生出版社,2008:127.

[7]陈俊青,刘霆.巨细胞感染检测方法的现状[J].中国输血杂志,2005,18(5）:428.