Survivin、Ki-67核抗原在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达意义

田 琦,吕胜军

(1.吉林省肿瘤医院 放疗科,吉林 长春 130012;2.吉林省肝胆病医院 电诊科,吉林 长春 130062）

Survivin是目前发现的最强细胞凋亡抑制因子,其主要的生物学功能是抑制凋亡,参与细胞周期的调控以及参与血管的生成[1-3]。Ki-67是一种非组蛋白核抗原,参与细胞有丝分裂,检测Ki-67表达,反映肿瘤细胞的增殖状态。本研究采用免疫组化S-P法,在蛋白水平检测Survivin、Ki-67的表达,旨在探讨二者与宫颈癌发生、发展的相关性。

1 材料与方法

1.1 材料来源

选择2009年5月-2010年8月吉林省肿瘤医院病理科存档的手术切除宫颈鳞癌26例,患者年龄28-71岁,平均年龄46岁,术前未接受过其它治疗,另外收集活检或手术切除的宫颈上皮内瘤变(CIN）标本78例,其中CINⅠ28例,CINⅡ23例,CINⅢ27例,患者年龄23-75岁,平均年龄41岁,因子宫急性病变行子宫切除手术的正常宫颈12例作为对照。

1.2 主要试剂

Survivin兔抗人多克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司,Ki-67为ZM-0166单抗,工作液,由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。

1.3 方法

所有标本经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋后连续切片,每例标本行HE染色及S-P免疫组化染色,光镜下观察。免疫组化步骤按照S-P试剂盒说明书进行,一抗浓度为1∶100,由福州迈新技术有限公司及北京中杉金桥技术有限公司提供的阳性对照片作阳性对照,以PBS代替一抗作为阴性对照。

Survivin阳性表达判定标准:Survivin阳性表达定位于细胞浆,偶见于细胞核,细胞浆或细胞核呈现淡黄色、棕黄色或棕褐色颗粒为阳性,随机观察5个高倍镜下视野,阳性细胞≤5%为0分,6-25%为1分,26-50%为2分,51-75%为3分,＞75%为4分,阳性强度黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分,两项积分相乘,0分为阴性(-）,1-4分为弱阳性(+）,5-8分为中度阳性(++）,9-12分为强阳性(+++）。

Ki-67阳性表达判定标准:Ki-67阳性表达于细胞核,呈现棕黄色颗粒,或细胞核、细胞浆同时呈现棕黄色,于40倍光镜下计数100个细胞,每例标本计数1 000个细胞,Ki-67指数=阳性细胞数总和/1 000×100%。

1.4 统计学方法

采用卡方检验、t检验及相关分析。

2 结果

2.1 宫颈癌、各期别CIN以及正常宫颈组织中Survivin的表达情况

Survivin在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变组织中有着丰富的表达,阳性表达定位于细胞浆,偶见于细胞核,在正常宫颈组织中不表达。Survivin表达阳性程度:宫颈癌高于CIN(χ2=6.42,P＜0.05）,CIN高于正常宫颈组织(χ2=12.52,P＜0.05）,各期别CIN中Survivin的表达随CIN级别的升高而提高,CINⅢ高于CINⅡ(χ2=4.52,P＜0.05）,CINⅡ高于CINⅠ(χ2=4.26,P＜0.05）,正常宫颈组织与CINⅠ间及CINⅢ与宫颈癌间差异无统计学意义(P＞0.05）。

表1 宫颈癌、各期别CIN以及正常宫颈组织中Survivin的表达情况

2.2 宫颈癌、各期别CIN以及正常宫颈组织中Ki-67指数

Ki-67阳性表达于细胞核,呈现棕黄色颗粒,在宫颈癌及CIN中有丰富的表达,在正常宫颈组织中呈弱阳性表达。Ki-67指数:宫颈癌高于CIN(t=6.13,P＜0.05）,CIN高于正常宫颈组织(t=5.82,P＜0.05）,CINⅢ高于CINⅡ(t=6.42,P＜0.05）,CINⅡ高于CINⅠ(t=2.35,P＜0.05）,宫颈癌、各期别CIN的Ki-67指数较正常宫颈明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05）。

表2 宫颈癌、各期别CIN以及正常

2.3 宫颈癌及各期别CIN中Survivin的表达强度与Ki-67指数间呈正相关(P1＜0.05,r1=0.92;P2＜0.05,r2=0.96）。

3 讨论

宫颈癌的发生、发展是一个逐步演变、进展的复杂而连续的过程,与多种癌基因和抑癌基因的表达、调控及细胞凋亡密切相关,宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia CIN）是宫颈癌的癌前病变,发展为宫颈癌是一连续而漫长的过程,大约需要10年左右的时间,寻找并发现宫颈癌发生、发展过程中相关的敏感指标,对阻断宫颈癌癌前病变的发展,减少宫颈癌的发生,帮助临床工作中早期诊断、早期治疗,判断其转归,都有着重要的指导意义。

生存素(Survivin）是至今为止所发现的作用最强的凋亡抑制因子,Survivim基因定位于人体17号染色体及促进血管生成等方面的作用,具有抑制凋亡、调节细胞分裂的双重功能,在胚胎时期、胎儿发育过程中以及未分化成熟的组织中表达,在正常成人组织中基本不表达,当细胞发生恶性转变时呈现再次表达,Survivin在多数肿瘤组织中有着较高表达[4]。Survivin的生物学功能为抑制凋亡、参与细胞周期调控以及参与血管生成的作用。其表达有着细胞周期的依赖性,G1期基本不表达,S期弱表达,G2/M期呈强烈高表达,Survivin的过度表达,导致细胞加快向S期转换,抑制G1期静止,帮助肿瘤细胞逃离细胞周期的检测点,实现异常增殖[5]。有助于细胞逃避细胞周期G2/M基因的检测点,通过发生有丝分裂,实现的异常增殖和分化,加一方面,通过减少血管内皮的细胞凋亡,促进肿瘤血管的形成[5]。

本研究中发现,Survivin在正常宫颈组织中不表达,在宫颈癌的癌前病变CIN中,随着CIN级别的增加,表达逐渐增强,在宫颈癌中高表达,说明Survivin在正常宫颈至癌前病变CIN,直至最终发展为宫颈癌的过程中,呈现一个渐进表达的过程,与肿瘤细胞的生长失控有着密切的关系,这在其它相关研究中也得到证实[6]。

Ki-67是一种反映细胞增殖的核抗原基因,是细胞增殖活性的指标,定位于人第10号染色体,维持细胞增殖活性起着重要的作用,Ki-67抗原在G1、S、G2/M期均有合成,反映细胞的增殖活性,对预测癌前病变向恶性病变转化过程有着重要的参考价值,对恶性肿瘤的早期诊断、早期治疗有着指导意义。

本研究Ki-67的表达,在结果显示,正常宫颈组织、CIN和宫颈癌中的阳性表达有着显著差异,表明宫颈癌的发生、发展与细胞增殖有着密切的关系。本研究结果还显示,宫颈癌及CIN中Survivin的阳性表达强度与Ki-67指数间呈现正相关,提示Survivin一方面抑制细胞的凋亡,另一方面促进细胞的恶性增殖,通过抑制细胞凋亡及促进细胞增殖的双重作用,促进宫颈癌的发生、发展。Fukada[7]等认为 celecoxib(环氧化物酶-2抑制剂）具有抑制Survivin活性的作用,从而抑制Survivin蛋白和mRNA的表达,使Survivin表达下调,可能成为宫颈癌靶向治疗的新思路[8]。

[1]Siripong P,Hahnvajanawong C,Yahuafai J,et al.Induction of apoptosis by rhinacanthone isolated from Rhinacanthus nasutus roots in human cervical carcinoma cells[J].Bio Pharm Bull,2009,32(7）:1251.

[2]顾桂芳,张美云.宫颈癌组织中Survivin基因表达的临床意义[J].南京医科大学学报:自然科学版,2008,28(2）:232.

[3]Duffy MJ,Donovan N,Brennan DJ,et al.Survivin:a promising tumor biomarker[J].Cancer Lett,2007,249(1）:49.

[4]夏云金.凋亡抑制因子Survivin的生物学功能及其在肿瘤与正常组织中表达的意义[J].重庆医学,2005,2(34）:289.

[5]Shinjyo T,Kurosawa H,Miyagi J,et al.Ras-mediated upregulation of Survivin expression in cytokine-dependent murine pro-Blym-phocytic cell[J].Tohoku Journal of Experimental Medicine,2008,216(1）:25.

[6]Ai Z,Yin L,Zhou X,et al.Inhibition of Survivin reduces cell proliferation and induces apoptosis inhuman endometrial cancer[J].Cancer,2006,107(4）:746.

[7]Fukada K,Takahashi-Yanaga F,Sakoguchi-Okada N,et al.Celecoxib induces apoptosis by inhibiting the expression of Survivin in HeLa cell[J].Biochem Biophys Res Commun,2007,15(1）:1166.

[8]Lu S,Zhang B,Wang Z.Expression of Survivin,cyclinD1,P21(WAF1）,caspase-3 in cervical cancer and its relation with prognosis[J].Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2005,25:78.