中药制剂清肺饮颗粒中绿原酸的含量测定

杨志华 陈毅华 洪美华

清肺饮颗粒是本医院的自制中药制剂，该处方由黄芩、银花、连翘、紫花地丁、桔梗、枇杷叶等药物组成，具有清热泻火、凉血解毒、消痰止咳的功效。主要用于实热火毒型急性咽喉炎，多见口腔溃烂、口舌生疮;也用于肺、胃热盛型的痤疮，脂溢性皮炎等皮肤病的治疗。本制剂在保持中医用药理论的前提下，结合现代研究成果将其制成疗效可靠、质量稳定、携带服用方便的口服液。该制剂中成分复杂，绿原酸为主要成分之一，为控制制剂的内在质量，根据其所含化学成分及性质，查阅相关文献［1～5］，本文采用薄层扫描法测定制剂中绿原酸的含量，为制剂的质量保证奠定了基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 CS-9301PC型双波长薄层色谱扫描仪(带FDU-3电脑显示及DR-13数据处理机，日本岛津);高效硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂，20101015);定量毛细管(美国Drummond Scientific Co.);薄层板自动涂布器(重庆贝尔徳);BP211 d电子分析天平(Sartorius-德国)。

1.2 材料 清肺饮颗粒及所用药材均由本医院制剂室提供，绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供;所用试剂均为AR级。

2 方法与结果

2.1 薄层层析与扫描条件的选择 硅胶G层析板，于105℃活化约1 h，放入干燥器中备用;展开剂：醋酸丁酯-甲酸-水(14∶5∶5)的上层溶液;λs=325 nm，λR=370 nm。狭缝为1.2 mm×1.2 mm;SX=3，灵敏度2;双波长反射锯齿扫描。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品2.5 mg，加甲醇使溶解，定容至5 ml摇匀，制成对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 量取本口服溶液10 ml，加于D101大孔吸附树脂柱上，用50 ml水洗脱，弃取水洗液，再用20%乙醇30 ml，收集洗脱液，将20%乙醇液蒸干，残渣加甲醇适量溶解并过滤，滤液加甲醇定容至5 ml，制成供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例，取缺金银花的其他各味药材适量，按制备工艺和供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.5 干扰性试验 吸取供试品溶液、阴性对照溶液各2 μl，对照品溶液0.5 μl，分别点于同一硅胶G层析板上，照上述色谱条件扫描。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同吸收峰，阴性无干扰(结果见图1)。

图1

2.6 线性关系 精密吸取对照品溶液0.5、1、2、3、4 μl，分别点于同一薄层板上，展开，定位，按拟定条件进行测定。以点样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得回归方程：Y=21073.65X-7401.95，r=0.9982。结果表明绿原酸点样量在0.24 μg～2.06 μg范围内呈现良好的线性关系。

2.7 精密度试验 精密吸取同一样品(批号20110309)溶液各0.5 μl，点于同一硅胶G薄层板上共5个点，同法展开后测定，RSD为3.19%(n=5)。

2.8 稳定性试验 取供试品溶液按上述条件点样，展开，定位，每隔30 min扫描测定1次。结果表明，绿原酸斑点在2 h内稳定，RSD为1.22%。

2.9 重复性试验 取批号20110309的样品6份，分别按含量测定方法测定，平均含量为1.691 mg/ml，RSD为2.52%，表明本方法重现性良好。

2.10 加样回收率试验 采用加样回收法，精密吸取已知含量的清肺饮颗粒样品5份，分别加入一定量的绿原酸对照品，按上述方法制备样品溶液。吸取1 μl点样，按上述色谱条件测定绿原酸的含量，结果表明，加样回收率为101.09%，RSD=1.69%。

2.11 样品含量测定 分别精密吸取不同批号的清肺饮颗粒各10 ml按供试品溶液制法制备，精密吸取供试品溶液1 μl、对照品溶液0.5 μl与4 μl分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，依法展开测定，共测定样品3次，结果见表1。

表1 样品含量测定

3 讨论

3.1 本文章采用薄层扫描法对金银花中绿原酸的含量进行测定，在选择薄层层析条件时进行比较，醋酸丁酯∶甲酸∶水(14∶5∶5)的上层溶液，正丁醇∶冰醋酸∶水(4∶1∶2)和氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸(4∶4∶2)。经实验选用醋酸丁酯∶甲酸∶水(14∶5∶5)的上层溶液为展开剂能达到较好分离效果，斑点集中。

3.2 绿原酸含量测定试验中，采用通过大孔树脂排除干扰时，还应注意选用洗脱液乙醇的比例，当分别用水、10%以下浓度的乙醇液洗脱时，除去杂质，不会造成绿原酸损失。选用20%及以上乙醇液经检验含有绿原酸，故选用水及10%乙醇洗脱杂质，收集20%乙醇洗脱液备用。

3.3 本文为了保证制剂的质量，对不同产地的金银花药材中绿原酸的含量进行测定，结果表明不同产地的金银花绿原酸的含量有较大差别，其中河南金银花绿原酸的含量最高，所以本方规定制剂所用金银花应为河南产“蜜银花”。

3.4 金银花为方剂中主药，绿原酸为金银花的主要活性成分，故选择绿原酸作为控制本品质量的指标成分。通过上述研究，建立清肺饮颗粒的质量标准，同时用于清肺饮颗粒的工艺筛选，稳定性试验，以及对原药材的质量控制，为全面控制制剂质量提供了理想的方法。

［1］中华人民共和国药典(一部).中国医药科技出版社，2010．

［2］中华人民共和国卫生部药典委员会.部颁标准WS3-B-2808-97《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂第十二册)，1997：6．

［3］王天志.金银花中3种有机酸的反相高效液相色谱法定量分析. 药物分析杂志，2000，20(5)：293．

［4］刘祥兰.金银花中绿原酸提取工艺的比较和优化研究.中成药，2000，22(6)：402．

［5］郑占虎.中药现代研究与应用.学苑出版社，1997．