HPLC法测定酚酞片中酚酞的含量

孙银华

酚酞是刺激性泻药，主要用于治疗慢性便秘。其原料、制剂收载于《中国药典》2010年版二部，原料、片剂中酚酞含量均采用紫外分光光度法，因分三步稀释较为繁琐，笔者在参考相关文献的基础上，建立HPLC法测定酚酞片中酚酞含量的方法，此法简便、准确，现报告如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪(美国Waters公司)，Waters 2998 Photodiode Array Detecer二极管阵列检测器(美国Waters公司)，Empower色谱工作站(美国 Waters公司);Sunfire TM C185 μm，4.6 ×150 μm 色谱柱(美国 Waters公司);JK-120超声清洗器(上海金棋实业公司超声电子工程部);BP211 d电子天平(德国Sartorius公司)。

1.2 试药 酚酞对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100091-199601);荧光母素对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100075-197902);甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯(国药集团化学试剂有限公司);酚酞片(上海信谊九福药业有限公司，批号100501;临汾奇林药业有限公司，批号1009071;江苏黄河药业股份有限公司，批号101018;山东仁和堂药业有限公司，批号091207)。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性 色谱柱:Sunfire TM C18(5 μm，4.6×150 mm);流动相:甲醇-0.05%磷酸溶液(70∶30);流速0.8 ml/min;柱温:30℃;进样量为10 μl，检测波长为284 nm;理论板数按酚酞峰计算不低于3000，酚酞与荧光母素分离度大于15。

2.2 对照品溶液的制备 ①精密称取酚酞对照品12.50 mg置25 ml量瓶中，加乙醇15 ml超声使其溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液;②精密称取荧光母素对照品10.72 mg置50 ml量瓶中，加乙醇30 ml超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为和贮备液。精密量取贮备液5 ml和贮备液10 ml置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为系统适应性溶液。另精密量取贮备液5 ml置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取酚酞片10片，精密称重，研细，精密称取1片(相当于100 mg酚酞)，置100 ml量瓶中，加乙醇60 ml，超声使溶解，并用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察 精密量取对照品贮备液定量稀释制得酚酞浓度分别为:10.00、50.00、100.00、250.00 和500.00 mg/L溶液。按“2.1”项下色谱条件精密量取上述溶液各10ul，注入液相色谱仪，在284nm波长处记录色谱图。酚酞峰面积分别为:98632、471451、934349、2318247 和 4698917。以浓度为横坐标(X)，各色谱峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归，得回归方程。酚酞标准曲线方程为:Y=9381X-3024.6，相关系数 r=0.9999，线性范围f为10.00～500.00 mg/L。

2.5 精密度试验 取对照品溶液，在上述色谱条件下，连续进样5 次，酚酞峰面积分别为:953938、951394、957060、955841 和958128，RSD为0.28%(n=5)。结果表明本方法精密度良好。

2.6 稳定性试验 取对照品溶液，分别于1、4、8、12、24 h测定，记录峰面积分别为:953938、955841、957363、962841 和931856，RSD为1.25%(n=5)。结果表明溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验 取样品(批号:101018)5份，按供试品溶液制备项制备及上述色谱条件测定，结果其标示量含量分别为97.19%、97.11%、97.30%、96.20%、96.43% 平均值为96.85%，RSD=0.50%(n=5)。结果表明本法测定样品重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(批号:101018)5份，分别精密加入同一对照品溶液，按供试品溶液的制备方法及上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。酚酞的平均回收率为100.10%，RSD=0.26%(n=5)，实验表明，本法准确性较好。

表1 加样回收率试验(n=5)

图1 酚酞片中酚酞含量测定的HPLC色谱图

2.9 样品含量测定 取4批样品分别按上述方法制备及色谱条件测定，以标准曲线方程计算含量，并与现行标准测的酚酞含量进行比较，结果见表2。

3 讨论

3.1 流动相的选择 参阅相关资料［1-3］，选择甲醇-0.05%磷酸为流动相，通过调整比例和流速进行考察后发现，以甲醇-0.05%磷酸(70∶30)流速0.8 ml/min为流动相时，酚酞和荧光母素分离效果好，保留时间、对称因子、塔板数均符合要求。

表2 酚酞片含量测定结果(标示量的百分含量%)

3.2 检测波长的选择 采用PDA检测器，采集210～400 nm3d图谱，提取酚酞色谱峰处的光谱图，表明其在229nm与275nm波长处有最大吸收，在229nm波长处溶剂的紫外吸收会影响测定，故选择275nm作为检测波长。

3.3 溶剂的选择 酚酞水溶性较差，可溶于甲醇、乙醇，原标准［4］采用乙醇作为溶剂，荧光母素采用无水乙醇作为溶剂。在使用甲醇作为溶剂时发现，荧光母素溶于甲醇后不稳定，放置一段时间，即出现絮凝，改用乙醇，即无该现象。综合考虑，在配置对照品贮备液时用乙醇作为溶剂，在二步稀释时采用流动相作为溶剂，样品采用乙醇超声10 min即可溶解。

［1］吴红英.高效液相色谱法测定酚酞片中酚酞含量研究.山西医药杂志，2010，39(2):161-162.

［2］王玫，曹霞.HPLC法测定酚酞片的含量探讨.黑龙江医药，2009，22(3):260-261.

［3］梁选革，伍国怡.高效液相色谱法测定酚酞溶液与酚酞片中荧光母素含量.医药导报，2006，25(11):1210-1211.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).北京:化学工业出版社，2010:882.