HPLC法测定江西不同产地蔓荆子中蔓荆子黄素的含量

杨人泽，钟美兴，钟星明（赣南医学院第一附属医院，赣州市341000）

蔓荆子为马鞭草科植物单叶蔓荆Vitex trifoliaL.var.simplicifoliaCham.或三叶蔓荆Vitex trifoliaL.的干燥成熟果实，为辛凉解表药，具有疏散风热、清利头目之功效，常用于治疗风热感冒、头痛等证[1]。单叶蔓荆分布广、产量大，其道地药材产区为山东[2]，江西是其主产区之一[3]；三叶蔓荆主产于海南、广西、云南等地。目前药用的蔓荆子有野生和人工栽培之分，由于生长环境的不同，其有效成分的含量差异很大。为了确保其药理作用和临床疗效，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法[4]对江西5地10批次蔓荆子药材中蔓荆子黄素进行了含量测定[5～7]，以为进一步开发利用蔓荆子[8，9]提供一定的科学依据。

1 仪器与试药

Agilent1100 HPLC仪（美国惠普公司）；AEL204电子微量分析天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）；KQ-500B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，频率：40 kHz，功率：500 W）；YLD-2000电热恒温鼓风干燥箱（黄石市恒丰医疗器械有限公司）。

甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯；蔓荆子黄素（中国食品药品检定研究院，批号：111554-200903，纯度≥98%）；10批蔓荆子药材（江西南昌1、江西南昌2、江西樟树1、江西樟树2、江西抚州1、江西抚州2、江西九江1、江西九江2、江西赣州1、江西赣州2）均于2009年8月采自江西各地，经鉴定为单叶蔓荆V.trifoliaL.var.simplicifoliaCham.的干燥成熟果实。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Alltima HPC18（250mm×4.6mm，5µm）；流动相：乙腈-50mmol·L-1磷酸二氢钾溶液（磷酸调pH值为3.0）＝50∶50；流速：1.0m L·m in-1；检测波长：254 nm；柱温：室温；进样量：10µL。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.蔓荆子黄素对照品；B.蔓荆子Fig 1 HPLC chromatogram s A.vitexicarpin control；B.V.trifolia

2.2 对照品溶液的制备

取蔓荆子黄素对照品约10mg，精密称定，置2m L量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1m L，置50m L量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1m L含0.1 mg的对照品溶液。0.45µm滤膜滤过，备用。

2.3 供试品溶液的制备

取蔓荆子药材中粉约2 g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）适量，置水浴上提取3 h，弃去石油醚液，残渣挥干，再加甲醇适量，索氏提取6 h，甲醇提取液浓缩至约25 m L，用甲醇转移至50m L量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得（相当于每1m L甲醇中含有蔓荆子药材40mg）。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取蔓荆子黄素对照品溶液2、5、7、10、12 µL，按上述色谱条件进样分析。以进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝3 743.7X－2 878.2（r＝0.999 4，n＝5）。结果表明，蔓荆子黄素进样量在0.2～1.2µg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液10µL，连续进样6次，测定蔓荆子黄素峰面积。结果，RSD＝1.28%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批样品适量，共6份，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定。结果，RSD＝2.64%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

在室温条件下，取适量供试品溶液于放置0、2、4、8、12 h时，按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，RSD＝1.2%（n＝5），表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

称取9份已知含量的蔓荆子药材中粉约1 g，分别按“2.3”项下方法制成供试品溶液（蔓荆子黄素含量为0.582 5mg·g-1），经0.45µm微孔滤膜过滤，各取续滤液0.5m L，置于25m L量瓶中，分别加入低、中、高浓度的蔓荆子黄素对照品溶液各适量，以甲醇定容，按上述色谱条件测定蔓荆子黄素的含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝9）

2.9 样品含量测定

取10批样品，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，各取10µL按上述色谱条件进样，测定峰面积，由线性回归方程计算样品中蔓荆子黄素的含量，结果见表2。

3 讨论

从测定结果可以看出，江西不同产地的蔓荆子药材中蔓荆子黄素的含量差异较大，最高的为0.063 7%，最低的为0.033 4%，含量相差2倍以上。其中含量较高的江西九江1、2号采自都昌县的蔓荆子GAP种植基地。蔓荆子主要生长在海边沙滩荒洲、河岸沙滩荒洲、盐碱地三大环境中。研究结果表明，生长在鄱阳湖边的1、2号样品及生长在赣江流域周边的3、4、5、6号样品要比生长在非河流、湖泊周边的山区样品的含量高。本试验结果可为蔓荆子的栽培、种植及采摘区域提供一定的科学依据，也表明药用植物都具有一些特异的适应性生境[10]，同时也验证了江西是蔓荆子的适应产区。

表2 江西不同产地蔓荆子中蔓荆子黄素的含量测定结果（n＝3）Tab 2 Results of content determ ination of vitexicarpin in V.trifolia from different producing areas of Jiangxi province（n＝3）

目前在江西都昌县已建成全国最大的蔓荆子种植基地，面积达3万余亩。已有实验证明，蔓荆子中含有C2－C3双键的黄酮类化合物可以抑制某些癌症细胞的增殖[11]，可以看出它在癌症的防治方面具有很大潜力。综上，本方法简便、快速、线性关系良好，可为进一步开发利用蔓荆子提供一定的科学依据，但该药材的开发利用还应在种质、遗传特性、生境、化学成分、药理药效方面做更深入的系统研究。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：340.

[2]胡世林.中国道地药材[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版杜，1989：415.

[3]朱圣和.中国药材商品学[M].北京：人民卫生出版杜，1990：307.

[4]胥秀英，郑一敏，杨艳红，等.高效液相色谱法测定蔓荆子中木犀草素的含量[J].时珍国医国药，2005，16（7）：609.

[5]王 坤，管玉民，张桂菊，等.高效液相测定不同地区蔓荆子中蔓荆子黄素的含量[J].药物分析杂志，2003，23（4）：257.

[6]彭 霞，台海川.HPLC测定傣药蔓荆叶中蔓荆子黄素的含量[J].中国民族医药杂志，2009，10（10）：56.

[7]包桂花，康廷国，巴根那，等.HPLC法测定蒙药痔瘘六味丸中蔓荆子黄素的含量[J].辽宁中医杂志，2007，34（10）：1 453.

[8]吴永忠，朱良辉，胡世林，等.不同产地蔓荆子化学成分含量比较[J].中药材，2000，23（10）：616.

[9]徐榕青，林玉霖，林文津，等.不同产地蔓荆子生药材中总黄酮含量的比较研究[J].中药材，2008，31（2）：243.

[10]王 璃，魏建和，陈士林，等.道地药材浙贝母产地适宜性的GIS分析[J].中国现代中药，2006，8（6）：4.

[11]李宗友.蔓荆子黄索对体外鼠性淋巴细胞增殖和细胞株生长的抑制作用[J].国外医学中医中药分册，1999，21（6）：36.