CD151在胃腺癌和宫颈癌中的表达

董海影 张 春 (齐齐哈尔医学院医学技术学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006)

在我国，胃癌特别是进展期胃癌患者的5年生存率仅为15%左右，其中50%死于复发和转移〔1〕。而子宫颈癌位于女性恶性肿瘤发病和死亡率的第二位，每年全球约有50万新诊断的子宫颈癌患者，接近27万人死于子宫颈癌，其中有80%的死亡病例发生在发展中国家。在我国，每年新增子宫颈癌例约13.5万，约有8万人因此死亡〔2〕。因此，寻找胃癌与宫颈癌的早期标志物以及在转移中起关键作用的靶分子，为临床治疗提供高效的新靶点，是目前胃癌与宫颈癌研究领域的热点。

1 对象与方法

1.1 病例资料 2006～2009年齐齐哈尔医学院第一附属医院手术切除的胃腺癌58例，其中，男30例，女28例，年龄31～78〔平均(54.5±20.7)〕岁，依据 WHO腺癌组织学诊断标准进行组织学分级，高、中、低分化各17、18、23例。同时随机选取同一手术切除标本远端的正常胃黏膜组织28例作为对照。宫颈癌55例，年龄33～75〔平均(42.6±21.2)〕岁，同样依据诊断标准进行分级，高、中、低分化各16、19、20例。并选取同一手术切除标本远端的正常宫颈黏膜组织24例作为对照。

1.2 实验试剂 第Ⅰ抗体为鼠抗人，单克隆抗体，由美国MAXIM公司生产;SABC免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒分别由武汉博士德生物工程有限公司和福州迈新生物技术开发有限公司提供。

1.3 实验方法

1.3.1 切片制作 将新鲜标本固定于10%中性甲醛中过夜，常规乙醇梯度脱水，二甲苯透明和石蜡包埋，连续切片厚度5 μm。部分切片常规 HE染色，用于病例诊断。其他切片37℃温箱储存待染。

1.3.2 免疫组化染色 免疫组织化学主要染色步骤:①切片脱蜡水化;②3%H2O2甲醇灭活内源性过氧化物酶;③依次滴加一抗、二抗和三抗;④DAB显色;⑤苏木精复染;⑥常规脱水、透明、封片。用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3.3 染色结果判断 以细胞和(或)细胞质出现明显的棕黄色颗粒为阳性细胞。每例随机选取出10个不重复、不重叠的高倍视野(10×40)，计数阳性细胞数及所有细胞数，计算阳性细胞率=Σ阳性细胞数/Σ细胞数×100%。同时按染色强度评分:无显色为1分，染色弱为2分，中等染色为3分，强染色为4分。CD151表达量=显色强度×细胞阳性率%。

1.4 统计学分析 所有数据运用SPSS13.0软件包进行处理，计量数据以±s表示，采用独立样本t检验，计数资料进行χ2检验。

2 结果

CD151在所有的胃腺癌(58/58，100.0%)和宫颈癌组织(55/55，100.0%)都表达，在绝大多数正常胃黏膜(26/28，92.9%)和宫颈黏膜组织(23/24，95.8%)中也都表达。CD151在胃腺癌和宫颈癌中的细胞阳性率及表达量都要显著高于正常组织(P＜0.05)。见表1，表2，图1。

表1 CD151在正常胃黏膜及胃腺癌的表达

图1 CD151在胃及宫颈组织中的表达(DAB，×400)

表2 CD151在正常宫颈黏膜及宫颈癌的表达

3 讨论

四次跨膜蛋白超家族(Transmembrane 4 superfamily，TM4SF)是近年来被广泛研究的一个膜蛋白家族，在人体细胞中广泛表达。这个家族的成员参与细胞表面分子之间的连接信号传导，在调节细胞增殖、激活以及细胞黏附活力中起重要作用。研究证实，TM4SF家族在肿瘤的生长、迁移及血管生成中起重要作用〔3〕。迄今为止，该家族已检测出30多个成员，其中绝大多数被认为是抑癌基因，例如CD9、CD82。它们的产物与肿瘤发展、预后呈负相关。而新近发现的TM4SF成员CD151却与肿瘤发生及预后呈正相关〔4〕，并且是该家族成员中唯一的癌基因〔5〕。CD151在人类多种肿瘤细胞表面均有较高水平的表达，与肿瘤的预后、恶性进展、治疗等有着密切关系，随着癌的进展CD151的表达增加，且CD151表达越高患者预后越差〔4〕。并且研究证实，CD151对内皮细胞的移行及微血管形成起促进作用，在血管生成及重塑中起关键作用，有利于肿瘤细胞的浸润及转移〔6〕。鉴于CD151与肿瘤发展呈正相关，促进肿瘤细胞增殖、浸润及转移，在肿瘤恶性进展中起着重要的作用。本实验利用免疫组织化学法检测CD151与胃腺癌和宫颈癌的发生、发展关系。

本研究通过免疫组织化学法检测CD151在胃腺癌和正常胃黏膜组织中的表达。研究发现，CD151在胃腺癌组织中呈现阳性的高表达，相比较于在正常胃黏膜组织中的表达，非常显著。由此认为，CD151在胃腺癌的发生发展中起着非常重要的作用。而要阐明CD151与胃癌发生发展、浸润及转移中的关系，为胃癌的早期诊断、进展判定及转移预测提供有临床实用价值的标志物，为胃癌尤其是进展期胃癌的临床治疗提供新的靶向分子，还需要通过进一步实验加以证实。

本次实验我们同样发现，CD151的细胞阳性率和CD151表达量在宫颈癌组织中均高于正常的宫颈黏膜组织。因此，CD151蛋白可能是宫颈癌治疗的一个潜在靶点。宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤〔7〕，目前认为宫颈癌的发生、发展是由量变到质变、由渐变到突变的过程。早期宫颈癌治疗效果尚可，但后期宫颈癌的浸润及转移是其治疗中的主要问题〔8〕。由本次试验结果可见，CD151在宫颈癌的发生与发展中存在着一定的作用。至于其在宫颈癌的早期诊断、疗效检测和预后评估中的价值需要在随后的临床跟踪实验中得到进一步的证实。

1 徐光炜.胃癌治疗的现状及问题〔J〕.外科理论与实践，2003;8(1):3.

2 朱雪琼，石一复.HPV疫苗预防子宫颈癌临床研究进展〔J〕.实用肿瘤杂志，2010;25(1):12-6.

3 Yauch RL，Kazarov AR，Desai B，et al.Direct extracellular contact between integrin α3β1and TM4SF protein CD151〔J〕.J Biol Chem，2000;2759(13):9230-8.

4 Ang J，Lijovic M，Ashman L K，et al.CD151 protein expression predicts the clinical outcome of Low-grade primary prostate cancer better than histologic grading:a new prognostic indicator〔J〕.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2004;13(11):1717-21.

5 Hong IK，Jin YJ，Byun HJ，et al.Homophilic interactions of Tetraspanin CD151 up-regulate motility and matrix metalloproteinase-9 expression of human melanoma cells through adhesion-de-pendent c-Jun activation sig-naling pathways〔J〕.J Biol Chem，2006;281(34):24279-92.

6 Lan RF，Liu ZX，Liu XC，et al.CD151 promotes neovascularization and improves blood perfusion in a rat hind-limb ischemia model〔J〕.J Endovasc Ther，2005;12(4):469-78.

7 Dang DT，Bachman KE，Mahatan CS，et al.Decreased expression of the gut-enriched Kruppel-like factor gene in intestinal adenomas of multiple intestinal neoplasia mice and in colonic adenomas of familial adenomatous polyposis patients〔J〕.FEBS Lett，2000;476(3):203-7.

8 周 希，冀 静，吴 怡，等.CD147蛋白在人宫颈癌中的表达〔J〕.西安交通大学学报，2010;31(1):14-25.