仁丹质量标准研究

况 刚，郑小平，张正峰，邓开英

(重庆市药品检验所，重庆 401121)

仁丹收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂(第五册)》，具有清暑开窍、辟秽排浊之功，对中暑呕吐、烦躁恶心、胸中满闷、头目眩晕、晕车晕船、水土不服等症具有较好的疗效，但原标准仅收载了显微鉴别、丁香的薄层色谱鉴别及常规检查项[1]。笔者建立了方中木香、肉桂、广藿香、甘草的薄层色谱鉴别方法，同时建立了方中薄荷脑、冰片的含量测定方法，以更全面有效地控制药品质量。

1 仪器与试药

Agilent 6890型高效气相色谱仪;FA2004N型电子分析天平(上海精密仪器有限公司)。薄层色谱硅胶G(青岛海洋化工有限公司);木香对照药材(批号为120921－200506)、肉桂对照药材(批号为121363－200401)、广藿香对照药材(批号为1135－200001)、甘草对照药材(批号为120904－200410)、薄荷脑对照品(批号为0728－200506)、异龙脑对照品(批号为 110881－200202)、龙脑对照品(批号为111512－200201)，均由中国药品生物制品检定所提供;仁丹(吉林修正药业集团有限公司，批号为S080601，S080602，S080603);试剂均为分析纯(国药集团)。

2 方法和结果

2.1 薄层色谱鉴别(定性)

2.1.1 肉桂

取本品5 g，研细，加乙醇20 mL，超声处理15 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1 mL含1 μL的溶液，作为对照品溶液。取缺肉桂的阴性样品5 g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点;阴性样品无干扰(见图1 A)。

2.1.2 木香

取本品5 g，研细，加石油醚(60～90℃)20 mL，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加丙酮2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材0.1 g，同法制成对照药材溶液。取缺木香的阴性样品5 g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－环己烷－乙酸乙酯(12∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同的蓝色斑点;阴性样品无干扰(见图1 B)。

2.1.3 广藿香

取本品粉末10 g，研细，加乙醚40 mL，超声处理10 min，挥干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取百秋李醇对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。取缺广藿香的阴性样品10 g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液及阴性对照品溶液各10～15 μL、对照品溶液3 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃ )－乙酸乙酯－冰醋酸(95∶5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点;阴性样品无干扰(见图1 C)。

2.1.4 甘草

取本品5 g，研细，加乙醚40 mL，加热回流1 h，滤过，药渣加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 mL使溶解，用20 mL正丁醇提取，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3 mL使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1 cm，长12 cm)，以水100 mL洗脱，弃去水液，再用70%乙醇液50 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。取缺甘草的阴性样品5 g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液及阴性对照品溶液各1～2 μL、对照药材溶液2 μL，分别点于同一以1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点;阴性样品无干扰(见图1 D)。

2.2 薄荷脑、冰片的含量测定(气相色谱法)

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:聚乙二醇(PEG)－20M的弹性石英毛细管柱(柱长30 m，内径 0.32 mm，膜厚度 1 μm);柱温:140 ℃;载气:N2;进样量:1 μL;FID检测器。理论板数按薄荷脑峰计算应不低于2000[2－3]。 气相色谱图见图2。

图1 薄层鉴别色谱图

图2 气相色谱图

2.2.2 溶液制备

取薄荷脑、异龙脑、龙脑对照品各适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每 1 mL 含薄荷脑 0.4 mg、异龙脑 24μg、龙脑 80μg 的溶液，即得对照品溶液。取本品约2 g(批号S080601)，研细，精密称定，置250 mL圆底烧瓶中，加水150 mL，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，溢流入烧瓶时为止，再加乙酸乙酯2 mL，连接回流冷凝管，置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸1 h，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，分取乙酸乙酯层;以少量乙酸乙酯洗涤挥发油提取器，合并乙酸乙酯液，并迅速以盛有无水硫酸钠的漏斗滤过，用少量乙酸乙酯洗涤滤器，滤液置10 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制备，作为阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察:分别取薄荷脑、异龙脑和龙脑对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成一系列浓度的溶液。吸取各浓度溶液1 μL，分别注入气相色谱仪，测定，以峰面积积分值 Y对进样量 X(μg)进行线性回归(n=7)。结果见表 1。

表1 各组分线性回归方程与线性范围

精密度试验:取各对照品溶液适量，分别按已确定的色谱条件重复进样5次。结果峰面积的 RSD薄荷脑为0.9%，异龙脑为0.8%，龙脑为0.8%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取本品适量，按供试品溶液的制备方法制备溶液并测定。结果含量的 RSD薄荷脑为1.6%，异龙脑为1.3%，龙脑为1.3%(n=5)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液适量，于放置 0，2，4，6，8，10，12 h后分别测定。结果峰面积的 RSD薄荷脑为0.9%，异龙脑为1.6%，龙脑为1.5%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验:分别称取同批样品(批号为S080601)内容物各6份，精密称定，精确加入薄荷脑、异龙脑和龙脑对照品溶液适量，按供试品溶液的制备方法制备溶液，测定并计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

分别精密称取3批样品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定含量。结果见表3。

3 讨论

通过薄层色谱鉴别，在仁丹现行质量标准基础上增加了方中木香、肉桂、广藿香、甘草的薄层鉴别方法。同时，还考察了方中豆蔻、砂仁、陈皮的薄层色谱鉴别，但存在阴性干扰，结果不理想。

表3 样品含量测定结果(mg/g)

采用气相色谱法测定方中薄荷脑、冰片含量时，曾以冰浴超声处理及水蒸气蒸馏两种提取方式进行了考察，结果水蒸气蒸馏法测得薄荷脑、冰片的含量均比冰浴超声提取法测得的含量高，且杂质较少。方法学考察结果表明，所建立的方法简便、灵敏、准确、专属性强，可作为控制仁丹中薄荷脑、冰片的含量测定方法。

[1]WS3－B－0931－91，卫生部颁药品标准·中药成方制剂(第五册)[S].

[2]王 旭，张隶涛，李 东.气相色谱法测定万应锭中冰片含量的探讨[J]. 华北煤炭医学院学报，2009，11(5):643－644.

[3]杨宗辉，惠 涛.GC法测定川贝枇杷露中薄荷脑的含量[J].西北药学杂志，2008，23(5):262－263.