高效液相色谱法测定连栀胶囊中连翘苷和栀子苷含量

许红辉，张永锋，赵韶华，柏艳柳，李晓燕

(河北以岭医药研究院，河北 石家庄 050035)

连栀胶囊为我单位自行研发的中药六类新药，由连翘、栀子、甘草等药味组方。为有效控制产品质量，笔者采用高效液相色谱法测定了制剂中连翘、栀子的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695－2487型高效液相色谱系统。连栀胶囊(石家庄以岭药业股份有限公司，批号为050101);连翘苷对照品(批号为110821－200507)，栀子苷对照品(批号为110749－200511)均由中国药品生物制品检定所提供;乙腈(Fisher色谱纯)，其余试剂、试药均为分析纯，水为乐百氏纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Waters Symmetryshield RP18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:测定连翘苷时用乙腈－0.05%磷酸溶液(25∶75)，测定栀子苷时用乙腈－水(13∶87);流速:1 mL/min;检测波长:测定连翘苷时为205 nm，测定栀子苷时为238 nm;进样量:20 μL。理论板数分别按连翘苷峰和栀子苷峰计算均应不低于4500。

2.2 溶液制备

精密称取连翘苷和栀子苷对照品适量，分别加50%甲醇制成每1 mL含2.4 μg和24 μg的溶液，摇匀，即得连翘苷对照品溶液和栀子苷对照品溶液。取本品内容物，研细，取0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理20 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，蒸干，残渣加水10 mL使溶解，上中性氧化铝柱(100～200目，3 g，内径 1.0 cm)，加水 25 mL 洗脱至 50 mL 的量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得连翘苷供试品溶液和栀子苷供试品溶液。

2.3 检测波长选择

对连翘苷对照品进行光谱扫描，3个波长的检测灵敏度相差很大，205 nm波长处最灵敏，约为228 nm波长处的3.7倍，约为277 nm波长处的11.26倍，故选择205 nm为连翘苷的检测波长。对栀子苷对照品进行光谱检测，可见在238 nm波长处有最大吸收，故选择238 nm为栀子苷的检测波长。

2.4 方法学考察

专属性试验:根据处方配比分别去除连翘、栀子外的其他药味，按制备工艺、供试品溶液的处理方法分别制成不含连翘或栀子的阴性对照品溶液，精密吸取对照品溶液、供试品溶液以及阴性对照品溶液各20 μL，进样，测定。结果阴性样品不干扰连翘苷、栀子苷的测定。色谱图见图1和图2。

图1 连翘苷专属性试验高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取不同质量浓度的连翘苷对照品溶液或栀子苷对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标、进样量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程分别为Y=11359.61X－6075.72(r=0.999998)和 Y=1507.19X －11730.12(r=0.999997)。结果表明，连翘苷和栀子苷进样量分别在 2.40 ～192.00 ng和 23.20～1392.00 ng 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:分别精密吸取连翘苷对照品溶液或栀子苷对照品溶液、供试品溶液各20 μL，按拟订色谱条件连续5次测定色谱峰吸收值。结果对照品溶液、供试品溶液中连翘苷和栀子苷的 RSD分别为0.38%，0.08%和 0.50% ，0.28%。

稳定性试验:分别精密吸取连翘苷对照品溶液或栀子苷对照品溶液、供试品溶液各 20 μL，在 0，2，4，8，16，24 h 时分别进样，测定色谱峰吸收值。结果对照品溶液、供试品溶液中连翘苷和栀子苷的 RSD 分别为 0.14%，0.34% 和 0.22%，0.86% ，表明 24 h 内连翘苷和栀子苷稳定性良好。

重现性试验:取同批样品 9 份，分别取样 0.24，0.30，0.36 g，每个取样量各制备3份供试品溶液，进样检测。结果样品中连翘苷的平均含量为0.863 mg/g，RSD为1.36%;栀子苷的平均含量为10.349 mg/g，RSD 为 0.91%。

加样回收试验:取同批样品9份，分为3组，各加入低、中、高3种质量浓度的连翘苷对照品溶液和栀子苷对照品溶液，每个质量浓度分别制备3份回收率供试品溶液，依法检测。结果见表1。

图2 栀子苷专属性试验高效液相色谱图

3 讨论

测定连翘苷含量时采用了检测波长205 nm，较2005年版《中国药典(一部)》[1]中所述的277 nm提高了10余倍的检测灵敏度。205 nm虽为末端吸收，但经试验可以看出，选取205 nm为检测波长可提高检测灵敏性、减少干扰、降低取样量、延长色谱柱寿命，且含量测定方法学研究证明方法可行、重现性好。本品中连翘苷、栀子苷含量测定采用同一份供试品溶液，方法简便易行，降低了检测成本，节约能源，且以水为洗脱溶剂，减少了污染，更加低碳环保。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:117.