肠健片醇提工艺的研究

李成舰，陈海洋，贺百花，高 倩，赵红深

湖南环境生物职业技术学院医药系，湖南衡阳 420001

肠健片是中药复方制剂，主要由黄连、木香、吴茱萸（制）等制备而成，该方主要用于肠道疾病，经过多年的临床验证，其治疗效果非常显著。为了进一步对该药的作用机制进行了解和探索，笔者以小檗碱与木香烃内酯的含量及干浸膏得率为评价指标，采用正交设计结合多指标综合评分法优化醇提工艺并对该制剂中所含药物的主要药理活性成分进行研究，现报道如下：

1 仪器与试药

1.1 材料

黄连等中药材（由四川省天奇药业有限公司提供）；盐酸小檗碱对照品 （由北京太洋药业有限公司提供，批号：H11021511）；木香烃内酯对照品（由上海科兴实验室设备有限公司提供，批号：111524-200503）；以甲醇、乙腈作为色谱纯，采用重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器

Waters高效液相色谱仪；Waters 2487型紫外检测器；色谱柱：Polaris C18－A 色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；Breeze工作站；C-R3A数据处理器；电子分析天平（MA11O型，上海天平仪器厂）

2 方法与结果

按照《中国药典》规定的方法，对药材中的指标成分分别测定[1]。木香中木香烃内酯与去氢木香烃内酯总浸出量为1.9%；黄连中盐酸小檗碱浸出量为6.1%，均符合药典规定的要求。

2.1 干浸膏得率的测定[1]

首先取25.00 ml提取液，置于干燥蒸发皿中，温度调节为105℃，水浴蒸干并真空干燥3 h，干燥后移至器皿中，冷却30 min后称定重量（W）。

2.2 小檗碱浸出量的测定[2]

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Polaris C18-A色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调节pH至3）-乙腈（70∶30）；检测波长：270 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：30℃。

2.2.2 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱加65%乙醇配制成0.05 mg/ml的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备与测定 取4倍处方量药材（其中含黄连24 g，木香40 g）置于圆底烧瓶中，在水浴上加热回流，提取 3次，加入65%乙醇分别为600﹑480﹑480 ml，提取时间分别为2.0﹑1.5﹑1.5 h，滤过，合并滤液。取提取液减压浓缩至适量并用相同的溶剂定容至1000 ml，精密取5 ml药液后置于50 ml容量瓶中，并用相同的溶剂稀释至刻度。摇匀后静置，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。将上述供试品溶液、对照品溶液各10 μl注入高效液相色谱仪中检测，以外标法计算小檗碱含量。

2.3 木香烃内酯浸出量的测定[3]

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Polaris C18-A色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（65∶35）；检测波长：225 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：30℃。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取木香烃内酯标准品，加入适量甲醇，配制成160 μg/ml的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备与测定 按照“2.1.3”中供试品溶液的方法制备定容液1000 ml，精密吸取定容液5 ml置于25 ml量瓶中，用相同的溶剂稀释至刻度，摇匀，静置，取上清液，经0.45 μm微孔滤膜过滤后，取续滤液作为供试品溶液。

取对照品、供试品各10 μl注入色谱仪，测定其峰面积积分值，以外标法计算木香烃内酯的含量。

2.4 提取工艺条件的考察

2.4.1 提取次数的考察 称取4倍量的药材（其中含黄连24 g，木香40 g）3份，采用65%的乙醇回流提取3次，溶剂量为8、6、6倍，提取时间为2 h，分别收集各次提取液，适当浓缩并定容至1000 ml，备用。取定容溶液，按照前述方法分别测定盐酸小檗碱与木香烃内酯的浸出量，结果表明采用65%乙醇回流提取时，在第3次提取中盐酸小檗碱与木香烃内酯浸出量占总浸出量的8.65%与11.33%，故确定提取3次。

2.4.2 正交试验优选乙醇提取工艺条件 各因素分别设计3个水平，见表1。取4倍处方量药材（含黄连24 g，木香40 g），共9份，用L9（34）正交表安排实验，以小檗碱与木香烃内酯的浸出量和干浸膏得率为评价指标。见表2。

表1 因素水平

2.5 数据处理与试验结果

对表2中的结果用多指标试验全概率方法进行数理处理[4]。 设 Bi为第 i号实验，Aj为第 j个指标，i＝1、2、3…n；j＝1、2、3…k，并且 A1、A2…Ak互不相容，又设各指标的重要程度之比为 A1∶A2∶…∶Ak＝m1∶m2∶…∶mk，设 N＝m1＋m2＋…＋mk，则：

表2 正交试验安排及结果

以Xji表示第j个指标的第i个测定值，以Sj表示第j个指标下各次（n次）实验结果的和，即：

SS＝∑Xji，其中 i＝1、2、3…n；j＝1、2、3…k；则：

于是由全概率公式得：

公式③即为同时兼顾各指标综合效应的全概率公式。按照m1-m2-m3（小檗碱含量指标权重∶木香烃内酯含量指标权重∶浸膏得率指标权重）=2∶2∶1 计算 P（Aj）＝mj/N。三指标的 P（Bi/Aj）＝Xji/Sj列于相应各指标的右侧，则同时兼顾各指标效应的全概率公式分为：P（Bi）=0.4P（Bi/A1）＋0.4P（Bi/A2）＋0.2P（Bi/A3）， i＝1、2、3…9，结果见表 2。对表 2 中的全概率计分（P 值）进行方差分析，结果见表3。

由表2与表3可知，最佳的提取方案为A2B1C2D3，与表2中正交试验的No.4方案一致，从而使正交试验得以验证。因此最佳提取工艺条件确定为A2B1C2D3，即用含1%硫酸的65%乙醇溶液提取3次，加溶剂量为12﹑10﹑10倍，提取时间分别为 2.0﹑1.5﹑1.5 h。

表3 正交试验方差分析

3 讨论

黄连与木香为本复方制剂处方中的重要药物，故选择其相应的药理活性成分小檗碱与木香烃内酯作为该醇提工艺的考察评价指标，实验中测定的木香烃内酯含量实际为木香烃内酯与去氢木香烃内酯的总量。

关于黄连中小檗碱的提取方法很多[5]，刘圣等[6]通过实验表明，由于小檗碱的硫酸盐溶解度较大，黄连提取采用酸性溶剂能增加小檗碱的浸出量，但硫酸加入量从0.1%到1.0%不等，故本实验参考相关报道[5]中小檗碱提取方法并进行改良，对提取液中加入的酸的用量进行考察。实验结果表明，该方法能有效增加小檗碱在复方混合提取中的浸出量，提示该方法相对有效。

中试产品检验结果显示，不同批次的产品中指标成分的含量基本一致，小檗碱浸出量为75%左右，木香烃内酯浸出量为62%左右，提示该提取方法提取效果较好，且相对稳定，说明本试验方法较传统方法更加快捷、全面、合理。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:57-58,285-285.

[2]田洛,宣依昉,范荣军,等.醇碱提取法提取黄芪多糖[J].吉林大学学报:理学版,2006,44(4):652.

[3]王萍,何强,毛伟新,等.枳香胶囊提取工艺的研究[J].中成药,2008,30(4):605-607.

[4]石召华,翟莉,曾庆恢,等.用多指标试验全概率评分法研究儿泻贴提取工艺[J].中国医院药学杂志,2008,17(28):1453-1455.

[5]张文珠,刘霞,温博,等.反相高效液相色谱法测定肾复康胶囊中的野黄芩苷和芦丁[J].色谱,2004,22(2):138.

[6]刘圣,唐丽琴,陈礼明.正交试验优选黄连中小檗碱提取工艺的研究[J].中国药房,2004,15(1):18-20.

[7]陈秋东,徐志南,于平,等.中药决明子中蒽醌类活性成分的生化研究进展[J].中药材,2002,25(6):442.

[8]王海棠,吕本莲,尹卫平,等.正交实验法研究决明子提取工艺[J].天然产物研究与开发,2003,15(2):141.