湘玉竹HPLC指纹图谱研究

刘 婷，钟晓红，周 舟

（湖南农业大学园艺园林学院，湖南 长沙 410128）

玉竹（Polygonatum odoratum（Mill.）Druce），别名铃铛菜、尾参、地管子、甜草根，是百合科黄精属多年生草本植物，药材为干燥的根茎。玉竹为湖南省道地药材，其中猪屎尾参应用最广，商品药材称为湘玉竹。玉竹的分布较广，在黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西、内蒙古、甘肃、青海、山东、河南、湖北、湖南、安徽、江西、江苏、台湾等地均可生长[1-2]。玉竹含有氨基酸、微量元素、多糖、苷类、甾醇、挥发油等其他成分。玉竹的功能表现在养阴润燥，除烦，止渴，可治热病伤阴、咳嗽烦渴、虚劳发热、消谷易饥等症[3]。近年来药理研究表明，除上述功效外，玉竹的甾醇提物能增强免疫力，煎剂有扩张血管、抗急性心肌缺血、降压、抗衰老、抗菌等作用，注射液有降血脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤的作用[4]。近年来有很多关于玉竹化学、药理等方面的研究，本试验采用高效液相色谱法[5-6]对玉竹的HPLC指纹图谱进行了研究，可为其鉴别、质量评价以及质量标准制定提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试材料 玉竹药材，10批药材均采自于湖南省的不同地方。

1.1.2 试剂与仪器 试剂：薯蓣皂苷对照品购自成都曼斯特生物科技有限公司，纯度大于或等于98%；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪；DAD检测器；R-1001型旋转蒸发仪；AL104型电子分析天平。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱：Welchrom-C8（4.6×250 mm，5 μm）柱；流动相：乙腈（A）—0.2%磷酸水（B）；洗脱梯度：0.01～45 min，1%A～65%A，45～55 min，65%A～90%A，55～65 min，90%A～100%A；体积流量1.0 mL/min；柱温25℃；检测波长203 nm；运行时间70 min。

1.2.2 供试品溶液的制备 取玉竹粉末2 g，精密称定，置平底烧瓶中，加甲醇40 mL，超声提取0.5 h，提取3次，过滤，滤液浓缩，残渣加甲醇溶解并定容至 10 mL。用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，取续滤液，即得。

1.2.3 试验设计 （1）精密度试验：分别精密吸取同一供试品溶液，连续进样5次，每次20 μL，按上述方法色谱条件测定。计算各峰峰面积，如RSD值≤3%，表明该方法精密度良好。（2）稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在 0，2，6，12，24 h 检测，测得各共有峰相对保留时间和相对峰面积比值的RSD值≤3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。（3）重复性试验：取同一批玉竹药材，按1.2.2方法制备供试品溶液5份，分别进样，每次20 μL，按上述方法色谱条件测定。计算各峰峰面积，如RSD值≤3%，表明该方法重复性良好。

2 结果与分析

2.1 指纹图谱的建立[7-8]

精密吸取供试品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。同一试验条件下，测定10批玉竹供试品HPLC色谱图，结果如图1所示，在10批玉竹的指纹图谱中含有9个共有峰，其中6号峰属于皂苷，是特征峰。

图1 10批湘玉竹的指纹图谱

2.2 共有指纹峰的标定

对各色谱峰的相对保留时间进行了计算，结果如表1所示，10批玉竹药材色谱峰相对保留时间稳定，RSD为0.147%～1.786%，符合指纹图谱RSD≤3%要求。

表1 指纹图谱共有峰的相对保留时间比较

2.3 相似度的计算

将测定结果导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（中国药典委员会2004A版）进行计算，得到10批玉竹药材与对照指纹图谱相似度的结果均大于0.9，表明各批次玉竹药材之间具有良好的一致性。本方法可用于综合评价药材的整体质量。

3 讨论

（1）提取方法的确定：本试验中考察了2种提取方法，即超声提取、回流提取，依法操作，超声法提取方法提取的供试品溶液的特征峰较多，因此选用回流的方法。

（2）流动相的选择：本试验曾用乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.2%磷酸水、乙腈-0.3%磷酸水系统进行梯度洗脱，结果发现，乙腈-0.2%磷酸水系统进行梯度洗脱可以达到较好的分离效果。

（3）检测波长的选择：试验中考察了波长203、210、254、289、310 nm 下的色谱图，综合分析，选择203 nm波长作为本指纹谱的测定波长。

（4）相似度的评价：本试验将10批玉竹药材的指纹图谱导入“中药色谱指纹图谱相识度评价系统2004A版”软件，结果表明10批玉竹药材的色谱图相似度均大于0.9，相似度较好。该试验用了10批药材，保证了试验方法具有代表性，可通过本方法制定标准指纹图谱来控制玉竹药材质量。

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