杨增艳 韦金育 张青青 韦 涛
广西民族医药研究院,广西 南宁 530001
黄根为茜草科植物南山花Prismatomeris connata Y.Z.Ruan.的根。具有利湿退黄,强筋壮骨,祛瘀生新,凉血止血等功效,可用于风湿骨痛,跌打损伤,白血病,矽肺,牙龈出血,尿路感染的治疗[1]。在广西壮族民间常用黄根治疗急、慢性肝炎。本课题组通过研究黄根对肝纤维化大鼠模型的病理学改变,进而观察其抗肝纤维化作用。
Wistar大鼠60只,SPF级,体重203±13.1g,雌雄各半。购自广西医科大学动物实验中心。饲养于20~25℃,相对湿度60±10%环境中。
黄根醇提物,本院提取。临用时蒸馏水调制所需浓度。秋水仙碱,云南昊帮制药有限公司生产。批号:090920。用研钵研成粉末,蒸馏水溶解并稀释至实验所需浓度,临用摇匀。
BS224S型电子天平 (北京赛多利斯);AMS-18A全自动生化分析仪 (北京奥普森);SW-261-79型电热恒温水浴箱 (上海医疗器械厂)。
首次大鼠皮下注射纯CCl45ml/kg体重,以后改为皮下注射CCl440%花生油溶液3ml/kg体重,每3天1次,共6周。喂正常固体饲料,自由饮水[2]。
Wistar大鼠60只,随机分为6组:黄根高剂量组、黄根中剂量组、黄根低剂量组、空白组、模型组、秋水同碱组,每组10只。自造模第1天起,黄根高、中、低剂组分别按5.6g(生药)/Kg、2.8g(生药)/Kg、1.4g(生药)/Kg剂量给药,秋水仙碱组按0.2mg/Kg剂量给药。空白组、模型组分别予等体积蒸馏水,每天灌胃1次,共6周。各组末次给药后禁食12小时,称重,经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,取大鼠右小叶肝脏,剪取约0.5厘米厚度肝组织,中性甲醛缓冲液固定,石蜡包埋,切片为5μm厚度。经多级酒精脱水,二甲苯透明,作HE染色,天狼猩红染色,光镜下拍摄病理组织照片,观察纤维组织增生程度的变化情况[3]。
空白组大鼠肝组织中肝小叶结构清晰完整,肝细胞索排列整齐,无肝细胞变怀坏死,无炎细胞浸润,无纤维增生 (见图1)。模型组大鼠肝组织可见肝细胞排列紊乱,肝细胞空泡样变性、坏死,汇管区大量纤维组织增生并有散在炎性细胞浸润,部分大鼠可见纤维组织增生延伸到肝小叶,分隔肝小叶形成假小叶 (见图2)。阳性药组和高剂量组大鼠肝细胞变性坏死减轻,部分大鼠可见假小叶(见图3-4);中剂量组和低剂量组大鼠肝细胞变性、坏死仍较明显,汇管区纤维组织增生,部分大鼠可见假小叶(见图5-6)。
表3 各组大鼠组织胶原纤维增生程度分级比较情况 (各组n=10)
光镜下观察,纤维组织增生情况以“++++”为最严重,“-”为无纤维增生[4]。正常组大鼠肝组织切片显示无肝纤维化形成,模型组纤维增生明显,说明模型已造模成功。高剂量组和模型组对肝纤维化大鼠均有改善,可明显降低大鼠纤维增生程度 (P<0.01)。各组的Riddit分析的R值见表3。
病理学是用自然科学的方法,研究疾病的病因、发病机制、形态结构、功能和代谢等方面的改变,揭示疾病的发生发展规律,从而阐明疾病本质的医学科学[5]。在肝纤维化发生发展过程中,观察肝细胞的功能代谢和形态结构变化,更有助于探讨抗肝纤维化的作用机理和作用规律。本实验的病理学结果表明:黄根高剂量组大鼠肝细胞变性坏死程度减轻,提示黄根具抗肝纤维化作用。但有关黄根抗肝纤维化的作用机制,还有待今后更进一步的研究。
[1]梁启成,钟鸣.中国壮药学[M].广西民族出版社,2005.
[2]钟鸣,黄琳芸,余胜民,等.排钱草对大鼠实验性肝纤维化的影响[J].中西医结合肝病杂志,1999,9(4):22.
[3]孙设宗,唐微,张红梅.等.云芝多糖对小鼠实验性肝损伤保护作用的研究[J].中国现代医学杂志,2008,18(9):1217.
[4]中国中西医结合学会肝病专业委员会.肝纤维化中西医结合诊疗指南[J].中国中西医结合杂志,2006,26(11):1052.
[5]杨燕初,孟冬月.病理学[M].人民军医出版社,2007.