VIDAS 和VITEK32 在食品卫生检验中的应用

仝志琴

随着我国人民生活水平的提高，对食品卫生的要求也越来越高。食品微生物检验是食品卫生监督的重要组成部分。传统的国标检验方法要经过增菌、分离培养、生化实验、血清学实验等，过程繁琐，需要耗费大量的人力物力。近年来，国内外学者在传统检验方法的基础上，研究和探索出了许多快速的仪器检验方法。本文应用VIDAS 和VITEK32 仪器对食品中致病菌进行检测，并与传统方法进行比较，以探索快速检验方法在食品检验中的应用。

1 材料与方法

1.1 样品来源 样品为本单位公共卫生研究所无菌采集的全市超市、集贸市场、饭店及个体商店肉与肉制品，粮食加工品及米面制品、豆制品，动物性水产品，生食类蔬菜，婴儿配方食品，冷冻食品，餐饮食品，共257 份，无菌包装，每件样品至少250 g，及时送实验室进行增菌培养。

1.2 检验项目 沙门氏菌、单增李斯特菌。

1.3 主要材料与仪器 干燥培养基购自北京陆桥技术有限公司;致病菌显色平板由郑州贝瑞特公司提供;诊断血清由宁波天润生物药业有限公司生产;全自动荧光免疫分析仪(miniVIDAS)及试纸条由法国生物梅里埃公司生产;全自动微生物生化鉴定仪(VITEK32)及鉴定卡由法国生物梅里埃公司生产。

1.4 检验方法 国标法:按照国家标准GB4789－2010 检验方法进行检验。VIDAS +VITEK32 法:按照miniVIDAS 操作手册，样品经过前增菌和后增菌，以无菌操作取1 mL 后增菌肉汤，在100℃水浴中加热15 min，取出0.5 mL 煮沸灭活的肉汤加入VIDAS试剂条的样品孔中，根据VIDAS 操作规程检验，得出结果。对于VIDAS 检验结果阳性者，挑取后增菌液转种相应的致病菌显色平板经36℃、24 h 培养，再挑取可疑菌落转种营养琼脂36℃、24 h 纯化后，挑取菌落作革兰氏染色镜检及氧化酶或触酶、血浆凝固酶试验。根据细菌种类选卡片，作外部试验标记，然后按要求配置一定浊度的菌悬液填充鉴定卡，封口后，放入孵育箱孵育后自动判读。

2 结果

2.1 VIDAS 法与国标法检测结果比较 ①VIDAS法与国标法检测沙门氏菌结果比较:共检测样品257份，VIDAS 法检测沙门氏菌阳性样品11 份，国标法检测沙门氏菌阳性样品8 份，这8 份VIDAS 法都检出阳性。由此计算出检测沙门氏菌VIDAS 的灵敏度=8/8 ×100% =100%，特异度=246/249 ×100% =98.80，表1。②VIDAS 法与国标法检测单增李斯特菌结果比较:共检测样品257 份，VIDAS 法检测单增李斯特菌阳性样品17 份，国标法检测单增李斯特菌阳性样品10 份，这10 份VIDAS 法都检出阳性。由此计算出检测单增李斯特菌VIDAS 的灵敏度=10/10 ×100% =100%，特异度=240/247 ×100% =97.17%，表2。

表1 VIDAS 法与国标法检测沙门氏菌结果比较(n)

表2 VIDAS 法与国标法检测单增李斯特菌结果比较(n)

2.2 VIDAS +VITEK32 法与国标法检测沙门氏菌结果比较 ①VIDAS+VITEK32 法与国标法检测沙门氏菌结果比较:共检测样品257 份，国标法检测沙门氏菌阳性样品8 份，检出率3.11%，VIDAS+VITEK32 法检测沙门氏菌阳性样品9 份检出率3.50%。为了验证VIDAS+VITEK 法的可靠性，将VIDAS +VITEK 法做出的阳性菌种再用国标方法进行生化鉴定，结果完全一致。②VIDAS+VITEK32 法与国标法检测单增李斯特菌结果比较:共检测样品257 份，国标法检测单增李斯特菌阳性样品10 份，检出率3. 89%，VIDAS +VITEK32 法检测单增李斯特菌阳性样品12 份，检出率4.67%。将VIDAS +VITEK 法做出的阳性菌种再用国标方法进行生化鉴定，结果完全符合。

3 讨论

VIDAS 是联免疫吸附方法的全自动荧光免疫分析系统。它采用一系列增菌培养基和大量可供选择的选择性培养基，促进目标致病菌的生长，使其达到检测方法对检测限的要求。另外，针对不同致病菌，VIDAS 采用不同抗体，抗体捕获样品目标致病菌的特异性抗原，捕获后进行洗涤，使抗原抗体复合物与液体中的其他物质分离，然后加入碱性磷酸酶标记的抗体，它只结合目标致病菌的特异性抗原，此时酶量与目标致病菌的量呈一特定比例。由于碱性磷酸酶可分解试剂条中的荧光底物，发出荧光，因此系统可通过检测荧光强度，判断致病菌的含量［1］。VIDAS 检测能力强、速度快，一般上机后几十分钟可以得到初筛结果。从本研究可以看出，VIDAS 法的灵敏度为100%，所以可以作为大批量样品的筛查，能有效地节约检验时间和工作量。

VITEK32 对细菌的鉴定是以每种细菌的微量生化反应为基础。VITEK 测试卡含有多种生化反应孔，内含不同反应所需要的底物。将手工分离的待检纯菌落制成符合规定浊度要求的菌悬液，经充填机将菌悬液注入测试卡内，封口后放入读数器中，由读数器按光学扫描原理，定时测定各生化介质中指示剂的显色并在电脑上自动打印［2］。VITEK32 鉴定过程程序化、规范化，简便快捷。本研究表明，VITEK32 鉴定结果准确，经国标法验证，结果完全一致，这与黄雪珍等人的研究结果一致［3］。而由于VIDAS 存在一定的假阳性结果，需要进行进一步的鉴定，正好可以利用VITEK32 鉴定快捷、准确的特点进行最终的鉴定［4］。

国标检验方法在筛选可疑菌落的过程中，受许多人为因素的影响，比如平板划线技术、对可疑菌落的判定经验等，在筛查中难免遗漏。而VIDAS 采用仪器化程序操作，去掉了人为因素，再经过VITEK32进一步的鉴定，检出率有可能高于国标法，从而提高了工作效率和结果的准确性［5］。

［1］卜庆婧. VIDAS(R)实现致病菌的全自动检测—访生物梅里埃公司行业科学事务总监Stan Bailey［J］. 食品安全导刊，2008，6:45.

［2］杨毓环，陈伟伟. VITEK 全自动微生物检测系统原理及其应用［J］.海峡预防医学杂志，2000，6(3):38－39.

［3］黄雪珍，谭海芳，陈华. 食品中沙门菌污染状况调查及VITEK 微生物分析系统的应用效果评价［J］. 热带医学杂志，2007，3(7):263－265.

［4］林涛，兰敏，冯小均，等.VIDAS－VITEK 法快速检验食品中大肠O157 的研究［J］. 中国卫生检验杂志，2008，8(18):1660－1662.

［5］王颖，顾其芳，刘诚，等.食品中沙门菌快速检测方法的探索［J］.中国卫生检验杂志，2006，10(16):1220－1221.