人乳头瘤病毒基因分型检测在绝经后妇女HPV感染中的应用价值

吕 虹 刘志忠 刘竞争 邵春青 康熙雄

(首都医科大学附属北京天坛医院检验科，北京 100050)

目前筛查是预防和控制宫颈癌的主要手段。随着人乳头瘤病毒(HPV)－DNA检查的普及，年轻患者已逐步实现早期发现，早期治疗〔1〕。本研究对绝经期妇女进行脱落细胞学及人乳头瘤病毒基因型别进行分析，探讨绝经期妇女HPV感染情况及与宫颈病变的相关性。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2009年1～12月我院妇科门诊就诊的绝经妇女480人，年龄45～82〔平均(56±6.5)〕岁。采样使用专用的HPV采样刷采集宫颈脱落细胞标本，采样前3 d内无阴道用药史，采样前1 d起禁性生活。以专用细胞保存液保存标本，4℃冰箱保存，1 w内检测。

1.2 仪器与试剂 用凯普导流杂交技术及其配套试剂(潮州凯普生物化学有限公司提供)，对21种常见的HPV基因型进行分型检测，包括 13 种高危型 HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)，5 种低危型 HPV(6、11、42、43、44)和 3 种中国人常见的基因型HPV(53、66和CP8304)。

1.3 实验过程 样本DNA提取;PCR扩增;导流杂交;酶标显色;结果判断，根据芯片上HPV基因型分布相应位点判断为何种基因型。

1.4 统计学方法 应用SPSS11.5统计软件;计数资料以百分比表示，率的显著性检验采用χ2检验。

2 结果

2.1 检出阳性率的危险分型 480名绝经妇女HPV总检出阳性率为19.79%(95/480)，其中高危型检出率为19.17%(92/480)，低危型检出率为1.88%(9/480)。(多重感染重复计数)21种基因型中共检出18种，有3种基因型未检出，分别是高危型HPV-35和低危型HPV-42、HPV-43。HPV型别检出率由高至低依次为HPV-16占4.79%(23/480)，HPV-52型占3.75%(18/480)，HPV-58型占2.71%(13/480)，HPV-53型占2.08%(10/480)，HPV-68型占 1.88%(9/480)，HPV-33型占 1.88%(9/480)，HPV-11型占 1.46%(7/480)，HPV-18型占 1.46(7/480)，HPV-cp8304型占 1.46%(7/480)，HPV-66 型占 1.25%(6/480)，HPV-31 型占 0.83%(4/480)，HPV-56型占 0.83%(4/480)，HPV-59型占 0.83%(4/480)，HPV-39型占 0.63%(3/480)，HPV-6型占0.42%(2/480)，HPV-51型占0.42%(2/480)，HPV-44型占 0.21%(1/480)，HPV-45型占 0.21%(1/480)。

2.2 阳性样本与感染样本的分型关系 在95例阳性样本中，多重感染样本为26例，占27.37%(26/95)，单一低危型感染3例，占阳性样本比例为3.16%(3/95)，低危和高危混合感染6例，占阳性样本比例为6.32%(6/95)，单一高危型感染66例，占阳性样本比例为69.47%(66/95)，高危型多重感染20例，占阳性样本比例为20.05%(20/95)。

2.3 阳性样本年龄分组状况 阳性样本按年龄分为4个组，分别为≤50岁组、51～60岁组、61～70岁组和＞70岁组。各年龄组阳性例数及低危型、高危型、单一感染、多重感染的例数和比例的阳性率差异不显著(χ2=1.482，P=0.686)。见表1。

表1 各年龄组HPV感染阳性例数及百分比〔n(%)〕

2.4 不同生殖道疾病(宫颈炎性病变、宫颈上皮内瘤样病变、宫颈癌)与体检对照组比较 除宫颈炎性病变组外其余均有统计学差异(P＜0.05)。见表2。

表2 不同生殖系统疾病与体检对照组HPV感染情况

3 讨论

有研究表明，宫颈癌发病高峰年龄为35～39岁和60～64岁〔2〕，而HPV感染能否发展到宫颈上皮内高度病变和癌症，主要取决于三个方面因素:病毒因素、宿主因素和环境协同因素。考虑到病毒因素，最重要的就是感染的HPV型号。大量流行病学资料结合实验室的证据已经确定了HPV与宫颈癌有明显的相关性(r=3.6～61.6)〔3〕，在宫颈低度病变的妇女中，高危型HPV感染阳性的妇女宫颈病变进展的危险性高于低危型HPV感染或HPV阴性的妇女，尤其是与HPV-16型呈强相关性。在本文检出的病例中，高危16型的检出率也是最高的，宫颈上皮内瘤样病变与宫颈癌组同体检组的HPV检出率是有显著性差异的〔4〕。

绝经期妇女有较高的HPV检出率(本研究为19.79%)，除了与其年龄段为宫颈癌高发期以外，还与自我保健意识与认知程度有很大的相关性。在国家宣传和两癌(乳腺癌和宫颈癌)筛查政策的出台，不少适龄女性均进行了宫颈癌的筛查，这对于宫颈癌的早期诊断和治疗大有裨益。本研究检测例数也相对偏少，但是阳性检出率却不低。绝经期妇女大部分为50岁以上妇女，这个年龄段的妇女知识水平有限，身体基础疾病较多，免疫功能较差，对宫颈癌的筛查和自我保健意识较为薄弱。因此，对于绝经期的这部分妇女，有必要多渠道的加强宣传宫颈癌的防治知识，增强对宫颈癌防治的意识及加强宫颈癌的普查力度。

1 Parkin DM，Bray F，Ferlay J，et al.Estimating the world cancer burden:Globocan 2000〔J〕.Int J Cancer，2001;94(2):153-6.

2 Zhang WY，Xue YZ，Chen M，et al.Prevalence of high-risk human papillomavirus infection in different cervical lesion among organized health-examination women in Shanghai，Cnina〔J〕.Chin Med J，2008;121(16):1578-82.

3 Cai HB，Ding XH，Chen CC.Prevalence of single and multiple human Papillomavirus types in cervical cancer and precursor lesions in Hubei，China〔J〕.Oncology，2009;76:157-61.

4 Ho CM，Chien TY，Huang SH，et al.Integrated human papillomavirus types 52 and 58 are infrequently found in cervical cancer，and high viral loads predict risk of cervical cancer〔J〕.Gynecol Oncol，2006;102(1):54-60.