膀胱癌组织中微小染色体维持蛋白2的表达变化及其意义

曾健文，莫鉴锋，胡国洪，吴小伟，周理林

(清远市人民医院，广东清远511500)

近期研究发现［1］，微小染色体维持蛋白 2(MCM2)是一种细胞增殖相关因子，是DNA复制许可因子，可以反映肿瘤细胞的增殖能力，是多种肿瘤预后不良的预测指标。现收集我院2005年8月～2010年7月确诊的53例膀胱癌组织，采用免疫组化法检测其MCM2的表达变化，分析MCM2与膀胱癌临床病理参数的关系及其对膀胱癌预后的评估价值。

1 资料与方法

1．1 临床资料 53例膀胱癌手术治疗患者中，男38例，女15例;年龄35～80(62．05±10．71)岁。术前均无放、化疗等抗肿瘤治疗病史。TNM分期:T1期31例、T2期15例、T3期5例、T4期2例;N035例、N115例、N2+N33例;有4例出现远处转移，其中骨转移2例，肺转移1例，肠道转移1例。按照膀胱癌恶性程度分级系统［2］:G1级28例，G2级20例，G3级5例。53例术后随访 1～6 a，平均2．5 a。复发18 例，复发时间在术后 0．5 ～2 a，平均1．5 a。本组53例的膀胱癌组织均为我院病理科存档标本，常规石蜡包埋，厚5 μm切片。另取15例正常膀胱黏膜组织作为正常对照。

1．2 MCM2检测方法 ①主要试剂:羊抗人MCM2单克隆抗体(美国Santa Cruz Biotechnology公司)，免疫组化SP-9003试剂盒。②染色方法:所有标本均采用免疫组化SP法染色，按试剂盒说明书操作，以人类乳腺癌组织的核酸染色作为阳性对照，PBS替代一抗作为阴性对照。③染色结果判定:细胞核内出现棕黄色或棕褐色颗粒者为MCM2阳性细胞。采用双盲法观察，高倍镜下(×200)随机选择5个视野，用高清晰度图像采集处理系统(IPP软件)分析阳性信号的表达和分布，并以累积分光密度(IOD)为参数进行半定量检测分析;在显微镜下随机选择5个视野，计数每个视野阳性细胞数百分比，取其均值。表达结果采用半定量评估:阳性细胞＜10%为阴性(－)、10% ～15%为弱阳性(+)、～50%为中阳性(++)、＞50%为强阳性(+++);+～+++判为阳性。

1．3 统计学方法 采用SPSS17．0统计软件，数据以±s表示，用F检验和两两比较的t检验进行分析。α =0．05。

2 结果

2．1 膀胱癌、膀胱正常黏膜组织中MCM2的表达结果 膀胱癌组织中MCM2 IOD值为5 653．45±1 253．64，明显高于正常膀胱黏膜组织中的89．44±35．12(P ＜0．01);其中 G3级、术后复发的膀胱癌组织中MCM2表达为+++，G1、G2级者为+。

2．2 不同临床病理参数的膀胱癌组织中MCM2的表达变化 不同年龄、性别及肿瘤部位的膀胱癌组织中MCM2 IOD值差异无统计学意义(P均＞0．05);不同分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移、远处转移、复发的膀胱癌组织中MCM2 IOD值差异有统计学意义(P均＜0．05)。详见表1。

3 讨论

膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一，传统诊断膀胱癌的方法是膀胱镜检及组织活检，超声和CT等可作为辅助检查，但存在早期诊断敏感性不高、易漏诊的缺点;尿脱落细胞学检查也有一定的假阳性和假阴性。寻找有效的肿瘤分子标志物是肿瘤研究的方向之一。

表1 不同临床病理特征的膀胱癌组织中MCM2的IOD值变化(¯x ±s)

MCM是近期研究发现的一种细胞增殖相关因子，是DNA复制的许可因子，可作为增殖细胞的特殊标志物。MCM是由6个亚基构成的六聚体环状蛋白质，由细胞分裂周期蛋白(CDC)基因编码。MCM2是其中1个亚型。MCM只在处于增殖活动周期的细胞内表达，提示MCM可作为增殖细胞的特殊标志物。有学者发现MCM表达与肿瘤细胞分化程度相关，细胞分化程度越低，MCM表达越明显［1］。

本研究结果显示，53例膀胱癌组织中MCM2均呈阳性表达(阳性率为100%)，且膀胱癌组织中MCM2表达明显上调;分化程度低、复发的膀胱癌呈强阳性表达。表明膀胱癌的发生与MCM2高表达密切相关。这与Kruger等［3］用单克隆MCM2抗体对膀胱癌手术切除标本进行蛋白芯片微陈列分析所得结果近似。国内冯建华等［5］也发现MCM2在膀胱移行细胞癌组织中表达增高。提示MCM2可能在膀胱癌的发展过程中起到重要作用，并与膀胱癌的复发、预后有关。

本研究结果也显示，不同分化程度、浸润深度和有无淋巴结转移、远处转移的膀胱癌组织中MCM2 IOD值不同(P均＜0．05)，分化程度越低、浸润越深及有淋巴结、远处转移的膀胱癌组织中MCM2表达越强。由此推断MCM2表达水平与膀胱癌的恶性程度有关，提示MCM2的高表达主要是表现在膀胱癌发生发展过程中的进展期;且与膀胱癌侵袭转移潜能有关。MCM2有可能成为反映膀胱癌侵袭转移的生物学标志之一。在本研究中我们还发现，复发的膀胱癌组织中MCM2表达明显增强，表明MCM2高表达和肿瘤的复发有关。有学者发现［5，6］，在 Ta或T1期膀胱肿瘤中，MCM2有预测肿瘤复发的价值，且预测肿瘤复发较CK20、Ki-67及组织学分级有更高的准确性。因此我们认为，MCM2可以作为预测膀胱癌复发和预后的指标。

总之，膀胱癌组织中MCM2的表达明显上调，并能较好地反映癌细胞增殖情况。检测MCM2有助于对膀胱癌进行筛选、诊断及预后评估，并指导临床治疗。

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［3］Kruger S，Thorns C，Stoker W，et al．Prognostic value of MCM2 immuoreactivity in stage T1transition cell carcinoma of the bladder［J］．Eur Urol，2003，43(2):138-145．

［4］冯建华，方玉林，邝世航，等．MCM2在膀胱移性细胞癌中的表达及其预后意义［J］．赣南医学院报，2006，26(2):112-114．

［5］ Dudderidge TJ，Stoeber K，Loddom M，et al．MCM2 and Ki-67 difine proferative state and prognostic markers in renal cell carcinoma［J］．Clin Cancer Res，2005，11(7):2510-2517．

［6］Burger M，Denzinger S，Hartmann A，et al．MCM2 predicts recurrence hazard in stage Ta/T1bladder cancer more accurately than CK20，Ki-67 and histological grade［J］．Br J Cancer，2007，96(11):1711-1715．