王家伟,戴习林,谢 剑,臧维玲,丁福江
(1.上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306;2.上海申漕特种水产开发公司,上海 201376)
试验于2008年3~5月在上海申漕特种水产开发公司进行。试验用幼体为购自厦门的凡纳滨对虾无节幼体(子一代,F1),在长方形 51×61×38 cm3塑料箱(118L)内培养。试验用水采用浓缩海水与天然河口水调配成盐度为28.6的育苗海水,过滤、消毒后使用。
试验用饵料为牟氏角毛藻(Chaetoceros mulleri,CM)、绿色巴夫藻(Pavlova vilids,PV)、湛江叉鞭金藻(Dircaraleria galbana,DG),云微藻(Chlorophyta sp,Cs)、褶皱臂尾轮虫(Brachionus plicatilis,BP)、蒙古裸腹溞(MM),以及购自市场的卤虫(Aitemia salina,AS)卵、双色虾片、螺旋藻粉、食母生、B.P粉(一种微囊饲料)和对虾人工配合饲料(FD)。
单胞藻用f/2配方配制的营养液培养;采用酵母(YE)为主、单胞藻为辅,交替饲养BP和MM,分别在投喂幼体前8 h和12 h用单胞藻营养强化。
试验设计6种饵料搭配,每种2个重复,每组对虾无节幼体(N)密度为4~5万尾/m3。以全FD为对照组,试验用饵料种类和搭配列于表1。
表1 各试验组饵料投喂种类和密度
试验期间,连续充气,水温30±0.2℃,光照强度3 000~10 000 Lx。每日测定水化学指标和饵料密度,自M1开始每日换水20%,上午每个水槽随机采样5点估算幼体数,记录幼体发育状况。
总脂抽提参照Folch法[7],采用14%的三氟化硼-甲醇(v/v)进行甲脂化,仪器为Agilent-6890气相色谱。水质测定方法:CODMn采用碱性高锰酸钾法,NO2--N采用重氮偶氮比色法,NO3--N采用锌镉还原-重氮偶氮比色法[8],pHB-4型 pH计测定pH值。
2.1.1 单胞藻脂肪酸含量 单胞藻脂肪酸相对含量测定结果列于表2。由表2知,PV的n-3HUFA和∑EFA相对含量最高分别为51.7%和31.2%,CM、DG次之,Cs最低,分别仅为PV的1/6和1/2。C18∶3n-3仅在PV和CM中检出。EPA在PV和CM中相对含量高,分别为27.9%和23.8%,Cs中未检出。DG、PV的DHA相对含量都很高,分别为19.8%和12.6%,Cs较低为8.8%。
表2 单胞藻脂肪酸相对含量
2.1.2 营养强化轮虫的脂肪酸含量与组成 营养强化后的BP体内脂肪酸相对含量列于表3。由表3可知,BPCs体内∑EFA、n-3HUFA的相对含量最高,分别为17.4%与26%,次之为BPCM,分别是23.3%与17%。C18∶3n-3在5种藻液强化BP体内均未检出,DHA仅在BPDG体内未检出,其余3种必需脂肪酸均被检出。5种藻液强化BP体内EPA和DHA相对含量都存在较大差异,BPCs体内DHA和EPA含量最大分别为17.4%和8.6%,分别是BPDG的3倍和17倍。
供给情况:氮肥方面,尿素企业复产停产交替,总体以复产增产居多,企业整体开工率小幅上升至54%。磷肥方面,个别前期短期检修的企业陆续复产,二铵企业整体开工率升至66%。钾肥方面,盐湖基准产品60%粉晶到站价2200-2250元/吨,每日发运量200-300车;港口钾供应持续紧俏;边贸钾供应仍偏紧。复合肥方面,经销商拿货缓慢,部分企业因库存较多降低产量,各地环保压力不减,企业整体开工率下降至40%。
表3 单胞藻营养强化轮虫的肪酸相对含量
2.1.3 营养强化后蒙古裸腹溞的脂肪酸含量 单胞藻营养强化的MM的脂肪酸相对含量测定结果列于表4。由表4可见,MMDG和MMPV体内∑EFA的相对含量最高,分别为44.3%和42.4%,约为MMYE的2倍,而MMCs和MMMA体内∑EFA相对含量低于MMYE。MMPV体内EPA的相对含量最高为13.5%,是MMMA的4倍,MMDG虽未检到EPA,但DHA含量最高,为31.6%,分别是MMPV、MMCM、MMYE的 1.5、2、4 倍,而 MMCs和 MMMA未检出。所有组MM体内未检出C18∶3n-3,∑n-3HUFA含量呈现与∑EFA一样的规律。
表4 单胞藻营养强化蒙古裸腹溞脂肪酸相对含量
凡纳滨对虾仔虾和幼体各阶段存活率及发育情况分别列于表5和图1、图2。表5表明,N变态为Z1阶段(N→Z1),投喂Cs和混合藻的幼体存活率r最低,分别只有78.4%和65.8%,其它组r均在80%以上。Z1→Z2,CM、DG、CMF、PV 组是高 r组,Cs组最低为45.6%。
表5 凡纳滨对虾幼体、仔虾发育状况与存活率
由图 1可知,Z2→Z3,FD 组 r最高,达到94.6%,CM与CMF组次之,且三者间无明显差异,Cs、DG和PV组r最低,分别只有75.0%、71.2%和64.8%,且相互间无差异。Z3→M1,CM组r最高为93.4%,显著高于PV、CMF组的80.8%与78.1%,DG组最低为48.3%。
M1→P,幼体变态情况分别是r为90%组(CMF、PV 组)、80%组 (DG、CM 组)、70%组(MA、Cs、FD组)。P阶段,FD组r最低为49.8%,其余组均在90%以上。
由表5可发现,各实验组N变态为Z2与M变态为P速度一致,PV和Cs组Z2,2 d才发育至Z3,其余组仅1 d;CM组、CMF组与FD组Z3,3 d内全部变态为M1,而PV藻组和Cs组需5 d。
由图2可知,出苗率最高发生在CM藻与CMF组,PV组次之为26.2%,Cs与FD组最低,低于10%。
图1 凡纳滨对虾幼体各阶段的存活率
图2 凡纳滨对虾幼体各阶段的存活率
BP和MM是人工育苗中的重要生物饵料,但是酵母培养的BP和MM体内EPA和DHA含量很低,有资料报道酵母轮虫n-3HUFA、EPA和DHA的相对含量分别只有0.9%、0.7%和0.2%[4]。除MMDG 的 EPA 未检出外,MMCM、MMPV、MMCs体内∑EFA、n-3HUFA、EPA和 DHA含量都高于MMYE,营养强化的MM和相对应的藻类体内脂肪酸的组成和相对含量趋于一致,此与何志辉等[11]的研究结果一致,表明蒙古裸腹溞的生化组成明显受食物条件的控制。
同时试验所用4种藻类除BPDG的EPA含量没有提高外,BPCM、BPPV、BPCs体内 n-3HUFA、EPA 和DHA含量都明显高于BPYE;Cs中n-3HUFA、EPA含量最低,但BPCs中n-3HUFA、EPA含量最高,PV体内n-3HUFA、EPA含量最高,但其BPPV体内n-3HUFA、EPA含量却较低,营养强化的BP和相对应的藻类体内脂肪酸的组成和相对含量并不趋于一致,与陈炜[12]的研究结果相似,表明轮虫的脂肪酸组成明显受饵料影响,但又不完全取决于饵料。因此,采用合适的单胞藻强化BP和MM,可显著提高它们体内的HUFA,而且MM受食物的影响要大于褶皱臂尾轮虫,生产过程中,可选择HUFA含量高的单胞藻强化MM,而对于BP并非如此。
虾蟹类中,机体吸收的部分n-3HUFA尤其是EPA和DHA能用于合成磷脂,构成磷脂双层膜,磷脂能促进胆固醇 (合成蜕皮激素的前体物质)的吸收和利用,n-3HUFA间接影响了虾蟹类幼体的蜕皮与提高幼体变态和存活率[13]。但大部分海水虾蟹类却不能合成EPA和DHA,只能从食物中获得[14]。Z1→Z2,r最低组是n-3HUFA含量最低的Cs组,甚至低于FD组;BPDG体内n-3HUFA含量最低,尤其是EPA含量仅占总脂含量的0.5%,对应的Z2→M阶段,投喂BPDG组r最低,幼体发育速度较慢。可见饵料中n-3HUFA的含量显著影响幼体发育,BPCs、BPDG不能完全满足幼体发育的需要。
比较藻类脂肪酸含量发现,CM含有全部的对虾5种必需不饱和脂肪酸,而其它藻类体内最多检到4种,这可能是CM组和CMF组的各阶段幼体与仔虾r高,变态速率快的原因之一。梁华芳等[15]也发现CM投喂凡纳滨对虾效果要好于PV、球等鞭金藻、中肋骨条藻。
对于Cs组,又发现即使在Z2→M阶段投喂HUFA最高的BPCs,幼体的存活率仍较低,且Z2、Z3生长缓慢,2 d才全部变态为Z3,5 d全部变态为M1。此可能是Z1阶段幼体饵料HUFA含量低,进而影响Z2→M阶段幼体发育,这与Legger等[16]发现蓝对虾早期幼体摄取的HUFA对后期幼体的营养状况有明显影响的结论一致。
BPMA与MMMA体内HUFA均最低,且均不含DHA,MA组的Z1→M的幼体变态率均较低,Z3发育缓慢,并没有体现出MA营养互补,增加强化效果,促进幼体发育的优势。这可能由于几种藻混合使用产生“毒性”作用,曹淑莉等[17]也作了类似的报道。
有资料表明卤虫HUFA含量低,本次试验的仔虾培育阶段,AS与CM或强化MM搭配饲养的仔虾r是AS搭配FD的2倍,这表明AS与CM或强化MM都能形成营养互补,提高仔虾存活率。
投喂合适的单胞藻、BP、MM等活饵料的虾苗出苗率优于FD组,分析两者育苗效果不同的原因,首先是活饵料均匀散布于水体中,对虾幼体可一直摄取,而配合饲料易沉底,过量投喂也难以提高摄食率;其次是配合饲料易败坏水质,试验中投喂过FD的CMF组与FD组水体中弧菌含量和CODMn 分别为 440、400、5.54、5.90 mg/L,明显高于未投FD组,而活饵料不仅对水质污染小,单胞藻还可净化水体,做动物性活饵料的营养强化饲料。
综上所述,CM或Cs可用来强化BP,CM或PV可用来强化MM,CM、PV和DG可作为凡纳滨对虾Z1的开口饵料,后阶段幼体培育阶段可用来调节水质,并作辅助饵料,但不宜采用两种或两种以上的MA强化或投喂。可用强化BP培育凡纳滨对虾Z2→M,可交替使用强化蒙古裸腹溞与卤虫无节幼体培育仔虾。在生产中可采用BPCM或BPCs、AS、MMPV的饵料搭配培育凡纳滨对虾虾苗。
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