桑寄生、雷公藤醇提物对大鼠胃黏膜环氧化酶的影响

徐 清，龙启才，邱建波

1.广东省食品药品职业技术学校，广东广州 510663；2.中山大学药学院临床药理研究所，广东广州 510089

桑寄生、雷公藤是治疗风湿的常用中药，分别属于袪风湿强筋骨药和祛风湿散寒药。桑寄生具有补肝肾、强筋骨、祛风湿、安胎的功效，临床上可用于类风湿性关节炎和骨关节炎的治疗[1]。雷公藤具有祛风除湿、消肿止痛、通经活络、清热解毒的功效，其单用或入复方可治疗类风湿性关节炎，疗效确切[2]。前列腺素是参与炎症的主要介质，故作为前列腺素合成和起始步骤关键酶的环氧化酶（COX）对于关节炎的发病和发展具有重要的作用和影响[3]。本实验通过桑寄生、雷公藤在大鼠体内对胃黏膜环氧化酶活性的影响来探讨其祛风湿可能的作用机制，给临床组方选药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

药材：桑寄生和雷公藤购于广州市药材公司。经鉴定分别为桑寄生科植物桑寄生（Taxillus chinensis DC.Danser）的干燥带叶茎枝，卫矛科植物雷公藤（Tripterygium wilfordii.Hook.f.）的根。经粉碎后，用索氏提取器提取1 h（提取前用95%乙醇室温密闭浸泡12 h），所得提取液减压蒸干，用0.5%羧甲基纤维素钠分散减压蒸干物，终浓度为每毫升含1 g生药，使用前摇匀。

试剂和仪器：吲哚美辛标准品（中国药品与生物制品检定所）；纯度为99.6%的塞来昔布（Celecoxib）（辉瑞制药有限公司）；6-酮-前列腺素 F1α（6-keto-PGF1α）放免试剂盒（解放军总医院东亚放免研究所）；其他试剂为国产分析纯。放免γ计数器（中国科学院上海核研究所日环仪器厂）。

动物：SD大鼠，体重180～220 g，雄性，购自中山大学实验动物中心。

1.2 方法

参照文献[4]方法，将30只雄性SD大鼠随机分为10组，每组各3只。其中5组直接给药，另外5组则先用乙醇灌胃造成胃黏膜损伤后再给予药物，直接给药的5组及造模型后再给药的5组包括对照组、吲哚美辛组、塞来昔布组、桑寄生组、雷公藤组，所给的对照或药物依次为0.5%羧甲基纤维素钠、0.2%吲哚美辛、0.6%塞来昔布、桑寄生（1 g/ml）和雷公藤（1 g/ml）。直接给药的5组，禁食20 h、禁水1 h后开始给药，给药剂量为5 ml/kg。先用乙醇灌胃的5组，则禁食20 h、禁水1 h后，用无水乙醇1 ml灌胃，1 h后再分别给予相同剂量的对照或药物。给药4 h后，将大鼠用乙醚麻醉，打开腹腔，取出胃并切开，翻开大鼠胃黏膜表面，用冰生理盐水漂洗后，肉眼观察大鼠胃黏膜表面的损伤程度，并按文献[5]方法计算溃疡指数，即：条索状损伤长宽均小于1 mm者计0.5分；若长度大于1 mm，则测量其长度，每毫米计1分；如果宽度也大于1 mm，则按长和宽的乘积计分。将计分相加即可得到该大鼠的溃疡指数。同时立即于大鼠胃体后壁相同部位取组织1块（重量约为60 mg），迅速用4℃生理盐水制成组织匀浆（浓度20 mg/ml），-20℃冻存备用。测定时，将冻存的组织匀浆4℃解冻，在3 500 r/min的转速下离心15 min，取上清液测6-Keto-PGF1α的放射活性（按试剂盒说明书操作）。

1.3 统计学处理

采用SPSS 11.5 for Windows统计软件进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，采用 t检验，以 P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

结果显示，未给乙醇时，桑寄生组和雷公藤组灌胃后不损伤正常大鼠胃黏膜，也不抑制6-Keto-PGF1α的生成，这与塞来昔布组的作用相似，但吲哚美辛组的大鼠胃黏膜表面可见点状和条索状糜烂，溃疡指数明显增加（P＜0.05），对6-Keto-PGF1α的生成也有明显的抑制（P＜0.01）。给1 ml乙醇灌胃后，对照组大鼠胃黏膜表面可见明显损伤：水肿、糜烂、溃疡等，部分大鼠的胃腔内还可见少许凝血块，但未见穿孔，病变的部位主要在胃体和胃底，与未给乙醇对照组比较，溃疡指数及6-Keto-PGF1α明显升高 （P＜0.05）。给桑寄生和雷公藤后，胃溃疡损伤程度明显增加（P＜0.05），对 6-Keto-PGF1α 生成的抑制作用与给乙醇对照组比较，差异也具有统计学意义（P＜0.05），这与塞来昔布组和吲哚美辛组的作用相似。结果见表1。

3 讨论

前列腺素（PGs）是一种与炎症紧密相关的重要介质，其合成的限速酶是环氧化酶（COX）。现在普遍认为COX有两种：COX-1和COX-2，COX-1属于结构性酶，在正常人体内即存在，主要作用为维持身体的正常功能；而COX-2则是一种诱导酶，参与炎症反应、肿瘤形成等，被抑制后可以发挥抗炎作用[6]。正常大鼠口服吲哚美辛（非选择性环氧化酶抑制剂）后，强烈抑制血小板血栓素 B2（TXB2）的释放及6-Keto-PGF1α的生成，并且损伤胃黏膜，但口服罗非昔布（选择性环氧化酶-2抑制剂）不会引起胃黏膜损伤[7]。然而更多的证据证明，COX不仅在疼痛和炎症等病理条件中起作用，同时也有维持正常胃黏膜生理功能的作用，当胃黏膜受损伤时，可以观察到COX-2表达上调，通过合成前列腺素参与病变的修复过程[8]。选择性COX-2抑制剂能抑制COX-2的活性，从而削弱胃黏膜的抵抗力，加速胃黏膜的损伤[9]。在本实验中，正常大鼠给予吲哚美辛灌胃后能引起胃黏膜损伤，6-Keto-PGF1α的生成也明显抑制，而塞来昔布与对照组比较，差异则无统计学意义；但如果先用无水乙醇灌胃造成大鼠胃黏膜后，再给予相应药物，则塞来昔布和吲哚美辛都能加重胃黏膜损伤，也能抑制6-Keto-PGF1α的生成。

表1 桑寄生、雷公藤对大鼠胃黏膜环氧化酶的影响（x±s，n=3）

桑寄生、雷公藤作为常用复方中的一味，用于风湿性或类风湿性关节炎的治疗。本实验表明，正常大鼠灌胃桑寄生和雷公藤的乙醇提物后，不抑制大鼠胃黏膜6-Keto-PGF1α的生成，也不损伤胃黏膜，但如果先用乙醇灌胃，造成大鼠的胃黏膜损伤后，会明显抑制6-Keto-PGF1α的生成，且会加重已有的胃损伤。提示桑寄生、雷公藤醇提物能抑制乙醇诱导大鼠胃黏膜中环氧化酶的活性，但对正常大鼠胃黏膜的环氧化酶无影响。因此可以推测，在临床组方选药时，因其不影响正常的胃黏膜，所以正常人可以广泛使用，但会加重已有的胃损伤，所以对患有胃溃疡的患者，选药时则应慎重。

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