老年高血压病患者心房颤动易感性与C-反应蛋白-717A/G多态性的关系

李 静,高淑萍,石桂良,姜敏辉,邓新桃,朱健华,潘 闽*

(1.南通大学附属医院 老年医学科,江苏 南通226001;2.宁夏人民医院 心内科;3.兴化市人民医院心内科;4.南通大学附属医院心内科)

心房颤动(atrial fibrillation)是临床最常见的心律失常。与窦性心律相比,房颤患者的卒中风险增加6倍,死亡风险增加2倍[1]。高血压病是与房颤最相关的心血管疾病[2]。新近的研究显示,炎症可能参与了房颤的发生发展,房颤患者炎性标记物水平显著升高,而应用抗炎药物如他汀等可明显降低房颤的方生[3]。本文研究 C-反应蛋白(CRP)-717A/G多态性(rs2794521)与老年高血压病患者心房颤动的相关性。

1 对象与方法

1.1 一般资料

病例选自南通大学附属医院老年医学科及心内科门诊及住院的老年高血压病患者169例。高血压病的诊断标准按照JNC-7。分为房颤组75例,房颤的诊断按照2006年ACC/A HA/ECS制定统一的房颤命名和分类方法;对照组94例,经详细的询问病史、体格检查、心电图检测证实既往无房颤发作史的窦性心律者。并排除并发感染或非感染性炎症性疾病、严重肝肾功能不全、肿瘤或免疫系统疾病、急性冠状动脉综合征等其它引起CRP升高者。入选者均为无血缘关系的汉族人。2组的一般资料见表1。房颤组hs-CRP水平及左心房直径显著高于对照组。

表1 两组一般资料比较

1.2 研究方法

1.2.1 CRP-717A/G多态性检测 取EDTA-Na2抗凝外周静脉血,RBC裂解液裂解后分离得到白细胞,改良KI法抽提DNA。PCR引物参照文献[4]由上海生工公司合成。上、下游引物序列分别为:5′-GACTCCTGCCTGAAGCTTTACATA-3′和 5′-ATACATGTGCCATGCTGGTGTG-3′。PCR 反应体系为 50 μ l,含模板DNA 100 ng,dNTPS各0.2 mmol/L,引物各0.5 pmol/L,10 ×buffer 5 μ l,MgCl21.5 mmol/L,Taq DNA聚合酶2 U。经94℃5 min预变性后,94℃60 s,62℃30 s,72℃45 s共30个循环,最后 72℃延伸8分钟。限制性酶切反应在30 μ l体系中进行,含PCR反应产物10 μ l,Bsh1236Ⅰ限制性内切酶2 U,10×buffer 3.0 μ l,37℃酶切16 h。3%琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物,溴乙锭染色后紫外灯下观察结果。

1.2.2 生化指标检测 血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)及甘油三酯(TG)的检测用标准酶比色法(Randox公司),血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)用乳胶凝集法(华拓公司)。检测在日立7600全自动生化分析仪完成。

1.3 统计学分析

基因频率用基因计数法计算,研究对象与Hardy-Weinberg平衡的符合程度用 χ2检验,组间基因型及等位基因频率比较用 χ2检验;不同基因型间均数比较用t检验。hs-CRP呈偏态分布,将其转化为对数后行t检验。数据处理由STATA8.0计算机软件完成。

2 结果

2.1 两组基因型及等位基因频率

两组基因型及等位基因频率分布见表2。经 χ2检验,均符合 Hardy-Weinberg平衡(房颤组 χ2=0.001 8,P=0.966 4;对照组 χ2=0.288 9,P=0.590 9)。由于2组GG基因型频率均较低(房颤组1例,对照组3例),故将GA及GG合为一组。房颤组AA基因型频率显著高于对照组(χ2=5.005 6,P=0.025 3),A等位基因频率也显著高于对照组(χ2=4.828 2,P=0.028 0)。

表2 两组基因型及等位基因频率

2.2 两组不同基因型临床参数比较

两组不同基因型临床参数比较见表3。无论是房颤组还是对照组,均未发现AA/GA+GG基因型在年龄、性别、血压水平、血脂参数以及射血分数间存在显著差异。同样,2组也均未发现基因型对hs-CRP、左心房直径有影响(P均＞0.05)。

表3 两组不同基因型临床参数比较

3 讨论

近年来的研究显示,房颤存在着家族聚集性及易感性。家族中有房颤者,其他成员发展为房颤的风险增加1.8倍[5]。钾离子通道的变异与家族性房颤相关,但在散发性房颤患者中,仅少部分与其相关[6]。此外,虽然既往研究识别了多种房颤的危险因素,但仍有众多具有这些危险因素的患者并不发展为房颤[7]。这些均表明,遗传因素参与了房颤的发生发展。

高血压病是与房颤最相关的心血管疾病[2],然而,其确切机制目前知之甚少。共入选5806例65岁以上老年人,随访(6.9±1.6)年的大规模、前瞻性队列研究发现:基线CRP水平可预测房颤发生的危险性[8]。本文也发现,房颤组患者hs-CRP水平显著高于对照组。两组的基因型及等位基因比较发现,房颤组AA基因型及A等位基因频率也显著高于对照组。提示hs-CRP水平及A等位基因与老年高血压病患者房颤发生相关。

CRP基因-717A/G多态位点位于CRP基因启动区,因而我们进一步研究了该多态位点与hs-CRP水平的关系。但无论是房颤组还是对照组,均未发现-717A/G多态位点与hs-CRP水平相关。这一结果与既往的一些研究一致[4,9]。虽然有研究显示,遗传因素对血清CRP水平发挥了35%-40%的作用[10],但CRP基因多态性与血清CRP水平之间关系的研究结果并不一致[4,11]。其原因可能与年龄、性别、吸烟、临床治疗情况等混淆因子弱化了CRP基因的表型作用有关,也可能与多数研究样本量太小有关。此外,其它一些炎性因子如白细胞介素-6基因启动区的多态位点也可影响血清CRP水平[12]。

本文结果表明,老年高血压病合并房颤患者hs-CRP水平显著升高,CRP-717 A等位基因与房颤易感性相关。然而,这一结论尚需在不同种族及大样本人群研究中进一步确认。CRP基因-717A/G多态性对房颤患者炎症状态作用的确切机制尚需进一步研究。

[1]郑金国,潘 闽.心房颤动与炎症及RAS关系的研究进展[J].现代生物医学进展,2009,4:749.

[2]Lau DH,Mackenzie L,Kelly DJ,et al.Hypertension and atrial fibrillation:evidence of progressive atrial remodeling with electrostructural correlate in a conscious chronically instrumented ovine model[J].Heart Rhythm,2010,7(9):1282.

[3]PanM,Zhu JH,Jiang WP,et al.Inflammation:a possible pathogenic link to atrial fibrillation[J].Med Hypotheses,2006,67(6):1305.

[4]Chen J,Zhao J,Huang J,et al.-717A＞G polymorphism of human C-reactive protein gene associated with coronary heart disease in ethnic Han Chinese:the Beijing atherosclerosis study[J].J Mol Med,2005,83(1):72.

[5]ArnarDO,Thorvaldsson S,Manolio TA,et al.Familial aggregation of atrial fibrillation in Iceland[J].Eur Heart J,2006,27(6):708.

[6]Yang Y,Xia M,Jin Q,et al.Identification of a KCNE2 gain-of-function mutation in patients with familial atrial fibrillation[J].Am J Hum Genet,2004,75(5):899.

[7]BenjaminEJ,Rice KM,Arking DE,et al.Variants in ZFHX3 are associated with atrial fibrillation in individuals of European ancestry[J].Nat Genet,2009,41(8):879.

[8]Toutouzas K,Synetos A,Drakopoulou M,et al.The role of inflammation in atrial fibrillation:a myth or a fact[J].Am J Med Sci,2009,338(6):494.

[9]Schaumberg DA,Christen WG,Kozlowski P,et al.A prospective assessment of the Y402H variant in complement factorH,genetic variants in C-reactive protein,and risk of age-related macular degeneration[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2006,47(6):2336.

[10]Blaschke F,Bruemmer D,Yin F,et al.C-reactive protein induces apoptosis in human coronary vascular smooth muscle cells[J].Circulation,2004,110(5):579.

[11]SheuWH,Chen YD,Yu CY,et al.C-reactive protein gene polymorphism 1009A＞G is associated with serum CRP levels in Chinese men:a TCVGHAGE study[J].Clin Chim Acta,2007,382(1-2):117.

[12]Pan M,Gao SP,Jiang MH,et al.Interleukin6 promoter polymorphisms in normal han chinese population:frequencies and effects on inflammatory markers[J].J Investig Med,2011,59(2):272.