柴胡桂枝固体制剂的黄芩苷、芍药苷的含量测定

孙忠学 董春梅

（黑龙江葵花药业股份有限公司，黑龙江 哈尔滨 150078）

1.1 实验仪器与药品

Agilent 1100液相色谱仪（四元泵，二极管阵列检测器）；电热恒温水浴锅(天津市泰斯特有限公司)；R2003KE旋转蒸发器（上海申胜科技有限公司）；电子天平 (Mettler instrument Corp)；101-2型电热恒温鼓风干燥箱（上海市试验仪器厂）；GT-350W型超声波提取器(济宁科特超声电子有限公司）；硅胶G薄层板（中国海洋化工厂生产）

1.1.1 实验仪器

1.1.2 药品与试剂

柴胡皂苷a对照品（中国药品生物制品检定所，批号110777-200406）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所 715-200111）；黄芩素对照品（中国药品生物制品检定所111595-200604）；汉黄芩素对照品（中国药品生物制品检定所 1514-200202）；中性氧化铝、三氯甲烷、正丁醇、氨试液、甲醇、乙醚、硫酸、乙醇均为分析纯、水为蒸馏水。

1.2 含量测定

1.2.1 黄芩苷的含量测定

1.2.1.1 色谱条件

色谱柱：YMC-Pack ODS-A(150×4.6mm ID)；流动相：甲醇-水-磷酸（47:53:0.2）；检测波长：280nm

1.2.1.2 供试品溶液制备

称取冻干粉末0.05g，加50%的甲醇于10ml容量瓶中，超声30min，补充50%的甲醇于刻度，用0.45μl的滤膜过滤，作为供试品溶液。

1.2.1.3 对照品溶液制备

精密称取黄芩苷对照品0.3mg加50ml甲醇溶解制成每1ml含0.06mg的溶液，即得。

1.2.1.4 空白试验

按处方比例及制剂工艺制备缺黄芩阴性对照药，按“1.4.1.2供试品溶液制备”项下方法制备缺黄芩阴性对照品溶液。

精密吸取供试品溶液、对照品溶液和缺黄芩阴性对照品溶液各10μl，进样测定，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相同的保留时间内出现相对应的色谱峰，而阴性对照品溶液则在相对应的保留时间未见相对应的吸收峰。有关对照品、供试品和缺黄芩阴性对照品的色谱图和光谱图见附图1-5(a～c)。

1.2.1.5 稳定性实验

取本品，按上述制备方法制备供试品溶液，分别放置 0、2、4、6、8 小时，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定其含量，结果黄芩苷的平均峰面积为 2488.56，RSD为0.22%。结果表明，供试品溶液在8小时内基本稳定，可满足测定要求。

1.2.1.6 精密度实验

精密吸取同一对照品溶液10μl，重复进样5次，测定黄芩苷的峰面积，结果黄芩苷的平均峰面积为1888.2，RSD为0.58%，说明仪器精密度较好。

1.2.2 芍药苷的含量测定

1.2.2.1 色谱条件

色谱柱：YMC-Pack ODS-A(150×4.6mm ID)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14:86）；检测波长为230nm

1.2.2.2 供试品溶液制备

称取冻干粉末0.1g，加5稀乙醇于10ml容量瓶中，超声30min，补充稀乙醇于刻度，用0.45μl的滤膜滤过，作为供试品溶液。

1.2.2.3 对照品溶液制备

精密称取芍药苷对照品0.7mg加10ml甲醇溶解制成每1ml含0.07mg的溶液即得。

1.2.2.4 空白实验

阴性对照品溶液的制备：按处方比例及制剂工艺制备缺白芍的阴性对照药，按“1.2.2.2供试品溶液制备”项下方法制备缺白芍阴性对照品溶液。

精密吸取供试品溶液、对照品溶液和缺白芍阴性对照品溶液各10μl，进样测定，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相同的保留时间内出现相对应的色谱峰，而阴性对照品溶液则在相对应的保留时间未见相对应的吸收峰。有关对照品、供试品和缺白芍阴性对照品的色谱图和光谱图见附图1-11（a～c）。

1.2.2.5 线性关系考察

精密吸取芍药苷对照品溶液（浓度为0.50mg/ml）0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分别置于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，再分别精密吸取10μl，分别注入液相色谱仪，按上述条件测定白芍的吸收峰峰面积，以进样量为横坐标（X）以峰面积积分值为纵坐标（Y），进行回归处理，结果黄芩苷在0.02～0.10mg范围内，进样量与峰面积积分值之间线性关系良好，回归方程为 Y=12.269X-14.107，r=0.9999（n=6）。标准曲线见图1进样量-峰面积积分值见表 1。

表1 芍药苷线性关系考察结果表

图1 芍药苷的标准曲线

1.2.2.6 稳定性实验

取本品，按上述制备方法制备供试品溶液，分别放置 0、2、4、6、8 小时，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定其含量，结果芍药苷的平均峰面积为698.52，RSD为0.22%。结果表明，供试品溶液在8小时内基本稳定，可满足测定要求。稳定性结果见表2

表2 稳定性实验结果

1.2.2.7 精密度实验

精密吸取同一对照品溶液10μl，重复进样5次，测定芍药苷的峰面积，结果平均峰面积为922.18，RSD为0.70%，说明精密度较好。实验结果详见表3。

表3 精密度实验结果

1.2.2.8 重现性实验

取同一批样品，制备 6份供试品溶液，按拟定的含量测定方法，重复平行测定，黄芩苷的平均含量为0.8256mg/g，RSD为0.18%。重复性结果见表3。

表3 重现性实验结果

1.2.2.9 加样回收率实验

取已知含量配制好的样品溶液（58.5μg/ml）28ml，精密称定，置 50ml容量瓶中，加入精密称定好的黄芩苷对照品1.55mg，补足甲醇至刻度，称定重量，以下按供试品溶液制备方法操作，制成加样供试品溶液。吸取加样供试品溶液 10μl，注入液相色谱仪，按上述方法测定加样供试品溶液中黄芩苷的含量，分别计算回收率。

表4 柴胡桂枝固体汤剂中的黄芩苷的含量

1.2.2.10 芍药苷的含量测定

按本品质量标准“含量测定”项下方法操作，制备供试品溶液，测定三批样品中黄芩苷的含量，实验结果详见表4。结果表明芍药苷的含量基本稳定。

小结

本章对进行了柴胡桂枝固体汤剂质量标准研究。采用薄层色谱对人参、柴胡、甘草及黄芩进行了鉴别，并对冻干粉的水分测定、装量差异、微生物限度的检查，同时采用高效液相法测定了制剂中的黄芩苷及芍药苷的含量。方法学验证实验表明，该测定方法准确可靠，方便易行，可以作为柴胡桂枝固体汤剂的质量控制方法。