李龙瑞 张吉鹍 赵桂庭 周奀忠 罗 灵 〈 华南农业大学兽医学院 广州 5064 江西省农科院畜牧兽医研究所 南昌 000 江西核工业天地和药业有限公司 江西 峡江 400〉
鸡慢性呼吸道病和大肠杆菌病是鸡的常见病和多发病,前者是由家禽毒支原体引起的一种慢性上呼吸道疾病,常因继发或并发大肠杆菌感染而引起鸡群大批死亡,给养鸡业带来很大的经济损失。药物防治是目前较为有效的防治措施。泰妙菌素对革兰氏阳性菌、支原体等均有较强的抗菌作用,常用于防治鸡的慢性呼吸道病、猪喘气病等,但对革兰氏阴性菌作用较差。盐酸土霉素为广谱抗生素,对革兰氏阴性菌、阳性菌和支原体等均有较强的抗菌活性。为了客观、科学地评价盐酸土霉素、泰妙菌素配合使用对鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染的防治效果,本试验通过人工诱发混合感染的疾病模型,以混饮方式进行疗效观察。
1.1 试验药品
盐酸土霉素由河北华曙药业有限公司提供,批号为070901。延胡索酸泰妙菌素由山东胜利股份有限公司提供,批号为080104。
1.2 试验动物
黄羽肉鸡,由广东省农科院畜牧研究所提供鸡苗,经检测均为支原体、大肠杆菌血清学反应阴性。试验前按常规饲养,喂自配全价粉料,不含任何药物,供自由采食或饮水。饲养至21d时,选出临床观察健康鸡210只,随机分成7组,每组30只。具体分组情况见表1。
1.3 人工诱导混合感染
1.3.1 病原
1.3.1.1 鸡毒支原体
禽毒支原体S6毒株(MGS6株),由中国兽药监察所提供。KM2培养基培养,接种液为第3代传代培养物。按常规方法计数,毒株数为109cfu/mL。
1.3.1.2 鸡大肠杆菌
鸡大肠杆菌O78血清型,由中国兽药监察所提供,使用前,保存的强毒菌种先接种普通平板培养24h,选典型菌落于肉汤中,37℃培养18h后取出。肉汤培养物接种鸡复壮后,从病死鸡肝脏分离大肠杆菌并接种到平板培养,最后选典型菌落用普通肉汤培养制备攻毒菌液,以平板培养计数法测定其生长浊度单位为7.8×108个 /mL。
1.3.2 攻毒方式和接种量
除健康对照组外,均按每100g体重的鸡胸气囊接种毒支原体液0.5mL,再按每100g体重的鸡胸肌接种大肠杆菌液0.1mL。
1.3.3 接种前后观察
接种前及接种后观察鸡的临床症状,主要包括精神状态、食欲和呼吸系统的变化等。对死鸡进行剖检,观察气管、气囊、肺、心脏和肝脏等的病变,并进行病原菌的分离培养。
1.4 实验性治疗
按盐酸土霉素、延胡索酸泰妙菌素的推荐剂量为试验中剂量。第2~7组已接种过鸡毒支原体和大肠杆菌的试验鸡在24h后,部分鸡开始出现支原体病感染和大肠杆菌病临床症状,如精神不振、沉郁和喘气等。在接种后1h内分别按表1中处理方式给药,每天给药1次,任自由饮服,连用5d。观察期为接种后14d。每天观察鸡临床表现,对死鸡进行剖检,确定死因。
1.5 药效评价标准
1.5.1 死亡
凡在试验期限间,出现鸡毒支原体感染和大肠杆菌病的典型症状并死亡,尸体剖检气管、气囊、肺、心脏和肝脏有典型的病变特征,判定为受感染死亡。根据死亡鸡数占整个试验鸡数的比率计算死亡率。
1.5.2 有效
经用药后,治愈的与没有死亡但有临床症状表现的鸡均为治疗“有效”。试验结束时每组存活的鸡数占试验鸡数的百分率为有效率。
1.5.3 治愈
凡在试验期间,鸡经饮水给药后,精神状态、食欲及呼吸恢复正常,不再表现气管啰音、张口呼吸和拉稀等临床症状均属治愈。根据治愈鸡数占整个试验鸡数的比率计算治愈率。
1.6 数据的分析与处理
用生物统计学方法进行数据的显著性检验,其中死亡率、有效率和治愈率用卡方检验。
2.1 感染对照组
30只鸡中有25只在接种后7d内死亡。病鸡出现的主要临床症状为精神不振、食(饮水)欲下降、羽毛松乱、闭眼昏睡、拉稀粪和啰音等,卧地至死亡。死鸡的剖检特征为气管黏膜充血、肝脏呈肝周炎和肿大易碎,肝浆膜增厚,有大量渗出物。心包炎,心包积水,纤维素性渗出物。气囊混浊、增厚、有干酪样物覆盖或粘连。
2.2 实验性治疗
试验鸡经饮水给药后,与感染对照组比较,出现的临床症状较轻。鸡接种鸡毒支原体和大肠杆菌后的14d观察期内,各组鸡的死亡率、有效率和治愈率见表2。
3.1 人工诱变鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染疾病模型构建成功本试验感染对照组的死亡率为83.3%,说明本次人工诱变鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染疾病模型的构建成功。
3.2 低剂量盐酸土霉素、延胡索酸泰妙菌素配合使用,亦可提高其疗效
表1 试验鸡的分组及处理
表2 各试验组对鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染的疗效试验
统计学分析表明,复方制剂的高、中和低剂量的死亡率均极显著低于感染对照组(P<0.01),而有效率分别为90.0%、83.3%和70.0%,均极显著高于感染对照组(P<0.01)。这表明盐酸土霉素、延胡索酸泰妙菌素配合使用对鸡毒支原体-大肠杆菌混合感染均有较好的疗效,其中高、中剂量组与低剂量组比较,有效率有明显提高,但差异不显著。
判定标准:当df=1,n=30时,X2≥3.84表示差异显著,X2≥6.63表示差异极显著。
3.3 盐酸土霉素、延胡索酸泰妙菌素配合使用较单个效果明显,具有明显的正组合效应
单方盐酸土霉素和单方延胡索酸泰妙菌素对混合感染的有效率分别为60.0%和63.3%,但与推荐中剂量组比较,差异分别为显著(X2=4.02,P<0.05)与不显著(X2=3.07,P>0.05)。综合比较各组的死亡率、有效率和治愈率,发现以复方制剂高、中剂量组的疗效最好。本试验表明,盐酸土霉素、延胡索酸泰妙菌素两种药物合用呈现一定的协同作用,对鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染的疗效优于两种单方药物。