杜仲雄花茶对D-半乳糖衰老模型小鼠SOD、GSH-Px活性和MDA水平的影响

杜红岩， 娄丽杰， 傅建敏， 杜兰英， 陈百泉， 李 钦

(1.中国林业科学研究院经济林研究开发中心，河南 郑州 450003;2.河南大学中药研究所，河南 开封 475004)

杜仲Eucommia ulmoidesOliv.是我国特产的名贵中药材。我国杜仲资源约占世界杜仲资源总量的99%以上［1］。杜仲自古以皮入药，至今已有2000多年的历史，杜仲皮具有补肝肾，强筋骨，安胎，抗衰老的功效，但对于杜仲雄花的药用却报道很少。杜仲为雌雄异株树种，其中雄株占40% ～60%［2］。近年来研究发现，杜仲雄花与叶，皮含有相类似的有效成分，富含总黄酮，桃叶珊瑚苷，绿原酸等，其中黄酮类化合物的含量高于皮和叶［3］。杜仲雄花茶形状与普通茶叶十分相似，不需要和其它茶种配合，具有汤色黄绿透亮，滋味浓而爽口，香气独特而持久，回味甜的特点，它充分利用了杜仲雄花资源，开拓了杜仲综合利用的新途径，已获得国家发明专利［4］。为探讨杜仲雄花茶的保健作用，本实验就杜仲雄花茶对D－半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老、抗氧化作用进行了初步研究。

1 实验材料

1.1 实验动物 ♂性昆明种小白鼠50只，体重(26±2)g，由河南省实验动物中心提供，实验动物生产许可证号:SCXK(豫)2005－0001，购进适应 3 d。

1.2 药材及仪器 杜仲雄花茶(由灵宝市天地科技生态有限责任公司提供，批号20090407;专利号为ZL98117579.1);超氧化物岐化酶(SOD)试剂盒，谷胱苷肽过氧化物酶(GSHPx)试剂盒，丙二醛(MDA)试剂盒(均由南京建成生物工程研究所提供，批号均为20080918);D－半乳糖(国药集团化学试剂有限公司，批号20061025);JY10001电子天平(上海精密科技仪器有限公司);HHS－11－2电热恒温水浴锅(上海博迅医疗器械厂);PL2002型电子精密天平(上海特勒－托利多仪器公司);UV－754紫外－可见分光光度计(上海精密科技仪器有限公司)。

2 实验方法

2.1 药材的处理 取杜仲雄花茶(由灵宝市天地科技生态有限责任公司提供，批号:20090407)200g，加一定量的清水浸泡30 min，加水没过药面1 cm，煎煮3次，时间分别为60，40，20 min，合并3次滤液蒸发浓缩至200 mL(1 mL含生药1 g)，装瓶备用［5］。

2.2 动物分组给药及组织样品的制备 小鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为空白对照(等体积生理盐水)组，模型(等体积生理盐水)组，维生素E(25 mg/kg)组及杜仲雄花茶高、中、低剂量组。每天上午空白对照组和D－半乳糖模型组灌胃生理盐水20 mL/kg，实验组分别灌胃杜仲雄花茶水煎液，下午空白对照组皮下注射生理盐水5 mL/kg，其它5组均皮下注射1%D－半乳糖5 mL/kg。

连续给药42 d，最后一次给药后，禁食不禁水12 h，眼眶取血，分离血清。并迅速取肝脏，并将其置于4°C生理盐水中，洗净表面残留血液，用滤纸吸干，称湿重，然后加入预冷的生理盐水，高速匀浆，制备成10%的组织匀浆备用。

2.3 数据处理 所有数据用计算机SPSS 10.0软件进行处理，均以(±s)表示。组间差异采用t检验。

3 实验结果

3.1 杜仲雄花茶对小鼠血清SOD、GSH－Px活性和MDA含量的影响 杜仲雄花茶水煎液能增加小鼠血清SOD和GSH－Px的活性，减少MDA的产生，并呈一定的量效关系。结果见表1。

3.2 杜仲雄花茶对小鼠肝脏SOD、GSH－Px活性和MDA含量的影响 杜仲雄花茶水煎液能增加小鼠肝脏SOD和GSH－Px的活性，减少MDA的产生，并呈一定的量效关系。结果见表2。

表1 杜仲雄花茶对小鼠血清中SOD，GSH-Px活力和MDA含量的影响

表2 杜仲雄花茶对小鼠肝脏中SOD，GSH-Px活力和MDA含量的影响

4 结论与讨论

自由基的产生和机体对自由基的清除功能的动态平衡同机体的衰老有着密切的关系，而酶类是机体清除自由基的一种主要物质，主要有超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH－Px)等［6］。随着年龄的增长，机体清除自由基的能力下降，产生自由基和清除自由基的平衡被破坏，自由基堆积，产生大量代谢产物MDA，对机体产生损害，进而加速机体衰老［7］。因此SOD，GSH－Px含量的高低可以间接反映机体清除自由基的能力，MDA含量的高低可以间接反映细胞的衰老程度。

给小鼠连续注射D－半乳糖，可引起小鼠的糖代谢紊乱，进而使多种组织细胞发生衰老时的退行性变化，而这些变化与自然衰老时出现的自由基代谢紊乱及抗氧化功能降低的特征都极为相似。衰老的自由基学说认为，机体在生理情况下不断产生自由基的同时，也被体内SOD、GSH－Px、CAT等抗氧化系统所清除，随着机体的衰老，清除自由基的能力减弱，自由基的产生与清除失去平衡［6］。本实验证实杜仲雄花茶水煎液可以增加由D－半乳糖引起的衰老小鼠的SOD，GSHPx的活性，减少MDA的产生。从而增强对氧自由基的清除作用，减少体内氧自由基的产生，改善D－半乳糖引起的氧化应激损伤，防止细胞内Ca2+超载从而起到抗氧化，抗衰老的作用。杜仲入药虽已有2000多年的历史，但是对杜仲雄花的试验研究却很少，对抗氧化抗衰老的研究也鲜有报道，进一步研究有待继续。

［1］杜红岩.杜仲优质高产栽培［M］.北京:中国林业出版社，1996.

［2］王丙武，王雅清，莫 华，等.杜仲雌雄株细胞学、顶芽及叶含胶量的比较［J］. 植物学报，1999，41(1):11－15.

［3］张康健，董娟娥，马柏林，等.杜仲次生代谢物部位差异性的研究［J］.林业科学，2002，38(6):12－16.

［4］杜红岩，李芳东，杜兰英.杜仲雄花茶及其加工方法:中国，ZL 98117579.1［P］.2001－10－24.

［5］程郁昕，宁康健，吕锦芳，等.杜仲叶对小鼠中枢镇静作用的实验研究［J］.中国中医药科技，2007，14(2):98－99.

［6］陈 瑾，李荣亨.衰老的自由基机制［J］.中国老年学杂志，2004，24(7):677－679.

［7］Das N，Levine R L，Orr W C，et al.Selectivity of protein oxidative damage during aging in Drosophila melanogaster［J］.Biochem J，2001，360:209－216.