MDM2启动子309位点多态性与胶质母细胞瘤易感性的关系

杨 军，刘运海

(1常宁市人民医院，湖南常宁421500;2中南大学湘雅医院)

胶质母细胞瘤(GBM)是最常见的颅内高度恶性肿瘤。现代分子遗传学已经证实，肿瘤的发生和发展与抑癌基因和癌基因的改变密切相关。MDM2基因定位于人染色体12q13～14，编码491个氨基酸，MDM2蛋白的主要功能是p53蛋白酸性活化域直接结合形成复合物，从而抑制野生型p53介导的转录激活功能，阻断p53的细胞生长抑制作用，将野生型p53控制在较低无活性水平。MDM2过度表达时会促进肿瘤的发生发展，还会造成肿瘤对放疗、化疗的耐受，与肿瘤的不良反应有关［1］;而MDM2启动子区SNP309(309T＞G)能加强SP1转录因子的结合能力，从而使MDM2的转录增强和表达增加，直接抑制p53，进一步削弱其肿瘤抑制作用［2］。本研究对MDM2基因启动子309位点多态性与GBM易感性的关系进行分析。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2007年2月～2010年7月于中南大学湘雅医院就诊的GBM患者95例(病例组)，男 55例、女 40例，年龄 32～75(58.56±12.09)岁。均为影像学资料拟诊为GBM，经术后组织病理证实。对照组为同期健康体检者95例，男55例、女40例，年龄27～83(60.56±11.78)岁。两组年龄、性别具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 采集患者外周血5 ml，通过酚—氯仿法提取外周血单个核细胞基因组DNA。

1.2.2 MDM2基因多态性检测 采用PCR-RFLP方法检测MDM2 SNP309基因型，下游引物序列F:5'-GATTTCGGACGGCTCTCGCGGC-3'，R:5'-CATCCGGACCTCCCGCGCTG-3'。PCR产物用限制性内切酶PstⅠ37℃孵育2 h，2.5%琼脂糖凝胶观察酶切结果，野生型纯合子(T/T型)为104、17 bp两个片段;突变型纯合子(G/G型)为121、17 bp两个片段;杂合子(T/G型)为121、104和17 bp三个片段。同时随机抽取三种基因型的样本进行PCR产物直接测序验证，结果与PCR-RFLP方法所得结果一致。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0软件。率的比较应用χ2检验，用Binary Logistic回归模型计算表示相对风险度的比值比(OR)及其95%可信区间(CI)。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组MDM2 SNP309基因频率分布 SNP309各基因型在病例组的频率分布为:T/T型29.5%(28/95)、T/G 型 44.2%(42/95)、G/G 型 26.3%(25/95);在对照组的频率分布为:T/T型30.5%(29/95)、T/G 型 54.7%(52/95)、G/G 型 14.8%(14/95)。两组基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。

2.2 MDM2启动子SNP309位点多态性与GBM发病风险的关系 见表1。G/G基因型，而不是T/G基因型对于T/T来说能增加GBM的患病风险，即G/G基因型与野生型T/T基因型相比能增加GBM的患病风险，而T/T基因型则不能增加GBM的患病风险。在隐性模型中，G/G基因型的GBM患病风险是T携带者的2.04倍(OR=2.04，95%CI=1.51～2.78)，然而显性模型中G携带者基因型(T/G和G/G)与T/T相比，患病风险没有统计学意义(P ＞0.05)。

表1 病例组与对照组MDM2 SNP309基因多态性与GBM风险的关系

3 讨论

Qiao等［1］在李弗劳民综合征患者身上发现了MDM2启动子区SNP309，发现这些患者易患肿瘤的原因是生殖细胞系的p53突变，同时发现MDM2 SNP309 G/G基因型与肿瘤发生的年龄提前有关，而且使一生中原发性肿瘤的发生频率增加。研究显示，MDM2启动子区SNP309(309T＞G)在不同肿瘤中发挥的作用不同，在散发性肉瘤［2］、子宫内膜癌［3］、胃癌［4］、肝癌［5］、食管鳞癌和膀胱癌中，能增加发病风险，而在卵巢癌、乳腺癌［6］、头颈部肿瘤、结肠直肠癌和中发病风险与MDM2启动子区SNP309(309T＞G)无关。MDM2作为p53的负性调控因子，具有抑制p53信号途径的功能，从而削弱其肿瘤抑制作用。目前，关于MDM SNP309位点多态性与GBM易感性的研究较少，且存在争议，国内目前还没有相关研究报道。本研究结果显示，SNP309G/G基因型与GBM的易感性显著相关，SNP309G/G基因型的GBM患病风险是T携带者的2.04倍，进一步证实了MDM2启动子309位点多态性与 GBM易感性的关系。Khatri等［7］研究显示，MDM2 SNP309 G/G基因型能增加GBM的发病风险，本研究结果与其一致。同时，本研究还提示MDM2 SNP309 G/G基因型可使GBM的发病年龄提前。但在不同基因型GBM发病年龄差别方面我们未能发现统计学差异，其原因可能是不同人种或民族之间存在差异。

综上所述，MDM2启动子309位点多态性与GBM易感性相关，其中SNP309G等位基因能增加CBM的患病风险。另外，本研究结果是基于中国南方汉族人群，是否适用其他民族人群尚需进一步证实。

［1］Qiao D，Gaitonde SV，Qi W，et al.Deoxycholic acid suppresses p53 by stimulating proteasome-mediated p53 protein degradation［J］.Carcinogenesis，2001，22(6):957-964.

［2］Bond GL，Hu W，Bond EE，et al.A single nucleotide polymorphism in the MDM2 promoter attenuates the p53 tumor suppressor pathway and accelerates tumor formation in humans［J］.Cell，2004，119(5):591-602.

［3］Li Y，Zhao H，Sun L，et al.MDM2 SNP309 is associated with endometrial cancer susceptibility:a meta-analysis［J］.Hum Cell，2011，4.［Epub ahead of print］

［4］Ohmiya N，Taguchi A，Mabuchi N，et al.MDM2 promoter polymorphism is associated with both an increased susceptibility to gastric carcinoma and poor prognosis［J］.J Clin Oncol，2006，24(27):4434-4440.

［5］Liu GY，Jiang DK，Shen SQ，et al.MDM2 SNP309T＞G polymorphism with hepatocellular carcinoma risk:a meta-analysis［J］.Arch Med Res，2011，42(2):149-155.

［6］Krekac D，Brozkova K，Knoflickova D，et al.MDM2SNP309 does not associate with elevated MDM2 protein expression or breast cancer risk［J］.Oncology，2008，74(1-2):84-87.

［7］Khatri RG，Navaratne K，Weil RJ.The role of a single nucleotide polymorphism of MDM2 in glioblastoma multiforme［J］.J Neurosurg，2008，109(5):842-848.