HPLC法测定盐酸度洛西汀的有关物质

黄文姝，董爱军，金红雨，刘 心

盐酸度洛西汀是对5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)的摄取有双重抑制作用的化合物，目前研究表明，该药对抑郁症［1-2］、糖尿病性周围神经病引起的疼痛以及紧张性尿失禁等均有一定的疗效。盐酸度洛西汀在合成过程中可能带进原料、中间体、副产物，同时合成及放置过程中可能会产生降解物质［3］。为了更加有效地控制本品质量，本文建立高效液相色谱法对盐酸度洛西汀中的有关物质进行测定。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪(600泵、2487紫外检测器、996二极管阵列检测器、Millennium32色谱工作站，美国Waters公司);盐酸度洛西汀精制品(自制，纯度99.9%)，盐酸度洛西汀(自制，批号:20050201、20050202、20050203)，中间体(自制);乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 色谱条件

色谱柱:Inertsil CN-3(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流动相:0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用三乙胺调节 pH 值为 6.0)-乙腈(30∶70)［4］，流速为1.0 mL/min，检测波长为228 nm。柱温:室温，进样量:20 μL，理论板数按盐酸度洛西汀计算，应不低于2 000，盐酸度洛西汀与相邻色谱峰的分离度应大于1.5，实际测定时，盐酸度洛西汀与最邻近的杂质色谱峰分离度为2.8。

3 溶液制备

取本品适量，加流动相溶解并制成每1 mL中约含40 μg的溶液，作为供试品溶液;精密量取供试品溶液适量，用流动相稀释制成每1 mL中约含0.4 μg的溶液，作为对照溶液。

4 方法学考察

4.1 检测限 取盐酸度洛西汀精制品适量，加流动相使其溶解，并逐级稀释，按2项下的色谱条件取20 μL进样测定，计算其信噪比S/N=3时，检测限为0.013 ng。

4.2 专属性试验

4.2.1 主要原料与中间体的检出 取本品、合成用主要原料及中间体适量，制成混合溶液，按2项下的色谱条件注入二极管阵列检测器(PDA)液相色谱仪，记录色谱图，见图1、图2。几个主要原料、中间体均能与盐酸度洛西汀得到良好分离。

4.2.2 粗品的检测 取本品粗品适量，加流动相溶解后，按2项下的色谱条件注入液相色谱仪，见图3。本品粗品中所含杂质在此色谱条件下能够得到检出，并能与主成分得到良好分离。

4.2.3 降解试验 酸破坏试验:取本品10 mg，用0.1 mol/L盐酸溶液10 mL溶解，水浴加热30 min后，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，再用 流动相稀释至250 mL。

图1 盐酸度洛西汀HPLC图谱注:1.盐酸度洛西汀

图2 盐酸度洛西汀、主要原料、中间体混合溶液HPLC图谱注:1.中间体Ⅱ;2.原料Ⅱ;3.原料Ⅰ;4.中间体Ⅰ;5.盐酸度洛西汀

图3 盐酸度洛西汀粗品HPLC图谱注:1.盐酸度洛西汀

碱破坏试验:取本品10 mg，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液10 mL溶解，水浴加热30 min后，用0.1 mol/L盐酸溶液中和至中性，再用流动相稀释至250 mL。

氧化破坏试验:取本品10 mg，加入双氧水溶液适量(约0.5 mL)，水浴煮沸除去未反应的双氧水后，再用流动相稀释至250 mL。

光照破坏试验:取本品适量，于4500LUX光强度下照射10 d后，用流动相溶解并稀释制成每1 mL中约含40 μg的溶液。

高温破坏试验:取本品，于60℃条件下放置10 d后，用流动相溶解并稀释制成每1 mL中约含40 μg 的溶液。

分别取上述溶液20 μL，按2项下的色谱条件进行测定。色谱图见图4(因本品在光照及高温条件下质量稳定，无降解物产生，故色谱图未附)。本方法能够有效检测出各破坏试验中产生的降解产物，且降解产物均能与主成分峰达到良好分离，表明本方法对降解产物检查的专属性较好。

图4 盐酸度洛西汀降解实验HPLC图谱A.酸破坏;B.碱破坏;C.氧化破坏

4.2.4 峰纯度检查 为检查样品的HPLC色谱峰是单一成分还是多个成分，取上述样品、主要原料及中间体的混合液，用二极管阵列检测器对主成分色谱峰的峰纯度进行检查，结果纯度因子大于阈值，主峰纯度符合要求。

5 有关物质检查

取3项下的对照溶液20 μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)。测定精制品与 3批样品(批号:20050201、20050202、20050203)中有关物质的含量分别为0.04% 、0.22% 、0.36% 、0.18% 。

6 讨论

6.1 检测波长的选择 经多步反应得到的终产品盐酸度洛西汀，其主要原料、主要中间体和粗品等经PDA检测器检测，各种样品的最大吸收波长均在228 nm左右，因此，选择228 nm作为检测波长，以有利于杂质的检出。

6.2 流动相的选择 文献报道有采用磷酸二氢钾缓冲液、乙腈或甲醇等做流动相，梯度洗脱的方式，虽然能够有效检出各种杂质，但不适合快速检测。在此基础上对流动相的有机溶剂进行选择，考察了甲醇和乙腈两种溶剂，结果表明，乙腈分离效果较好。

6.3 色谱柱的选择 笔者曾对C18柱及氰基柱分别进行了考察，结果表明，氰基柱的分离效果要优于C18柱，因此，选择氰基柱作为本品有关物质检查用色谱柱。

［1］ 钟静玫，张昆林，武绍远，等.度洛西汀治疗持续性躯体形式疼痛障碍临床研究［J］.中国医药，2008，3(12):765-766.

［2］ 肖云，何茹.度洛西汀对躯体化障碍患者抑郁症状疗效及生活质量的研究［J］.实用药物与临床，2008，11(3):135-136.

［3］ 梁伟，王如伟，夏亚君.反相高效液相色谱二极管阵列检测器测定盐酸度洛西汀的有关物质［J］.中国药业，2006，15(15):36.

［4］ 金冲，周燕，唐加刚，等.高效液相色谱法测定盐酸度洛西汀的含量［J］.中国医药，2008，3(4):223-224.