HPLC测定肤痒胶囊中羟基红花黄色素A的含量

王增仙， 李艳丽， 高萧枫， 武敏霞， 甄会贤， 李 平 (山西生物应用职业技术学院生物制药工程系， 太原 030031)

肤痒胶囊是国家食品药品监督管理局颁标准第6册的中药品种肤痒颗粒的剂型改造品种，由苍耳子、地肤子、红花、川芎、白英等药味制成，是治疗皮肤瘙痒症较为理想的药物。本文建立了肤痒胶囊中羟基红花黄色素A的HPLC含量测定方法，用于提高肤痒胶囊的质量控制。本法具有分辨效能高、灵敏、准确等优点，为有效控制本品质量提供了依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC10A-VP高效液相色谱仪，岛津CLASS-VP色谱工作站，SPD-10AVP紫外检测器。色谱柱:依利特Hypersil ODS2(250 mm×4.6 mm)1.2 试剂 甲醇:分析纯试剂;乙腈:色谱纯试剂;水:重蒸水;其他试剂均为分析纯试剂。

对照品:羟基红花黄色素A购自中国药品生物制品检定所(批号:111637－200502)。在选定色谱条件分离后按归一化法计算含量为99%，以后均按以上含量计算，使用前将对照品置五氧化二磷干燥器中干燥至恒重。肤痒胶囊:实验室自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验 流动相为甲醇∶乙腈∶0.7% 磷酸溶液(20∶2∶78)。流速 1.0 ml/min;柱温30℃;检测波长403 nm。羟基红花黄色素A和样品中其他组分可基线分离，分离度大于1.5;按羟基红花黄色素A计算，理论塔板数不少于3 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称定干燥至恒定的羟基红花黄色素A适量，加25%甲醇制成每1 ml含羟基红花黄色素A 0.69 mg的溶液，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取供试物0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液50 ml，称定重量，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 ml，置25 ml量瓶中定容至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取肤痒胶囊方中除红花外的药材，按胶囊剂制备方法及2.2.2项下方法制备红花阴性对照溶液。

2.3 样品测定 分别吸取上述对照品溶液、供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定。计算肤痒胶囊中羟基红花黄色素A的含量。

2.4 专属性试验 分别精密量取羟基红花黄色素A对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1)，可见阴性对照对测定无干扰。

图1 羟基红花黄色素A的HPLC色谱图Fig 1 High performance liquid chromatogram of hydroxysafflor yellow A

2.5 线性关系试验 分别精密吸取不同浓度的羟基红花黄色素A对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图，得羟基红花黄色素A回归方程为:Y=－28 820+105 938 4X(r=0.999 9，n=5)。结果表明，羟基红花黄色素A在1.38－13.8 μg之间与其峰面积之间线性关系良好。

2.6 精密度试验 精密量取对照品溶液各20 μl，连续进样6次，计算羟基红花黄色素A各组峰面积值，RSD为0.7%。结果表明，仪器精密度良好。

2.7 重复性试验 制备5份相同量的供试品溶液，分别精密量取20 μl，注入液相色谱仪，记录数据。结果RSD=1.0%，表明该法重复性良好。

2.8 溶液稳定性试验 同一批供试品分别于0，2，4，8，12 h进样，计算各次进样峰面积的RSD值，RSD为1.24%。表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.9 回收率试验 采用加样回收方法，精密称取已知含量的样品适量，准确加入对照品一定量，按2.2.2方法，依法测定，结果见表1。结果表明，平均加样回收率为100.70%，本方法回收率良好。

表1 加样回收率试验结果 (n=6)Tab 1 Results of sample recovery test (n=6)

2.10 红花药材、肤痒胶囊中羟基红花黄色素A的含量测定 取红花药材及肤痒胶囊样品3批，按2.2.2方法配制供试品溶液，进样测定，结果见表2。

3 讨论

3.1 羟基红花黄色素A是查尔酮苷类化合物，具有强水溶性的特性。鉴于本品为水提物，选择水溶性较强的羟基红花黄色素A作为指标成分有一定的意义。据羟基红花黄色素A的结构分析及相关文献［3－6］报道，其稳定性较差，经考察其转移率仅为8.4%。以此成分作为监测指标有助于优化本品的制备工艺条件参数，为控制本品质量提供数据支持和理论依据。

表2 肤痒胶囊中羟基红花黄色素A含量测定结果(n=3)Tab 2 Determination of hydroxysafflor yellow A in Fuyang capsule samples(n=3)

3.2 中国药典2005年版一部红花药材中收载的HPLC测定羟基红花黄色素A的含量，本文参考药典方法对色谱条件作了适当的调整，结果羟基红花黄色素A的色谱峰峰形对称，与相邻峰达到基线分离，且方法学考察满足实验分析要求，所建立的方法简便准确，重复性好，可用于肤痒胶囊的质量控制。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第6册)［S］.北京:化学工业出版社，1992:92－93.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］.北京:化学工业出版社，2005:103－104.

［3］ 陈宗良，朱克，周玲娜，等.HPLC法测定愈伤灵胶囊中羟基红花黄色素A的含量［J］.药物分析杂志，2010，30(2):123－125.

［4］ 侯世斌，李江伟，苏幼红.羟基红花黄色素A人工抗原的制备［J］.中草药，2008，39(10):48 －51.

［5］ 陆仙芸，林德君，徐升亮.HPLC法测定注射用红花黄色素中羟基红花黄色素 A［J］.中草药，2006，37(5):68 －69.

［6］ 金鸣，臧宝霞，李金荣.羟基红花黄色素A热稳定性的初步研究［J］.中国中药杂志，2003，28(12):97 －98.