阿尔茨海默病患者的脑脊液tau蛋白及Aβ1-42水平☆

单守勤赵权张立营孙英姿

·论 著·

阿尔茨海默病患者的脑脊液tau蛋白及Aβ1-42水平☆

单守勤*赵权△张立营*孙英姿*

目的 探讨脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF）中tau蛋白及β－淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）对诊断阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的早期诊断价值，寻找AD理想的生物学标志。方法 采用酶联免疫吸附法检测36例AD、24例血管性痴呆患者（vascular dementia，VD）和26名正常对照者（对照组）CSF中tau蛋白及Aβ1-42浓度的变化。结果 CSF中tau蛋白平均浓度：AD组（336±126）ng／L，VD组（183±96）ng／L，对照组（98±54）ng／L，AD组CSF中tau蛋白浓度明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；CSF中Aβ1-42平均浓度：AD组（341±113）ng／L，VD组（457±132）ng／L，对照组（502±167）ng／L，AD组CSF中Aβ1-42浓度明显低于对照组，差异有显著性意义（P＜0.05）。结论 脑脊液Aβ1-42、tau蛋白浓度的变化，不仅对诊断阿尔茨海默病具有较高的敏感性和特异性，而且亦可作为阿尔茨海默病与血管性痴呆鉴别诊断的生物学指标。

阿尔茨海默病 tau蛋白 β－淀粉样蛋白1-42 酶联免疫吸附实验

影响阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）临床诊断的因素较多，难度较大，寻找有意义的生物学标志对AD的临床诊断、特别是早期诊断很有必要［1］。脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF）中tau蛋白水平可能是大脑神经元纤维缠结形成信息的间接反应，可作为逐渐进展的神经元和轴突变性的指标。由于CSF中β－淀粉样蛋白（β-amyloid peptide，Aβ）水平可部分反映脑内Aβ的产生和清除障碍，因此，我们对AD、VD患者及正常人CSF中tau蛋白和Aβ浓度进行了测定，探讨其在AD早期临床诊断中的应用。

1 对象与方法

1.1 研究对象

1.1.1 AD组 选择401医院2009年12月至2010年12月门诊及住院治疗的早期AD患者36例，男16例，女20例；年龄60～81岁，平均（72.4 ±6.6）岁。均符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版 （Diagnostic Statistical Manual 4 th edition，DSM-IV）中AD诊断标准，简易精神状态检查量表（Mini-Mental State Examination，MMSE）评分 ＜24分；哈金斯基缺血指数（Hachinski Ischemic Scale，HIS）评分＜4分。根据患者临床表现、神经系统检查、精神检查、头部CT和MRI检查，以及其他相关实验室检查排除其他系统疾病和有毒物质等所引起的痴呆。

1.1.2 VD组 病例来源于401医院2009年12月至2010年12月门诊或住院治疗的早期血管性痴呆患者24例， 男14例，女10例；年龄70～83岁，平均（77.80±4.89）岁。均符合DSM-IV中血管性痴呆的诊断标准，病史、临床表现、神经系统检查、精神检查、头部CT或MRI检查均提示存在脑血管病和局灶性神经系统体征。

1.1.3 正常对照组 26例受试者均为无痴呆表现、无中枢神经系统疾病的健康老年人，男13例，女13例；年龄70～75岁。MMSE评分大于按文化程度的分界值分，即文盲≥18分，小学≥21分，初中以上≥25分。 3组研究对象的性别、年龄的差异无统计学意义（P＞0.05），所有研究对象均对本研究知情及同意。

1.2 标本采集与处理 患者在入组后，分别行腰椎穿刺术抽取脑脊液2 mL，分装置于－20℃条件下冻存待测。

1.3 检测方法 采用双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒（比利时InnogeneticsNV公司提供）测定CSF中tau蛋白浓度，使用酶标仪读取吸光度A值。依照A值求出CSF中tau蛋白浓度的回归曲线和回归方程，根据曲线或方程求出各CSF标本的tau蛋白浓度和Aβ1-42浓度。

1.4 统计学方法 所有资料均使用SPSS 13.0处理，计算各组CSF中tau蛋白及Aβ1-42平均浓度并做方差分析。计量资料以均数±标准差±s表示，两样本均数的比较行t检验。

表1 AD组与VD组、对照组CSF中tau蛋白及Aβ1-42浓度的比较（ng／L，±s）

表1 AD组与VD组、对照组CSF中tau蛋白及Aβ1-42浓度的比较（ng／L，±s）

注：AD为阿尔茨海默病；VD为血管性痴呆。单因素方差分析，与对照组比较，P＜0.05，其余比较均P＞0.05。

Aβ1-42浓度341±113 457±132 502±167组别AD组VD组对照组n 36 24 26 Tau蛋白浓度336±126 183±96 98±54

2 结果

AD组CSF中tau蛋白浓度与Aβ1-42浓度无相关 （r＝－0.015，P＞0.05）。从表1可见，AD组CSF中tau蛋白浓度明显高于对照组，差异有统计学意义 （P＜0.05）；AD组较VD组、VD组较对照组有增高趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。AD组Aβ1-42浓度明显低于对照组，差异有统计学意义 （P＜0.05），而AD组与VD组与对照组Aβ1-42浓度的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

3 讨论

近年来，对AD的研究焦点主要集中于与其典型病理变化老年斑和神经纤维缠结相关的脑脊液Aβ1-42和tau蛋白的定量研究。据文献报道［2－3］，AD患者脑脊液Aβ1-42浓度显著低于且tau蛋白浓度显著高于正常老年人群，对脑脊液中这两种生物学标志物的检测可能有助于对临床上高度怀疑为阿尔茨海默病患者的早期诊断。

老年斑是明确诊断阿尔茨海默病的病理特征和依据［4－5］。Aβ1-42主要存在于AD患者的脑组织中。Aβ1-42与AD的发病机制密切相关［6］。根据AD的病理改变，凡脑组织中β-淀粉样蛋白沉积性疾病如血管性痴呆、Lewy小体痴呆、进行性核上性麻痹及额叶痴呆患者，脑脊液Aβ1-42浓度均呈不同程度降低。提示单纯脑脊液Aβ1-42定量检测的特异性较低，不能单独作为AD诊断的标准，但它对临床高度怀疑为AD的患者具有辅助诊断意义［5］。本结果显示，AD组的CSF中Aβ1-42浓度明显低于对照组，提示CSF中Aβ1-42浓度的降低是AD的生物学标志之一。而AD组与VD组CSF中Aβ1-42浓度无明显差异的结果表明单纯应用CSF中Aβ1-42浓度来诊断AD缺少特异性，使其临床应用受到一定限制。

tau蛋白为一种大脑磷酸化蛋白质，具有合成和稳定神经元的作用，它可连接轴突中的微管，从而促进微管装配过程中的稳定性［7－9］。通过ELISA法定量检测阿尔茨海默病患者脑脊液中的tau蛋白浓度显示，约85%的阿尔茨海默病患者脑脊液tau蛋白浓度显著升高。本结果显示，AD组CSF中总tau蛋白浓度明显高于对照组，这提示CSF中tau蛋白浓度升高是AD的生物学标志之一，而AD组与VD组CSF中tau蛋白浓度差异无显著性意义。单纯测定CSF中tau蛋白浓度来诊断AD很难与其他原因所致的痴呆相鉴别。

本研究结果表明，脑脊液Aβ1-42、tau蛋白浓度的变化，不仅对诊断阿尔茨海默病具有较高的敏感性和特异性，而且亦可作为阿尔茨海默病与血管性痴呆鉴别诊断的生物学指标，但由于本研究的样本量较小，所获得的结果尚有待进一步的大样本临床研究予以证实，而且作为横断面研究，证据等级亦较低。在本研究中，我们未对其他类型痴呆（如帕金森病痴呆、亨廷顿病）进行观察研究，亦未对轻度认知功能损害者脑脊液中的生物学标志物浓度进行研究。

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Cerebrospinal fluid biomarkers for early diagnosis of Alzheimer disease.

SHAN Shouqin， ZHAO Quan，ZHANG Liying， SUN Yingzi.Rehabilitation department the 2ndSanatorium of Ji'nan Military Command， Qingdao 266070.China.Tel：13678895842.

Objective To investigate the cerebrospinal fluid（CSF） levels of tau protein and β-amyloid peptide1－42（Aβ1－42）in the patients with Alzheimer disease（AD）and their diagnosetic value for AD.Methods The subjects were 36 patients with AD and 26 controls，includeing 24 patients with vascular dementia（VD）and 26 normal controls（NC）.The CSF levels of tau protein and Aβ1－42were measured with ELISA.Results The mean CSF levels of tau protein were（336±126）ng／L in AD patients，（183±96）ng／L in VD，and（98±54）ng／L in NC，respectively，and the difference between AD and NC was statistically significant（P＜0.05）.The mean CSF levels of Aβ1－42were（341±113）ng／L in AD，（457±132）ng／L in VD，and（502±167）ng／L in NC，and the differentce between AD and NC was statistically significant（P＜0.05）.Conclusions Cerebrospinal fluid Aβ1－42， tau protein and tau protein are useful biomarkers for the diagnosis of AD with high sensitivity and specificity，and can be used to differentiate AD and VD.

Alzheimer disease Tau protein Amyloid beta-protein Phosphorylation enzyme-linked immunosorbent assay

R749.1＋6

A

2011－02－14）

（责任编辑：李 立）

全军保健专项课题项目（编号：10BJ215）

* 济南军区青岛第二疗养院 （青岛 266071）

（E-mail：shanshouqing＠yahoo.cn）

△ 济南军区青岛401医院检验科