动态浊度法测定注射用高纯度尿促性素中细菌内毒素的含量*

刘 肃 周永标 肖 瑛 潘卫松

（1.广州市药品检验所，广东广州510610；2.暨南大学药学院，广东广州510632；3.暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究所广东省高校重点实验室，广东广州510632）

注射用高纯度尿促性素（highly purified menotrophin for injection）是从天然提取的促性腺激素制剂，其中含有卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，FSH）和黄体生成激素（luteinizing hormone，LH），可独立地作为促排卵治疗的用药，也应用于低促性腺激素性性腺功能不全的男性和女性，还广泛应用于行体外受精的控制性促排卵的妇女中[1]。笔者依照2005年版《中国药典》收载的细菌内毒素检查法，对其细菌内毒素的定量和定性检查进行了研究，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 仪器

细菌内毒素测定仪（天津大学无线电厂，BET-32B）；SUB14恒温水浴（英国GRANT公司）；MSI旋涡混合器（广州IKA公司）。

1.2 试验药品

细菌内毒素工作标准品（规格：120EU/支，批号：150601-200966）购自中国药品生物制品检定所；内毒素检查用水（规格：50mL/支，批号：1002050）及鲎试剂（TAL）均购于湛江安度斯生物有限公司（动态浊度法鲎试剂，规格：1.25mL/支，批号：0802020，灵敏度：10～0.1EU/mL；凝胶法鲎试剂，规格：0.1mL/支，批号：0903311，灵敏度：0.125EU/mL）；注射用高纯度尿促性素由辉凌（德国）制药有限公司提供（批号：CE0078A）。

2 方法与结果

2.1 细菌内毒素限值的确定[2-4]

根据公式：细菌内毒素限值（L）=K/M。式中，M为人用每公斤体重每小时最大剂量。依据药品使用说明书，初始剂量为每日1～2支，之后可以逐渐增加剂量，故成人每日最大给药量以10支计算，中国人均体重按60kg计，则M=10支/（kg·h），K为人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量。K值取5EU/（kg·h），则L=5EU/（kg·h）×60kg/10支·h-1=30EU/支。

2.2 标准曲线的可靠性试验

用细菌内毒素检查用水对细菌内毒素国家标准品进行稀释，使其细菌内毒素最终浓度分别为10.0，1.0，0.1，0.01EU/mL。各取0.1mL分别加到预先加有0.1mL鲎试剂反应管内，在旋涡混合器上轻轻混合均匀，插入BET-32B细菌内度素检测仪内进行检测，其中每一个浓度做2支平行管，并同时做阴性对照2管（NC），阳性对照2管（PPC）。实验数据按最小二乘法进行统计分析，其标准曲线为：lgT=2.79178+（-0.24828lgC），r=-0.9932，反应时间在371～2093s。阴性对照管反应时间＞3600s。结果可见，阴性对照管反应时间大于标准曲线最低浓度的反应时间，|r|＞0.980，故标准曲线的可靠性成立。

表1 注射用高纯度尿促性素干扰试验

2.3 干扰试验

将注射用高纯度尿促性素以细菌内毒素检查用水稀释成10倍、20倍、40倍、80倍4个浓度系列。每个浓度分别取0.1mL加入0.1mL鲎试剂溶液作为供试品检查管。同时，取这4个稀释浓度的样品溶液0.5mL，加入0.5mL细菌内毒素国家标准品溶液（1.0EU·mL-1），混匀，作为供试品干扰试验中供试品阳性对照溶液。每个浓度溶液分别取0.1mL，加到预先加有0.1mL鲎试剂反应管内，混匀，作为供试品阳性对照管。立即插入BET-32B型细菌内毒素测定仪进行检测，其中每一浓度重复2管，计算平均回收率，回收率（%）=（Cs-Ct）/λm×100%（见表1）。由表可见回收率均在50%～200%，可知，注射用高纯度尿促性素在此稀释倍数下，对细菌内毒素检测无干扰作用。

2.4 细菌内毒素的检测

根据《中国药典》2005年版附录细菌内毒素定量测定法进行定量测定，同时按照《中国药典》2005年版附录凝胶法进行定性检查，动态浊度法实测内毒素13.824EU/支，回收率112%；凝胶法阴性。

3 讨论

细菌内毒素检测的凝胶法与动态浊度法都是药典所规定的方法，凝胶法不需要专门的仪器，且定性检查进行限度控制成本低廉，操作更加简便易行，动态浊度法进行定量检查，需要专门设备，试剂成本相对昂贵，但是灵敏度高[5-9]。本品注射用高纯度尿促性素使用动态浊度法与凝胶法检测结果一致，提示用两种方法进行本品的细菌内毒素检查都是可行的。

[1]陈新娜，乔杰，何方方，等.高纯度尿促性素和普通尿促性素促排卵效果[J].中国生育健康杂志，2005，16（4）：205-208.

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[3]巴力吉尼玛，韩斯琴.三磷酸腺苷二钠注射液中细菌内毒素的定量检查[J].中国医院药学杂志，2008，28（16）：1420-1421.

[4]潘卫松，肖瑛，潘建明.荧光素钠注射液细菌内毒素检查法的研究[J].中国药房，2009，20（13）：1010-1012.

[5]潘卫松，肖瑛.透明质酸钠注射液细菌内毒素检查法的研究[J].中国医药导报，2009，20（6）：45-47.

[6]周永标，潘卫松.从葛根素的异常毒性实验看药用辅料的重要性[J].中国医药导报，2010，7（13）：47-48.

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