脑血灵口服液制备方法改进及薄层色谱鉴别

梅 娇，刘兴文

（重庆市北碚区中医院，重庆 北碚 400700）

脑血灵口服液为我院脑血管病专科常用制剂，现已收载于2008年版《重庆市医疗机构制剂规范》。全方由丹参、赤芍、水蛭、羚羊角粉等6味药物组成，具有活血化瘀、逐痰通络的功效，临床上用于中风急性期的半身不遂、偏身麻木、口眼歪斜、舌强言蹇、舌红苔黄等病症。但原制备方法制得的成品沉淀较多，外观差，质量也不易控制。经试验，将其制备方法作了一些改进，增加了羚羊角、丹参、赤芍等的薄层色谱鉴别，现报道如下。

1 仪器与试药

XMTD－204型水浴锅（金坛市医疗仪器厂）；JA2003N型电子天平（Max=200 g，实际分度值0.000 1 g，上海精密科学仪器有限公司）。脑血灵口服液（北碚区中医院制剂室研制，批号分别为090825，091105，090325），丹参对照药材（批号为923－200006）；芍药苷对照品（批号为110306）；羚羊角对照药材（批号为 956－201001）；大黄对照药材（批号为902－9405），均来自中国药品生物制品检定所，氢氧化钠、盐酸、石油醚、正丁醇、冰醋酸、茚三酮、乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲醇、甲酸、甲酸乙酯、氨水、乙醇等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 处方与制备

处方：丹参、赤芍、水蛭、羚羊角粉、生大黄、浙贝母、甜叶菊。

制备：取羚羊角粉，加10倍量的水煎煮3次，每次2h，过滤，滤液放置备用，滤渣加8倍量的0.25％氢氧化钠溶液，加热水解4h，冷却后过滤，滤液用稀盐酸调pH至7.0，得水解液，将上述水煎液与水解液合并，加热浓缩至含生药量10％，作为羚羊角的水解液备用。另取水蛭，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗滤法[2005年版《中国药典（一部）》附录10]，用6倍量70％乙醇进行渗滤，收集滤液，于（50±2）℃减压回收乙醇并浓缩至1∶1（浓缩液∶药材）备用。再取丹参药材，粉碎成粗粉，提取3次，第1次用5倍量95％乙醇缓缓加热并恒定温度至（80±2）℃，回流1.5h，滤液于80℃以下减压浓缩并回收乙醇，第2次用4倍量50％乙醇缓缓加热并恒定温度至（80±2）℃，回流1.5h，滤液于80℃以下减压浓缩并回收乙醇。药渣于（80±2）℃回收乙醇至30℃约3h，第3次加6倍量水浸泡1h，缓缓加热并恒定温度至（80±2）℃，浸提2h，滤液于80℃以下减压浓缩，合并3次提取后的浓缩液，于80℃以下减压浓缩至1∶2（浓缩液∶药材），备用。将赤芍、浙贝、大黄加10倍量水煎煮2次，第1次2h，第2次1.5h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.20的清膏，加95％乙醇使浓缩液含醇量达75％，低温静置24h，过滤，滤液回收乙醇，并浓缩至1∶2（浓缩液∶药材）。依次将羚羊角水解液、丹参提取浓缩液，水蛭提取浓缩液加入赤芍等药材的提取浓缩液中，最后加入甜菊苷及防腐剂，调整总量至规定体积，搅匀，分装即得。

2.2 外观检查

按修改后的制备方法制得的脑血灵口服口感好，沉淀量少，贮存过程中质量稳定。

2.3 薄层色谱鉴别

羚羊角：取本品30mL，水浴挥干，残渣加70％乙醇10mL溶解，充分搅拌，滤过，滤液蒸干，残渣加70％乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取羚羊角对照药材1 g，加石油醚（60～90℃）20mL，加热回流1.5h，滤过，弃去滤液，药渣挥去石油醚后，再加70％乙醇20mL，加热回流2.5h，滤过，滤液蒸干，残渣加70％乙醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。取不含羚羊角的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取3种溶液各5～10μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以正丁醇－冰醋酸－水（4∶1∶5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2％茚三酮溶液，加热至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰（见图1 A）。

丹参：取本品10mL，加乙醚10mL振摇提取，分取乙醚提取液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1 g，加乙醚10mL，振摇，放置1h，滤过，滤液蒸干，同法制成对照药材溶液。取不含丹参的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版中国药典（一部）》附录Ⅵ B]试验，吸取3溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰（见图1B）。

赤芍：取本品10mL，用乙醚提取至乙醚层无色，弃去乙醚液，水层用水饱和正丁醇提取3次，每次10mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次15mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含1.5mg的溶液，作为对照品溶液。取不含赤芍的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液4μL、对照品溶液3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰（见图1C）。

大黄：取本品10mL，加盐酸1mL，置水浴上加热30min，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次10mL，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷2mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.4 g，加甲醇10mL，冷浸1h，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL，再加盐酸1mL，同法制成对照药材溶液。取不含大黄的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶ 5∶1）上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏数分钟后，日光下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上呈相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰（见图1D）。

图1 薄层色谱图

3 讨论

修改前处方中除水蛭外，其余各味药均用水提取，羚羊角粉直接加至水提取浓缩液中，因此成品的沉淀较多，澄明度差，使用前须用力摇匀。修改处方后羚羊角粉制成水解液，丹参单独提取，其余水提药物在原工艺上增加了醇沉步骤，使得成品的澄明度得到了很大的改善。由于本品中含动物药水蛭和羚羊角粉，因此原工艺制得成品有一种特殊的不快感，修改后成品中无药物细粉，并加入甜叶菊矫味，口感明显改善。原工艺成品中含药物细粉，放置后易沉降，服用时不易摇匀，致使每日羚羊角粉的服用量存在明显差异，而修改后均为提取物，不存在上述问题。修改前成品中的药物细粉如果灭菌不彻底，可能将微生物带入，导致成品卫生学不合格，修改后避免了上述问题。原工艺水蛭的提取所用溶剂量偏少，提取不够充分，收集的渗滤液直接进行配液，导致成品中含少量乙醇。修改后增加了提取溶剂，使得有效成分的提取更充分，渗滤液低温（50℃左右）减压回收乙醇，既保证了有效成分不被分解（60℃以上易分解）[1]，又克服了成品中含乙醇的问题。原工艺羚羊角粉直接加入浓缩液中进行配液。修改后羚羊角粉采用碱水解处理[2]，既保证了有效成分的提取，又改善了成品的澄明度、口感等问题。原工艺丹参采用水煎煮提取，致使质量难以控制，修改后改为醇提加水提[3]，醇提部分减压（80℃左右）浓缩并回收乙醇，既保证了丹参脂溶性成分（丹参酮类）和水溶性成分（酚酸类）的提出，又避免了有效成分（丹酚酸B等）在高温下发生分解和转化。

在原工艺的基础上增加了醇沉的步骤，除去了大部分杂质，使成品澄明度得到了提高。原工艺制得的成品，部分药物提取不充分，质量不易控制。修改后药物提取更充分，增加了羚羊角[4]、丹参[5]、赤芍[6]的薄层色谱鉴别，质量更稳定可控。

[1]李平华，王 显.从水蛭干燥全体提取水蛭素的工艺研究[J].中华现代临床医学杂志，2008（6）：493－494.

[2]江亚栋，缪也夫，苏 娟.羚羊感冒口服液的工艺研究[J].中成药，1998（7）：2－5.

[3]艾相平，张百锋，党学德.复方参丹片提取工艺的实验研究[J].中国药事，2009，23（7）：694－695.

[4]高 革，王福慧.羚羊角口服液的研制[J].时珍国医国药，1998，22（4）：357－358.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：52.

[6]吕武清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京：人民卫生出版社，1996：290－291.