三聚氰胺是一种在合成树脂和塑料中常见的化学试剂,不用于食品,2008年在中国被发现作为奶粉添加剂来提高蛋白质表观测量值水平。三聚氰胺易导致婴儿肾脏功能障碍。但是目前有关其对中枢神经系统(CNS)的毒性研究尚少见报道。因此研究三聚氰胺对CNS的可能毒性很有必要。
本研究目的是评估三聚氰胺对已分化PC12细胞(常用的神经细胞株)的影响。以不同三聚氰胺浓度(0、33、330、990、1 980和3 300 mg/L)分别处理细胞12、24和36 h后用MTT法检测细胞的活性,荧光显微镜定性观察Hoechst 33258荧光染色后细胞核的形态,流式细胞仪检测Annexin V/PI染色后细胞的凋亡和坏死率,最后用分光光度法检测细胞内T-SOD水平。
MTT的结果表明三聚氰胺抑制PC12细胞的存活能力,且随三氯氰胺浓度增大和培养时间延长,PC12细胞的存活率逐渐下降。Hoechst 33258染色显示,用三聚氰胺培养的细胞染色质固缩,聚集于核膜,并且产生更多易染色颗粒,呈典型凋亡形态。流式细胞仪测试结果显示,三聚氰胺引起早期细胞凋亡主要浓度范围是33~3 300 mg/L,并呈浓度依赖性,在3 300 mg/L以下几乎不会引起分化的PC12细胞坏死。SOD结果显示T-SOD随浓度增加而减少,SOD作为重要的抗氧化物质,其减少使氧化应激反应增加。
因此,三聚氰胺通过引起细胞凋亡来抑制分化的PC12细胞的增殖,并且氧化应激参与了这一过程。这项研究有助于估测三聚氰胺对神经细胞的毒性,为研究三聚氰胺及其衍生物制品的潜在毒性提供了依据。
(马燕燕摘 杨卓审校 译自Cell Mol Neurobiol,2011,31:65-71)