通腑与泻肺法配伍应用对ALI/ARDS大鼠肺肠组织sIgA含量影响的比较研究

刘恩顺，孙增涛，苏景深，郭思佳，刘 伟，刘 建，孟苗苗，杨 晓

（1.天津中医药大学第二附属医院呼吸科，天津 300150；2.天津中医药大学，天津 300193）

通腑与泻肺法配伍应用对ALI/ARDS大鼠肺肠组织sIgA含量影响的比较研究

刘恩顺1，孙增涛1，苏景深1，郭思佳2，刘 伟1，刘 建2，孟苗苗2，杨 晓2

（1.天津中医药大学第二附属医院呼吸科，天津 300150；2.天津中医药大学，天津 300193）

目的：观察通腑与泻肺法及其配伍应用对ALI/ARDS大鼠肺肠组织sIgA含量的影响。方法：将100只健康wistar大鼠随机分为5组：对照组、模型组、泻肺组、通腑组和通腑泻肺组，采用尾静脉注射油酸加内毒素的方法造成大鼠ALI/ARDS模型，检测各组大鼠肺肠组织sIgA含量。结果：通腑法、泻肺法和通腑泻肺法均可有效降低肺肠组织sIgA含量，且通腑与泻肺法配伍应用效果明显优于二法单独应用。结论：在调节ALI/ARDS大鼠黏膜免疫功能方面，肺肠同治具有明显优势。

通腑泻肺法；ALI/ARDS；sIgA；黏膜免疫

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是指由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性进行性缺氧性呼吸衰竭[1]。ARDS的临床表现为进行性呼吸困难、紫绀、气促、喘憋等肺气壅遏的症状，往往同时伴有便秘、腹胀等腑气不通，大肠失于传导的病理变化，其证候学突出体现了中医“肺肠相关”的特点。因此，“肺病及肠”、“肺肠同病”是从中医视角观察ARDS的常见结论，而“脏病治腑”、“通腑泻肺”也是中医常用的有效治法并为临床研究初步证实[2-3]。随着黏膜免疫研究的深入，使人们越来越相信消化系统和呼吸系统两大黏膜器官组织之间存在密切联系，sIgA是黏膜免疫主要的功能执行者，主要存在于初乳、唾液、胃肠液、支气管，这在一定程度上证明了sIgA是联系各处黏膜免疫的共同分子基础。有学者经研究后指出，sIgA是体现肺与大肠相表里的重要物质基础之一[4]。开展通腑与泻肺法及其配伍应用对ALI/ARDS大鼠肺肠组织sIgA含量影响的比较研究，有助于揭示ARDS肺肠相关的免疫调节的物质基础，丰富“肺与大肠相表里”这一脏腑相关理论的现代生物学机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 健康wistar大鼠100只，雄性、体重（200± 20）g，购自天津市山川红实验动物科技有限公司（许可证号：SCXk（津）2009-0001），购入后置天津中医药大学动物实验中心常规饲养。

1.1.2 药物及试剂 通腑泻肺方（葶苈子、桑白皮、大黄、枳实、厚朴）、通腑方（大黄、枳实、厚朴）、泻肺方（葶苈子、桑白皮）中药颗粒剂，购自天津中医药大学第一附属医院药房。生药剂量比例按照参考文献[5]换算，依照人体单位体重生药量求得大鼠单位体重生药量。用蒸馏水配置通腑泻肺方（生药浓度1.08 g/ml），通腑方（生药浓度0.45 g/ml）、泻肺方（生药浓度0.63 g/ml），4℃冰箱保存备用。油酸（分析纯）来自天津运盛化学品有限公司；大肠杆菌内毒素脂多糖（编号：L2880血清型055:B5），大鼠SIgA ELISA试剂盒(批号：BP-E09107R)为美国SIGMA公司产品。

1.1.3 模型建立 动物购入后适应性饲养1周，参照文献[6]的造模方法并加以改进。将大鼠置于大鼠固定器，固定躯干及四肢，暴露尾部。正常对照组大鼠于左侧尾静脉注射生理盐水0.12 ml/kg，2 h后于右侧尾静脉再次注射生理盐水1 ml/kg；其他各组于左侧尾静脉注射油酸0.12 ml/kg，间隔2 h后选右侧尾静脉注射内毒素1 mg/kg复制ARDS模型。常规消毒，自由摄食饮水，注意保暖。

1.1.4 动物分组和给药方法 将大鼠按体重随机分为5组：对照组、模型组、泻肺组、通腑组和通腑泻肺组，每组20只。对照组与模型组在造模完成后即用生理盐水灌服，每次0.01 ml/g。泻肺组、通腑组和通腑泻肺组在造模完成后即分别采用泻肺方、通腑方、通腑泻肺方灌胃，每次0.01 ml/g，1次/d。

1.1.5 标本采样和制备 分别在造模第3天和第7天每组随机抽取10只大鼠，腹主动脉取血处死后，冰上迅速取左肺组织和距幽门下15 cm处及回盲部肠组织放入无菌低温冻存管，于液氮中速冻，转存到-80℃冰箱保存待测。

1.1.6 指标观测 观察各组大鼠一般状态，ELISA检测大鼠肺肠组织中SIgA，操作严格按说明书进行。

1.1.7 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件包，各项指标以均值±标准差（±s），计量资料进行ANOVA单因素方差分析，LSD法作两两比较；以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 实验结果

2.1 一般状态观察

对照组大鼠活泼好动，皮毛光泽发亮，呼吸平稳，抓取时能迅速逃避。模型组大鼠在注入OA后30 min起，始出现精神不振，行动迟缓，对刺激反应差，皮毛枯槁，无光泽，多见皮毛倒立，蜷缩成团状；随时间延长，大鼠出现呼吸急促、呼吸困难，部分大鼠出现紫绀、血性泡沫样液体从鼻腔溢出、大便干结、部分有血尿。泻肺组、通腑组和通腑泻肺组大鼠精神及呼吸困难均好于模型组，能饮水，多数有黑色稀便，极臭，未见血尿；但亦行动迟缓，对刺激反应不灵敏；皮毛无光泽，但较少出现皮毛倒立。

2.2 肺肠组织sIgA检测结果

2.2.1 第3 天检测结果 第3天大鼠肺、肠组织sIgA含量比较，模型组较对照组明显升高（P＜0.01），泻肺组、通腑组及通腑泻肺组较模型组显著降低（P＜0.05），通腑泻肺组较泻肺组和通腑组显著降低（P＜0.05）。详见表1。

表1 大鼠sIgA第3天检测结果（±s,μg/ml）Tab.1 Test results of sIgA in the third day（±s,μg/ml）

表1 大鼠sIgA第3天检测结果（±s,μg/ml）Tab.1 Test results of sIgA in the third day（±s,μg/ml）

与对照组比较，▲P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05；与通腑泻肺组比较，△P＜0.05Compared with control group,▲P＜0.01;compared with model group,*P＜0.05;compared with Tongfu Xiefei group,△P＜0.05

组别 n 肺sIgA对照组模型组泻肺组通腑组通腑泻肺组9 8 8 6 7 21.97±2.44 46.11±3.25▲40.03±3.29*△37.29±3.52*△31.16±2.99*肠sIgA 23.20±3.12 47.08±2.05▲3 9.14±2.70*△39.08±2.22*△32.86±2.51*

2.2.2 第7 天检测结果 第7天大鼠肺、肠组织sIgA含量比较，模型组较对照组明显升高（P＜0.01），泻肺组、通腑组及通腑泻肺组较模型组显著降低（P＜0.05），通腑泻肺组较泻肺组和通腑组显著降低（P＜0.05）。详见表2。

3 讨论

分泌性IgA是黏膜免疫系统的主要效应分子，主要存在于泪液、唾液、乳汁和呼吸道、消化道及泌尿生殖道等黏膜表面分泌液中，是黏膜组织免疫应答的特征，也是机体黏膜免疫的第一道防线。SIgA的产生直接取决于抗原的存在。Singh等[7]报道，用伤寒沙门菌免疫小鼠可诱导小鼠脾T细胞数量增加，肠液SIgA含量增高。刘东妍等[8]也发现，在持续高氧作用下新生大鼠回肠黏膜分泌大量SIgA，这有利于抵御细菌毒素的侵袭，以保持肠黏膜的完整性。证实了机体在遭受抗原打击后可以出现以SIgA升高为表现形式的黏膜免疫应答，与有学者[9]提出的局部气管吸入或鼻腔滴入减活疫苗，可激发黏膜产生较多的SIgA，提高其免疫功能的观点一致。

表2 大鼠sIgA第7天检测结果（±s,μg/ml）Tab.2 Test results of sIgA in the seventh day(±s,μg/ml)

表2 大鼠sIgA第7天检测结果（±s,μg/ml）Tab.2 Test results of sIgA in the seventh day(±s,μg/ml)

与对照组比较，▲P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05；与通腑泻肺组比较，△P＜0.05Compared with normal group,▲P＜0.01;compared with model group,*P＜0.05;compared with Tongfu Xiefei group,△P＜0.05

组别 n 肺sIgA对照组模型组泻肺组通腑组通腑泻肺组9 8 8 4 5 21.21±3.39 45.20±2.57▲38.77±2.88*△39.02±2.03*△30.92±3.27*肠sIgA 24.93±2.80 47.03±2.50▲40.38±3.01*△41.99±3.19*△31.24±2.81*

失控性的炎症反应是ARDS病理机制的一大特点，目前认为，急性肺损伤是机体炎症反应在肺部的表现，炎症反应包括促炎与抗炎两个方面[10-11]。二者之间存在着错综复杂的关系并相互影响，两者保持平衡则机体内环境保持稳定。而与炎症反应和炎症损伤同时发生的黏膜免疫应答在维持机体处于稳定状态中起到重要作用。正如邱海波等[12]在探讨急性肺损伤的炎症反应机制与药物治疗时提出必须同时观察促炎与抗炎反应的变化，才有可能确定正确的免疫治疗方向一样，对ARDS机体免疫功能特别是黏膜免疫功能要有更深入的认识。

ARDS具有明显的肺、肠相关特征，因此，“肺病及肠”、“肺肠同病”是从中医视角观察ARDS的常见结论，而“脏病治腑”、“脏腑同治”也是中医常用的有效治法。本实验开展了通腑与泻肺法及其配伍应用对ARDS大鼠黏膜免疫功能影响的研究，结果表明，当大鼠接受抗原攻击，制成ARDS模型后，激活体内黏膜免疫系统以增强抵抗疾病的能力，表现为所有造模组肺、肠组织sIgA水平均较对照组明显增高。治疗后第3天和第7天三组均能降低肺、肠组织sIgA水平，其中通腑泻肺组优于泻肺组和通腑组。实验结果一方面肯定了中医通腑法、泻肺法和通腑泻肺法均可通过激活sIgA免疫应答，中和体内抗原，减轻其对机体的损伤，从调节黏膜免疫功能这一沟通肺、肠的生物学机制起到治疗ARDS的作用。另一方面，体现中医肺、肠相关的通腑泻肺法效果明显优于单纯使用通腑法与泻肺法，为探索肺与大肠相表里理论的生物学机制和物质基础提供了实验依据，值得进一步深入研究。

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[7]Singh M,Vohra H,KumarL,et al.Induction of Systemic and Mucosal Immune Response in Micelmmuniscd with Porins of Salmonella Typha[J].J Med Microbiol,1999,48(1):79.

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[12]邱海波,陈德昌,潘家绮,等.急性肺损伤的炎症反应机制与药物治疗探讨[J].中国危重病急救医学,1999,11(11):678-680·

The effect of application of combining Tongfu-therapy with Xiefei-therapy on sIgA content in lung and large intestine in ALI/ARDS rats

LIU Enshun1,SUN Zengtao1,SU Jingshen1,GUO Sijia2,LIU Wei1,LIU Jian2,MENG Miaomiao2,YANG Xiao2
（1.Second Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM,Tianjin 300150,China;2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

Objective:To observe the effect of Tongfu-therapy,Xiefei-therapy and Tongfu Xiefei-therapy on sIgA content in lung and large intestine in ALI/ARDS rats.Methods:We divided the health Wistar rats into 5 groups,Control group, model group,lung treatment group,large intestine treatment group and lung-large intestine treatment group.We made the ALI/ARDS-rat model by Intravenous injecting oleic acid and endotoxin in caudal vein,and observed sIgA content in lung and large intestine organs.Results:All of Tongfu-therapy,Xiefei-therapy and Tongfu Xiefei-therapy could effectively reduce the sIgA content in lung and large intestine,and the method of combining Tongfu-therapy with Xiefei-therapy was superior to the single method.Conculsion:Lung-large intestine treatment is great advantage in regulating immunologic function of mucous membrane in ALI/ARDS rats.

Tongfu Xiefei-therapy;ALI/ARDS;sIgA;Mucous membrane immunologic function

R242

A

1673-7210（2011）02（c）-020-03

国家重点基础研究发展计划课题（2009CB522702）；国家自然科学基金面上项目（30701115）；天津市应用基础及前沿技术研究计划项目（08JCYBJC11000）。

2010-12-16）