奶牛乳头外用蜂胶保护膜的研制

王纯净，韩秀宇，赵秀宇，贾晓健，孙斌

（1.黑龙江省绥化市北林区畜牧局，绥化152000；2.黑龙江省讷河市畜牧局；3.黑龙江八一农垦大学动物科学技术学院）

蜂胶（porpolsi）是蜜蜂从植物的树芽、树皮等部位采集的树脂、挥发性物质并混入其上颌腺、舌腺、蜡腺等腺体分泌物和少量花粉经蜜蜂加工转化而成的一种具有芳香气味的胶状固体物[1-3]。蜂胶是蜜蜂用来防护、抵御病虫害和病原微生物的物质，也是修补巢房和内环境消毒杀菌的一种特殊物质。是大自然恩赐给人类的天然、无毒、无副作用的神奇物品。

蜂胶是一种固体粘性物质，是蜜蜂用于筑巢用的一种填充和粘合材料。外观呈褐色、灰褐色或青绿色。带有芳香气味，味苦。在低温下变硬、变脆，15℃以下时则变得硬而脆，失去粘性，25℃以上时变软，35～45℃时粘性很大，熔点65℃，比重为1.127左右。蜂胶的成分极为复杂，运用气相色谱-质谱联机等现代分析技术，从蜂胶中分析鉴定出100多种化学成分[4]。蜂胶中约含50%～55%的树脂、芳香油，30%～40%的蜂蜡，5%～10%的花粉。目前，科技人员从蜂胶中分离鉴定的成分有黄酮类、萜烯类、醌类、酯类、醇类、醛类、酚类、醚类、有机酸类和大量的氨基酸、酶类、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素E1、维生素A和多糖，尤其是蜂胶含有大量的黄酮类（20多种）和萜烯类化合物（15种多），它的许多功能均来自源于此。蜂胶是黄酮类化合物的宝库，而黄酮类化合物具有多方面的生理和药理活性，从而使蜂胶具有多方面的天然药物特性[5]。蜂胶不溶于水，可溶于乙醇、乙醚和氯仿等有机物。蜂胶的品质好坏与蜜源植物种类、多少关系密切。在夏季盛花时期，蜜源植物较多，从蜂箱中取出的蜂胶纯度高、杂质少。

蜂胶复杂多样的生物活性物质，使其具有独特的生理药理功能，也使得备受广研究者关注和广泛应用。目前已经证明蜂胶具有很强的抗菌、抗氧化、抗肿瘤、降血糖和降血脂等多种功能。蜂胶除了对人体有着广泛的医疗保健作用外，还在食品工业、日化及畜牧兽医等领域有着广泛的用途。

在兽医临床上，用蜂胶软膏治疗口蹄疫、传染性坏死菌病，创伤愈合快，而无化脓或疤痕形成。蜂胶用于动物烧伤和创伤的治疗，能促进组织再生、加快创伤愈合；用0.5 g蜂胶，喹嘧胺硫盐适量、可可油5 g，制成栓剂，治疗因滴虫而引起牛流产导致的子宫内膜炎，7～8 d后，恢复正常，滴虫消失，治愈率100%；蜂胶乳剂用于仔猪地方性支气管肺炎，用蜂胶液体石蜡浸液治疗羔羊粪石症、小牛中毒性消化不良等均收到很好的效果。刘瑞田等[6]报道，以蜂胶佐剂所制的鸡大肠杆菌多价蜂胶灭活苗，使用安全、免疫效果好，保护率100%，免疫期6个月，免疫后鸡群增重加快，产蛋率上升，发病与死亡率降低。说明具有独特优点的蜂胶制作的禽畜药剂，有极高的开发价值。

在治疗人畜乳腺炎方面，许多学者已做了不同尝试，并取得良好的效果。权利[7]用蜂胶内服和药渣热敷治疗人急性乳腺炎297例，3剂治愈率达到97%。在波兰，用蜂胶提取物治疗146头患有严重急性乳腺炎的奶牛，其中125头痊愈，痊愈率达到85.6%，且对抗生素有耐药性的微生物感染的乳腺炎效果明显。孙道德[8]以蜂胶提取物精制成0.5%注射液，给42头患有急性乳腺炎奶牛做乳基穴注射，1～2 d全部痊愈。李增举等[9]利用蜂胶合剂治疗奶牛隐性乳腺炎，效果显著。

我国是一个蜂产品生产大国，蜂胶资源充裕，但与美国、日本等发达国家相比较，在研究开发蜂胶方面起步较晚，应用产品不多。我国可以发挥得天独厚的优势，积极研究和宣传蜂胶，让更多的人认识它、研究它、开发它，让蜂胶更好地造福人类。

1 方法与材料

1.1 材料

蜂胶粉（河南长葛市海煜蜂产品有限公司），聚乙烯醇（PVA）17-88，PVA05-88（国药集团化学试剂有限公司），白及（云南白药集团天紫红药业有限公司），东蓑若碱（大同区医药总公司），吐温80，聚乙二醇，氮酮，丙二醇。

1.2 方法

1.2.1 蜂胶浸膏的制备

称取50 g蜂胶，用4倍量的95%药用乙醇进行浸渍提取，每2 d提取1次，一共进行3次提取，每天进行搅拌1次，放置12 h，然后进行过滤，对过滤后的滤液合并，最后浓缩成50mL。

1.2.2 基质膜制备参考熊良钟[10]方法进行。

（1）PVA的制备 称取PVA17-88、PAV05-88各100 g，用适量85%的乙醇，浸泡，过滤，反复进行3次，然后烘干。取烘干好的PVA17-88 20 g、PAV05-88 40 g，加适量蒸馏水溶胀，85℃水浴上搅拌至溶解，待其冷却后，然后加60%的乙醇配备成11%浓度的膜材，密封备用。

（2）白及胶浆的制备 将白及加工成豆粒大小，加8倍量蒸馏水浸泡3 d，温度控制在2～8℃，经常搅拌使其充分浸透，用双层纱布滤过，滤液加乙醇使其含醇量为70%，静置过夜，用单层纱布过滤，得絮状沉淀物，自然干燥，即得白及胶。然后称取一定量的白及干胶加15倍量的蒸馏水，水浴加热使其充分溶解，得白及胶浆备用。

（3）基质膜制备及稳定性考察 将处理好后的PVA，加适量的甘油、吐温-80，充分搅拌，然后倒于白及胶浆中（50～60℃）搅拌，同时伴以超声20 min，以便混合均匀，制成涂膜墓质PVA。按此方配制3份样品，pH值范围为5.5～6.5，进行为期室温15 d的pH值、成膜时间和表征观察。

1.2.3 成膜制备

将上述方法制备的基质膜，并依次加入25%蜂胶浸膏溶液，甲浪酸东莨若碱溶解15 mg，再依次加入4%丙二醇、2%氮酮、4%聚乙二醇-400，充分搅拌均匀，用乳酸调整pH值至5.5～6.5。样本静置观察。

2 实验结果

按照以上方法配制的基质膜分3个样本进行验证，其验证记过如下：

基质膜观察表明：pH值均在5.5～6.5范围内，成膜时间在5～6min，性状良好，可塑性较强，所以该基质膜的具有良好的稳定性，成膜效果较理想。

表1 不同pH值成膜比较Table 1 Film formation comparison with different pH value

成膜样本观察结果：混匀后形成的成膜液态呈棕褐色，涂膜已展开，可塑性强。但在样本静置观察可见样本4 h左右出现分层现象，可能由于膜体的缓慢释放药物作用有关，建议本样品在使用前应混合均匀后使用。

3 讨论

蜂胶是一种天然的广谱抗菌物质，研究发现蜂胶中的类黄酮物质对革兰阳性菌（葡萄球菌和链球菌等）、革兰阴性菌（大肠杆菌、肺炎球菌等）、真菌（白色念珠菌等）、病毒（艾滋病毒、疤疹病毒、口腔咽病毒、流感病毒等）、原生动物等具有抗病原微生物活性[11，12]，这些天然的生物活性是其在疾病的治疗应用上得以利用，并且具有巨大的潜在的药用价值。

试验利用蜂胶的化学特性并与成膜载体一起制备蜂胶贴膜，使其应用于对奶牛疾病的治疗。通过试验得到较为理想的性状稳定的基质膜，再通过蜂胶浸膏等配方组合，制备能对疾病起缓释治疗的蜂胶药物膜。选取聚乙烯醇（PVA）作为成膜材料是由于其水溶性高，并且具有良好的成膜性、柔软性、吸湿性。学者通过研究乳剂型涂膜基质的流变学[13]，证明用聚乙烯醇作为基质膜涂展性好，膜对皮肤的浸润性好，有一定的机械张度，并可剥离。而且涂布成膜后使药物均匀分布并缓慢释放，药效持久，对患处还有保护作用

[14]。当聚乙烯醇与具有吸收功能的皮肤时，能与皮肤紧密接触并可使药物易于释放，促进药物经皮渗透，提高疗效。白及胶与聚乙烯醇一样，都是良好的天然生物高分子材料，而且对人体有无毒性，安全性，能与其他生物材料有很好的相容性，利用他们制备药物载体能延长药物作用时间，同时也增强了疗效。白及有较强的粘附性，对痈疽溃疡的治疗有着非常好的效果，还具有收敛止血、消肿生肌等药理作用，并且与涂膜中的主药也能发挥协同作用[15]。白及能与聚乙烯醇任意融合，在短时间内就能成膜，膜质呈透明状态，质地柔软，适合外用。氮酮与丙二醇可以促进药物渗透，并且与东蓑若碱、吐温-80组合可以加强透皮效果。甲澳酸东蓑若碱具有强心、抗休克、抗粘膜损伤等作用，吐温-80可作为溶液表面活性剂、乳化剂和分散剂，聚乙二醇-400与其他分子材料也具有广泛相容性，也是很好的溶剂和增溶剂，吐温-80和聚乙二醇-400的使用增强了膜物质的溶解性和药物相容性，使膜透皮效果更好的同时，加强了成膜的稳定性。

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