阿米西达对水稻稻瘟病菌的毒力测定

韩路，靳学慧

（黑龙江八一农垦大学农学院，大庆163319）

稻瘟病在我省水稻主产区连年发生，病害程度逐年上升，严重制约着我省水稻的生产的发展和农民经济收入的提高[1]。因此，防治水稻稻瘟病的发生成为农业工作者必须重视的问题。采用施化学药剂一直是防治水稻稻瘟病主要的措施，而仿生药剂嘧菌酯的研发成功，使传统意义的化学农药有了新的突破。嘧菌酯作用机理：药剂作用于病原菌线粒体内膜上呼吸位点细胞色素b（cytb），阻碍呼吸作用的电子传递，抑制病原菌能量代谢[2]。对于真菌性病原菌的菌丝生长、产孢和孢子萌发都有很好的抑制作用[3]，目前，已成为代替三环唑的销量第一的杀菌剂。先正达公司最先出嘧菌酯的商品药剂——阿米西达，并在国内取得蔬菜生产杀菌剂专利，但在美国阿米西达则是注册用于水稻稻瘟病的防治。因此实验用阿米西达对水稻稻瘟病菌进行室内的毒力测定，探索用阿米西达防治水稻稻瘟病，希望为田间防治水稻稻瘟病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

稻瘟病菌93个菌株，由黑龙江八一农垦大学植物病理实验室提供。

1.2 供试药剂

25%嘧菌酯的阿米西达，由先正达公司提供。

1.3 测定方法

1.3.1 菌种的分离纯化

将保存在高粱粒培养基上的稻瘟病菌菌种进行活化，待高粱粒长满菌丝后，转接于PDA培养基平板上，置于25℃恒温条件培养。待菌落长满整皿时，转YPDA培养基上产孢。镜检挑单孢培养，得纯化菌株。菌落长满皿后，置于12℃恒温保存。

1.3.2 药剂对病原菌菌丝生长速率的影响

配制药剂母液，母液分别用定量无菌水稀释成所需浓度，将PDA培养基加热融化，待其冷却到40～45℃时，将配制好的不同浓度的药液加入适宜温度的培养基中，制成含不同浓度药剂的含药培养基，充分摇匀后移入直径为9 mm培养皿中制成平板培养基。以等体积无菌水的无药PDA平板培养基为对照。

用内径为5 mm打孔器制取纯化菌株菌饼，分别接种于含不同浓度药剂的培养基中央，每处理3次重复。恒温25℃培养箱黑暗培养7 d。采用十字交叉法测量菌落直径，计算各药剂处理对病菌生长的抑制率（抑制率公式如下）。求出毒力回归方程，计算药剂对病原菌的有效中浓度EC50。分析比较不同浓度下杀菌剂对供试菌株的菌丝生长速率的影响并建立敏感基线[4]。

1.3.3 药剂对病原菌孢子的抑制作用

用阿米西达配制含药PDA平板培养基，药剂浓度为4.64μg·mL-1。将纯化菌株进行产孢培养13 d后，无菌水冲洗下孢子，纱布滤掉菌丝，定量取孢悬液平涂于含药培养基上，以无药培养基作为对照。产孢培养，每隔12～24 h观察孢子萌发情况，查孢子数量，计算孢子萌发抑制率，DPS软件做LSD测验。

2 结果与分析

2.1 药剂对病原菌菌丝生长速率的抑制

室内测定结果表明，阿米西达对稻瘟病菌菌丝的生长有较强的抑制作用，但不同菌株对阿米西达的敏感程度有明显差异，BQBE-2的 EC50值11.3μg·mL-1是供试菌株中最不敏感菌株；HLYD的EC50值2.18μg·mL-1是供试菌株中最敏感。供试93个菌株的平均有效抑制中浓度（EC50）为4.64μg·mL-1（表1）。根据病原菌对药剂的抗药性分级标准，实验中所测得黑龙江省稻瘟病菌均对阿米西达敏感，抗药性指数在0.469 6～2.443 4之间（如表1）。黑龙江省各地的主要稻作区稻瘟病菌对阿米西达的抗性指数均在3以下，没有出现抵抗或高抗菌株。通过实验数据的分析，在黑龙江省哈尔滨、佳木斯、鸡西、双鸭山、鹤岗、绥化、大庆和牡丹江各市中，没有出现对阿米西达有明显抗药性的稻瘟病菌菌株。但是阿米西达对黑龙江省不同地区稻瘟病菌的抑制中浓度EC50存在一定差异。

表1 阿米西达对稻瘟病菌菌丝生长的影响（EC50/μg·m L-1）Table 1 Azoxystrobin to the influence of Magnaporthe grisea hypha growth

续表1 阿米西达对稻瘟病菌菌丝生长的影响（EC50/μg·m L-1）Table 1 Azoxystrobin to the influence of Magnaporthe grisea hypha growth

实验中共测得黑龙江省稻作区93个稻瘟病菌菌株的有效抑制中浓度EC50。并以测得的EC50值为依据。从0μg·mL-1开始，1μg·mL-1为截距，在0～12μg·mL-1范围内，EC50在截距的出现频率，最后做出EC50的频率分布图（如图1）。图1中，黑龙江省各稻瘟病菌菌株对阿米西达的敏感性频率分布曲线呈现为连续单峰曲线，没有出现敏感性下降的抗药性亚群体。因此，实验所测的93个稻瘟病菌菌株对阿米西达只有一个敏感水平，可以用这93个供试菌株的平均有效抑制中浓度（EC50值）作为黑龙江省稻瘟病菌对阿米西达进行田间抗药性监测的敏感基线[5]，得出黑龙江省稻瘟病菌对阿米西达的敏感基线值为4.64μg·mL-1。

图1 黑龙江省供试稻瘟病菌菌株对阿米西达敏感性频率分布图Fig.1 The frequency distribution of Magnaporthe grisea in Heilongjiang to Azoxystrobin

2.2 药剂对病原菌产孢量的抑制

在阿米西达浓度为4.64μg·mL-1（有效抑制中浓度）时，对稻瘟病菌产孢量有较明显的抑制作用，但不同菌株对其敏感性存在明显差异。与无药空白对照相比，菌株ZYWD、BLDJ-2、FZTH和SHAA-3对阿米西达较为敏感，产孢量明显减少，其抑制率分别为 97.73%、89.16%、88.37%和 87.87%；而菌株HGDH-5、FJCY、BQBE-1、BYYF-2、FJJQ-4和PKQY对阿米西达较不敏感，产孢量较少，其抑制率在60%以下（表2）。

阿米西达浓度为4.64μg·mL-1时，对稻瘟病菌孢子萌发有较强抑制作用，但不同菌株对其敏感性仍存在明显差异。与无药空白对照相比，菌株ZYWD、SHAA-3、FZTH和BLDJ-2对阿米西达最为敏感，其抑制率在81.91%～96.35%；菌株HGDH-5、BQBE-1和FJCY对阿米西达较为敏感，其抑制率在63.18%～72.83%；菌株FJJQ-4、PKQY和BYYF-2对阿米西达较不敏感，其抑制率在60%以下（表2）。

表2 阿米西达对稻瘟病菌株产孢量和孢子萌发的影响（阿米西达浓度为4.64μg·m L-1）Table 2 The influence of Magnaporthe grisea spore to Azoxystrobin（Azoxystrobin4.64μg·mL-1）

以上结果说明阿米西达既能抑制稻瘟菌菌丝生长又能抑制孢子萌发，对孢子产生和孢子致病力等都有显著的影响。这表明阿米西达在稻瘟菌整生长过程中都起到抑制的作用，不仅抗真菌侵入、抗真菌扩展，而且能明显地降低再侵染和初侵染的孢子基数并达到防治病害的目的。

3 结论与讨论

水稻稻瘟病在我省危害日益严重，选择新型药剂是除了培育新抗病品种的更好选择[6]。实验结果表明，阿米西达对水稻稻瘟病菌的菌丝生长、产孢和孢子萌发有一定的抑制作用，但不同菌株对阿米西达的敏感性存在明显差异。供试稻瘟病菌株对阿米西达全部抗性指数在3以下，说明稻瘟病菌对阿米西达是较敏感的。通过实验数据分析，对黑龙江省稻瘟病菌而言，阿米西达田间抗药性监测的敏感基线值为4.64μg·mL-1。在阿米西达浓度为4.64μg·mL-1时，能有效地抑制病菌的菌丝生长、产孢和孢子萌发，其中敏感菌株的产孢和孢子萌发的抑制率能达到90%以上，由此可以看出阿米西达对水稻稻瘟病病菌有很好的抑制效果。

［1］靳学慧，马汇泉.农业植物病理学（粮食作物和经济作物部分）［M］.赤峰：内蒙古科学技术出版社，1999.

［2］张传清，周明国，朱国念.稻瘟病化学防治药剂的历史沿革与研究现状［J］.农药学学报，2009，11（1）：72-80.

［3］王丽，石延霞，李聚宝，等.甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂研究进展［J］.农药科学与管理，2008，29（9）：24-27.

［4］方中达.植病研究法［M］.北京：农业出版社，1979.

［5］张舒亚，周明国，李红霞，等.嘧菌酯对稻瘟病菌的生物活性［J］.农药，2005，44（6）：275-277.

［6］杨明志.谭勇.稻瘟病发生的主要原因及防治技术要点［J］.中国农村小康科技，2008（4）：58.

［7］思彬彬，杨卓.甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂作用机理研究进展［J］.世界农药，2007，29（6）：5-8.