盐酸川芎嗪注射液对青霉素致痫大鼠血液流变学指标、血小板聚集率和血浆去甲肾上腺素水平的作用

张 霞 刘雨银 章正华 万楚成 夏云金 姜 铧 张端莲

盐酸川芎嗪注射液对青霉素致痫大鼠血液流变学指标、血小板聚集率和血浆去甲肾上腺素水平的作用

张 霞1刘雨银2章正华1万楚成1夏云金1姜 铧1张端莲3

十堰442000；2湖北医药学院附属十堰市人民医院干部病房；3武汉大学医学院人体解剖与组织胚胎学系； 通讯作者，刘雨银，电话：0719—8637908；E-mail：liuyuyin1964＠163.com

本文2010—11—03收到，2011—02—15修回，2011—02—16接受

癫痫是一种由多种病因引起的慢性脑功能障碍综合征，以脑神经元异常放电所致的突发、短暂、反复中枢神经功能失常为特征。盐酸川芎嗪（Tetramethylpyrazine，TMP）是从川芎的生物碱中分离得到的有效单体，可透过血脑屏障，因其疗效好、副作用少而被广泛用于脑血管疾病的治疗。已有研究报道，TMP可明显降低全血高切粘度、低切粘度、血浆粘度、红细胞聚集性、红细胞压积，增加红细胞变形性，从而降低血液粘滞性，防止血栓形成；TMP具有拮抗内皮素、去甲肾上腺素释放，对抗血管紧张素E及血管加压素等体液因子的缩血管效应；TMP能抑制小血管平滑肌痉挛、扩张小动脉而改善微循环。本文通过对青霉素致痫大鼠模型腹腔注射一定剂量TMP，观察其对癫痫大鼠血液流变学指标、血小板聚集率和血浆去甲肾上腺素水平的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

SD大鼠（由湖北医药学院实验动物中心提供）24只 ，雌雄不拘，体重200～250g。随机分为三组：手术对照组（A组）、青霉素致痫模型组（B组）和TMP治疗组（C组），每组8只。

1.2 试剂与仪器

主要药物和试剂：盐酸TMP注射液（批号0107001），常州制药厂生产；注射用青霉素钠（批号00109306），华北制药股份有限公司生产；二磷酸腺苷（ADP），上海源聚生物科技有限公司进口分装；ELISA试剂盒（德国BL公司）。

主要仪器：BL-410生物机能实验系统，成都泰盟电子有限公司生产；江湾I-C型立体定向器，第二军医大学器材处生产；LBY-NJ血小板聚集仪，北京普利生有限公司生产；法国产Stago全自动血凝仪及配套试剂；奥地利产安托斯三型酶标仪；日本产MEK-6108型全自动血细胞分析仪；LBY-N 6B自动血液黏度计，北京普利生有限公司生产。

1.3 实验方法

1.3.1 癫痫大鼠模型制备：用10%乌拉坦以10ml／kg体重腹腔注射麻醉后，将动物固定在立体定向器上，于大脑左、右两侧前卤后3mm，矢状缝旁开3mm行开颅手术，暴露大脑皮层记录区域（2mm×2mm），将银球电极置于左、右两侧的记录部位，信号输入生物机能实验系统，进行左、右两侧脑电记录。B、C两组大鼠用浸有青霉素溶液的明胶海绵（200u／mm3）置于左侧大脑皮层表面，诱发大鼠大脑皮层癫痫样放电，待癫痫放电20min后，移去明胶海绵，用浸有温热生理盐水棉球盖住创口。

1.3.2 药物的使用：A组，手术后腹腔注射生理盐水；B组，青霉素诱发癫痫20min后腹腔注射生理盐水；C组，青霉素诱发癫痫放电20min后，腹腔注射TMP（40mg／kg，参照临床用量）。各组所用溶液量相同。

1.3.3 实验指标及检测方法：于C组TMP注射30min后，分别采集三组大鼠心脏血7.4ml，立即分三管抗凝。（1）在含有0.4 ml（109 mmol／L）枸橼酸钠抗凝管中加入3.6ml全血，按常规操作制备富含血小板血浆（PRP）和乏血小板血浆（PPP）；在血细胞分析仪上计数PRP血小板，调整其血小板数至150×109／L；以3.0μmo l／L 的 ADP作为血小板聚集诱导剂，在血小板聚集仪上测定3min、5min、10min最大聚集率（%）PAG（3′）、PAG（5′）、PAG（10′）。（2）取全血1.8ml，加入含有109mmol／L枸橼酸钠（1∶9）抗凝管中，颠倒混匀，在血凝仪上测定血浆纤维蛋白原含量；（3）全血2ml注入含有ED—TA-K2的真空抗凝管中混匀，在血液黏度计上测定血液流变学指标；（4）取第二管剩余血浆，在酶标仪上用ELISA测定血浆去甲肾上腺素含量。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 各组血液流变学指标比较

TMP对青霉素致痫大鼠血液流变学指标的影响，结果见表1。

2.2 各组血小板聚集率和去甲肾上腺素含量变化的比较

TMP对青霉素致痫大鼠血小板聚集功能和去甲肾上腺素含量变化的影响见表2。

表1 各组大鼠血液流变学指标比较（±s，n均＝8）

表1 各组大鼠血液流变学指标比较（±s，n均＝8）

注：与 A组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与B组比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01

检测指标 A组 B组 C组全血高切粘度 （200s—1，mPa·s） 3.51±0.315 4.92±0.401） 3.49±0.3013）全血低切粘度（10s—1，mPa·s） 9.27±1.003 13.73±1.102） 9.68±1.0103）血浆粘度（mPa·s） 1.22±0.11 1.70±0.131） 1.30±0.103）红细胞压积 0.37±0.03 0.43±0.041） 0.35±0.033）红细胞刚性指数 5.81±0.47 9.16±0.811） 5.76±0.353）红细胞聚集指数 3.67±0.46 8.03±0.312） 4.17±0.524）红细胞变形指数 1.06±0.18 1.80±0.162） 1.04±0.204）纤维蛋白原（g／L） 1.78±0.69 3.13±0.771） 1.76±0.683）

表2 各组大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量变化（±s，n均＝8）

表2 各组大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量变化（±s，n均＝8）

注：与 A组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与B组比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01

检测指标 A组 B组 C组PAG（3′） 67.76±9.51 94.31±6.162） 69.34±6.694）PAG（5′） 58.29±5.15 89.57±6.641） 65.86±5.533）PAG（10′） 75.27±5.43 92.21±5.711） 76.48±5.124）去甲肾上腺素（μg／L） 54.21±12.36 82.17±9.042） 67.15±9.154）

3 讨 论

实验结果表明，青霉素致痫组大鼠去甲肾上腺素含量显著增高的同时，出现血液中红细胞刚性和聚集性明显增强，红细胞压积增高，红细胞变形能力明显下降，纤维蛋白原显著增多，致使全血粘度、血浆粘度等血液流变学指标出现异常；同时癫痫发作时血小板聚集率明显增高（P＜0.05或P＜0.01）。最终青霉素致痫组大鼠呈现粘、浓、凝、聚等血瘀证表现。

TMP为中药川芎的有效成分，化学名为四甲基吡嗪，是从川芎的生物碱中分离得到的有效单体，TMP可透过血脑屏障，是一种新型的钙离子拮抗剂［1，2］及自由基清除剂，除有扩张血管平滑肌作用外，还能抑制血小板凝聚，提高红细胞表面电荷，使受损的红细胞恢复变形能力，增强血液流动性［3］，同时通过分解血浆纤维蛋白原降低全血黏度，通过抑制ADP诱导的血小板聚集，对已聚集的血小板有解聚作用，且能抑制血小板活化，降低血小板表面活性，抗血栓形成，改善微循环［4，5］，因而具有对抗癫痫对血液流变性的应激损伤作用［6］。关于TMP改善血液流变性的机制可能在于其能改变血小板内环磷酸腺苷（c AMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的含量，减少磷脂酰肌醇4，5二磷酸（PIP2），抑制蛋白磷酸化，可显著减少静脉壁白细胞黏附，延缓并减轻微循环内红细胞聚集，加速红细胞和血小板运动［8］等。

黄智峰等［9］探讨了TMP对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用，发现TMP能延长缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的平均生存时间，直观地证明了TMP对缺氧缺血脑组织的保护作用。

王万铁［10］、马中富［11］报道 TMP可增加血小板内c AMP的含量，置换血小板膜上的Ca2＋，使其膜流动性增强，并阻断Са2＋对血小板激活和前列腺素代谢及抑制血小板线粒体耗氧量和氧化磷酸化作用，从而抑制血小板聚集。另有报道，TMP能够使癫痫大鼠海马内cGMP含量明显下降，而c AMP含量进一步增加。cGMP含量有一定的调节作用，脑内c AMP含量的进一步增加，反作用于细胞膜，改变膜通透性，减弱神经兴奋性，使发作停止或减弱，因而提高脑内c AMP水平可能有抗癫痫作用［12］。因此，观察TMP对青霉素致痫大鼠血液流变性、血小板聚集性和去甲肾上腺素含量的影响，无论对基础理论研究还是对临床治疗都有重要意义。

本文第一作者简介：

张 霞（1968～），女，汉族，副主任医师，硕士，主要从事恶性血液病基础与临床方面的研究

1 何荣杰，刁统美.TMP的临床新应用.中国误诊学杂志，2001，1（2）：307.

2 程先超，刘新泳，徐文方.TMP心脑血管药理学研究进展.中国医院药学杂志，2005，25（7）：661～663.

3 梁子均.血液流变学基础理论与临床应用.上海：上海医科大学出版社，1991：76～79.

4 陈泽涛.TMP在脑血管病治疗中的应用.中国中西医杂志，2003，23（5）：378～270.

5 曹成明.川芎的临床应用及其机理探讨.张家口医学院学报，2002，19（3）：28～29.

6 贺志安，张晨光，涂晓艳，等.川芎嗪对应激家兔血液流变学的影响.中国误诊学杂志，2006，6（13）：2 501～2 502.

7 荻柯坪，杜军英，常立功.TMP在徽血管运动中作用的研究进展.中草药，2002，33（10）：附8.

8 Paragh G.Treatment possibility of hypercholesterdaemia associated with hypertriglyceridaemia.Acta Biol Hung，1997，48（3）：359～367.

9 黄智峰，赵 玲，龚晓斌.TMP对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用.中华实用中西医杂志，2004，4（17）：2 545～2 546.

10 王万铁，林丽娜，徐正衸.川芎嗪对心脏换瓣患者血小板聚集功能的影响.中国中西医结合杂志2000；20（1）：25～27.

11 马中富，李天木，黎湛兴，等.慢性肺心病急性加重期血小板内Ca2＋、c AMP和TXB含量关系的探讨.中国急救医学，1998，18（5）：15～16.

12 解学孔.癫痫病学.北京：人民卫生出版社，1995：92～93.

盐酸川芎嗪注射液对青霉素致痫大鼠血液流变学指标、血小板聚集率和血浆去甲肾上腺素水平的作用

张 霞，刘雨银，章正华，等／湖北医药学院附属太和医院血液内科，十堰442000

目的：研究盐酸川芎嗪（TMP）对青霉素致痫大鼠的血液流变学指标、血小板聚集率和去甲肾上腺素含量的变化。方法：制备青霉素致痫大鼠模型，采用BL-410生物机能实验系统记录双侧大脑皮层癫痫样放电，放电稳定后，腹腔注射不同剂量TMP，待其抑制作用最明显时（30min后），采血检测血液流变学指标、血小板聚集率和去甲肾上腺素含量。结果：青霉素致痫组红细胞压积（Hct）、全血黏度、血浆黏度、血浆纤维蛋白原水平均高于TMP治疗组（P＜0.01），而脑血流量显著低于TMP组（P＜0.01），血小板聚集率和血浆去甲肾上腺素水平比较亦有显著性差异（P＜0.01）。结论：TMP对青霉素致痫大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量有明显影响；TMP在血液流变性方面有对抗应激损伤的作用。

Effect of Chlorpromazine Hydrochloride Injection on Peni-cillin-induced Epilepsy Rat Blood Rheology，Platelet Ag—gregation and Plasma Norepinephrine Levels

Zhang Xia，Liu Yu yin，Zhang Zhenghua，et al／Affiliated Taihe Hospital of Hubei University of Medicine，Shiyan 432000

Tetramethylpyrazine；Epilepsy； Hemorheology；Platelet aggregation rate；Noradrenaline

R331

A

1005—1740（2011）02—0016—03

1湖北医药学院附属太和医院血液内科，邮政编码

Objective：To study effect of tetramethylpyrazine hydrochloride（TMP）on penicillin-induced epileptic rats blood rheology，platelet aggre-gation rate and norepinephrine content changes.Method：Preparation of penicillin-induced epileptic rats，and a BL-410 bio-functional experimental system recorded a two-sided epileptiform discharges in the cerebral cor-tex，epileptiform discharges after stabilization，intraperitoneal injection of different doses of TMP，and its inhibitory effects of the most obvious（30 minutes），blood rheology of blood testing，platelet aggregation rate and norepinephrine levels were detected.Results：Penicillin induced epilepsy group hematocrit（Hct），blood plasma fibrinogen，quantitative plasma viscosity，viscosity were higher than the TMP group（P＜0.01），while cerebral blood flow was significantly lower than the TMP group（P＜0.01）.Platelet aggregation and plasma noradrenaline levels were also sig—nificant difference compared with two group（P＜0.01）.Conclusion：TMP has effect on penicillin-induced epileptic rats platelet aggregation rate and norepinephrine levels.TMP with respect to hemorheological antagonistic effect of stress injuries.

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